禽流感防治取得系列成果

本项目研究人员采用重组DNA技术和反向基因操作技术，研制成功了“重组HSN1亚型禽流感病毒灭活疫苗”和“H5亚型禽流感重组禽痘病毒载体疫苗”2种疫苗。疫苗高度安全、抗原针对性强，免疫效力高、持续期长，能够对各种禽流感提供有效保护；并且还研制成功了具有国际先进水平的“H5、H9亚型禽流感灭活疫苗”；建立了RT—PCR和抗原捕捉ELISA等快速诊断技术。     

中药制剂SHY对新城疫、禽流感H9、H5亚型病毒的抑制和攻毒保护效果

本试验利用蔷薇科植物提取物（SHY）分别与新城疫、禽流感H9、H5亚型病毒作用后,接种10 d SPF鸡胚,评价SHY对病毒的抑制作用;给21 d SPF鸡连续口服该中药提取物5 d后,分别用新城疫、禽流感病毒攻击,观察对SPF鸡的保护作用.结果表明：SHY测试剂量对SPF鸡胚没有毒性;20、10、5和2.5 mg/mL提取物与一定量的新城疫、禽流感H9亚型病毒作用后,鸡胚全部存活,病毒测定为阴性;与禽流感H5亚型病毒作用后,2.5 mg/mL组不能完全保护鸡胚存活（6/8）,病毒分离阳性.在攻毒试验中,SPF鸡分别按60、50、40和20 mg口服后,用新城疫和禽流感H9亚型攻毒保护分别为5/5、5/5、5/5和4/5.显示SHY不但能显著抑制新城疫、禽流感H9和H5亚型在鸡胚上增殖,而且能保护新城疫、禽流感H9亚型病毒的攻击.对SHY深入的研究,有望开发出有效抗禽流感药物.     

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。     

禽流感病毒分子生物学研究进展

禽流感是由A型流感病毒引起鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑等家禽的传染病。禽流感病毒H5N1亚型于1997年、H9N2亚型于1999年、H7N7亚型于2003年和H5N1亚型于2004年先后发生感染人的事件，人们不得不重新认识禽流感的公共卫生意义。本文综述了禽流感病毒的基因组、主要蛋白及其功能、毒力分子学基础、分子生物学诊断和疫苗研究等。     

我国近阶段禽流感的流行特点分析与防控对策建议

文章在分析H5亚型、H9亚型、H6亚型及H7亚型禽流感形势的基础上,研判了我国禽流感的流行趋势,并提出了防控对策.     

H5亚型禽流感研究势态——基于Citespace的文献计量分析

为准确把握H5亚型禽流感的研究进展，本研究基于CNKI文献数据库中的393篇文献和Web of Science(WOS)文献数据库中的1 560篇文献为研究样本，通过信息可视化技术对2个数据库中的文献样本的发文国家、文献数量、高频被引文献、高频关键词、主要发表作者和机构等进行分析。结果表明:1)国际上中国和美国在该领域的研究较多，两国发文量占比可达56.80%；每年文献数量与禽流感疫情的严重程度密切相关。与CNKI文献样本相比，WOS文献样本的文献数量、高频被引文献的被引频次更具有优势，并且WOS文献样本中发文机构之间和发文作者之间的合作更密切。2)高频被引文献和高频关键词在一定程度上反映了该领域的研究热点，主要包括野鸟导致H5亚型禽流感病毒的传播和进化；H5亚型禽流感的流行病学、致病机制和免疫疗法；重组疫苗、灭活疫苗和基于血凝素HA的广谱疫苗等新型疫苗研发；H5亚型禽流感病毒突发的防控措施等内容。本研究认为在未来疫情的长期监测与预测、病毒的快速检测技术和新型疫苗的开发等仍是研究热点，为H5亚型禽流感领域工作者提供参考价值。     

江苏地区H3亚型禽流感的流行病学调查分析

H3亚型禽流感具有很强的宿主适应性,且发生继发感染或混合感染时危害较大,随着其感染性和毒力不断增强,加强H3亚型禽流感的流行病学调查具有重要的公共卫生学意义。为掌握江苏地区H3亚型禽流感的发生及流行情况提供依据,针对江苏部分地区疑似H3亚型禽流感发病情况,在盐城市和南通市两地各选择1个具有一定规模,且经临床诊断发现疑似H3亚型禽流感发病的蛋鸡养殖场为调查点,对其正常鸡群血清样本的H5、H7、H9、H3亚型禽流感病毒抗体滴度进行检测。结果表明：盐城市调查点正常鸡群的H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体滴度平均值分别为6.9、7.0、7.2,南通市调查点正常鸡群的同类型抗体滴度平均值分别为9.2、9.2、9.0,二者正常鸡群H5、H7、H9亚型禽流感病毒的平均抗体水平较正常。在无疫苗免疫情况下,两个蛋鸡养殖场正常鸡群的H3亚型禽流感病毒抗体滴度平均值分别为4.5、4.3,且变异系数较大,分别为39.9%、46.8%。结合对病死鸡的临床观察及解剖结果表明,两个蛋鸡养殖场可能存在H3亚型禽流感病毒感染并导致蛋鸡发病死亡。     

高致病性禽流感免疫程序

一、种鸡、蛋鸡免疫雏鸡7～14日龄时,用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行初免,3～4周可再进行1次加强免疫。开产前再用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行强化免疫,以后根据免疫抗体检测结果,每隔4～6个月用H5N1亚型禽流感灭活苗免疫1次。二、商品代肉鸡免疫(推荐程序)7～14日龄时,用H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫1次。三、种鸭、蛋鸭、种鹅、蛋鹅免疫雏鸭或雏鹅14～21日龄时,用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行初免。间隔3～4周,再用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行1次加强免疫。以后根据     

免疫金探针快速检测禽流感病毒研究

本试验将兔抗禽流感H5、H9亚型病毒抗体纯化后,分别与制备的胶体金研制成免疫金探针,用改良的渗滤法安全快速地检测被检材料中禽流感H5、H9亚型病毒。试验表明,该法对禽流感H5、H9亚型病毒的检测灵敏度分别为1.62μg.ml-1和1.25μg.ml-1。对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。阻断试验和交叉试验表明该法有很高的特异性。对禽流感H9亚型病毒人工发病鸡的病毒检测阳性率为70%,与临床疑似病例禽流感病毒分离的阳性符合率为100%。     

蛋鸡禽流感（H5）免疫效果的跟踪调查

自2004年以来,邹城市对禽流感（H5）实行强制免疫,并且免疫率100%,使用疫苗是重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）。为了追踪H5亚型禽流感疫苗的免疫效果及其免疫抗体（HI）消长规律,探索本辖区H5亚型禽流感灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）的免疫程序,     

天气炎热 蛋价上涨

由国家禽流感参考实验室负责研制的H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗、H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗已经取得成功，这两种新型疫苗目前已通过国家验收。新型疫苗能够彻底切断高致病性禽流感——H5N1亚型禽流感病毒通过水禽向家禽、哺乳动物和人类传播的传播链。     

高致病性禽流感的流行特点及防治措施

根据禽流感病毒致病性和毒力的不同,可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感。禽流感病毒有不同的亚型,由H5和H7亚型毒株(以H5N1和H7N7为代表)所引起的疾病称为高致病性禽流感(HPAI)。禽流感的潜伏期从数     

我国禽流感快速检测技术取得突破

从近日举行的国家科技攻关课题“疯牛病、禽流感病原检测技术研究专家验收会”上获悉,我国禽流感快速检测技术获重大突破:研制的禽流感荧光RT—PCR检测试剂盒,使禽流感检测时间从过去的21天缩短到4小时,还通过了禽流感病毒检测的4项国家标准。该成果已在全国16个检验检疫局、24个出口养禽企业、11个省级动检站得到了应用。由北京市检验检疫局主持的该项课题自2002年实施以来,利用分子生物学技术,建立了具有独立知识产权的禽流感病毒通用和禽流感病毒H5、H7、H9亚型荧光RT—PCR快速检测技术。通过的4项国家标准是:《禽流感病毒通用荧光…     

银翘散体外抗禽流感病毒的研究

文章探讨银翘散在鸡胚、MDCK细胞上对H9亚型、H5亚型禽流感病毒的直接灭活、治疗和预防作用。结果表明,在鸡胚中银翘散对H9亚型、H5亚型禽流感病毒直接灭活、治疗和预防浓度分别是31.25、15.625、62.5 mg.mL-1。在MDCK细胞上银翘散对H9亚型禽流感病毒直接灭活、治疗和预防浓度分别是7.812、125、125 mg·mL-1,对H5亚型禽流感病毒直接灭活、治疗和预防浓度分别是15.62、125、250 mg·mL-1。     

农业前沿

科研人员经过近1年的努力，在攻克禽流感病毒H5亚型快速检验检疫技术基础上，近日又攻克了禽流感病毒其他亚型的快速检验检疫技术难关，建立了与鸡胚病毒分离敏感性基本一致的荧光RT-PCR快速检测禽流感病毒的     

不同疫苗接种对鸡免疫学功能的影响试验

为验证不同疫苗免疫对鸡免疫学功能的影响,采用两批市售的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗注射14日龄鸡,同时按0.3 mL·只-1注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）,并同时设单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组和健康对照组,每组鸡各10只,分别于疫苗注射后14、21和28 d,对各组鸡采血,分离血清,进行H5亚型禽流感HI抗体效价测定。结果表明：注射后14、21和28 d,第1组（新支流三联180010900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:415.6,第2组（新支流三联180020900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:445.7;第三组单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组鸡血清中H5亚型禽流感抗体效价分别为1:64.0、1:194.0和1:388.0,健康对照组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价均不高于1:24.3。说明接种2种疫苗试验鸡血清H5亚型...     

H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立

【目的】建立H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交鉴别诊断方法。【方法】在H5和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的保守区段内,选择设计2对引物,RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pGEM-T-H5与pGEM-T-H9。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针与生物素标记引物。将探针通过紫外交联方法固定在带正电荷的尼龙膜上,用生物素标记引物扩增特异性片段,扩增产物经热变性后与探针进行杂交,杂交后显色,出现明显蓝紫色斑点的判定为阳性,无斑点判定为阴性。【结果】利用建立的反向斑点杂交方法检测,H5、H9亚型禽流感病毒的血凝效价分别可达到2-9.6和2-11.9,杂交特异性好,且2亚型间无交叉反应。【结论】建立了H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,可以实现H5与H9亚型禽流感病毒的鉴别诊断。     

禽流感及其防控措施

流感病毒分为A(甲)、B(乙)、C(丙).目前,从禽分离到的流感病毒均为A型流感病毒,有17种H亚型(H1～H17)和9种N亚型(N1～N9),它们可以组合成153种不同的病毒亚型组合,例如H5N1、H7N2、H7N9、H9N2等.从世界范围内分离的禽流感病毒来看,绝大部分H5亚型禽流感都是对鸡呈高致病性的,H7亚型禽流感病毒对鸡致病性从低到高都有,而H9等其他亚型禽流感病毒基本都是低致病性的.     

湖南洞庭湖区12株H9N2亚型AIV全基因序列的进化分析

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。【结果】12株H9N2亚型禽流感毒株HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性病毒。12株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因进化比较同步,均处于DK/HK/Y280/97分支,而6个内部基因(M、PB2、PB1、PA、NA、NS)与高致病性禽流感H5亚型毒株呈现不同程度重组现象,且与H7N9亚型毒株基因的核苷酸同源性很高,很有可能为其提供内部基因。【结论】湖南省洞庭湖地区H9亚型禽流感病毒的遗传演化较为复杂,存在广泛的基因重组现象。     

H5、H7、H9亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中H5、H7、H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)编码基因,使用DNAStar软件比较分析筛选出特异的保守片段,设计3对引物H5-P1/H5-P2、H7-P3/P4和H9-P5/P6。在此基础上,建立了H5、H7、H9亚型禽流感的三重RT-PCR检测方法,本方法可同时检测出样品中的H5、H7、H9亚型禽流感病毒。敏感性试验结果表明,该方法检测H5、H7、H9亚型禽流感RNA的敏感性分别达2.80、10.50、5.73 pg/μL,该方法检测其他相关病毒时均为阴性,具有很高的特异性,此外,该方法具有良好的重复性。利用所建立方法对240份禽流感临床样品进行检测,结果与血凝试验和血凝抑制试验结果的符合率为100%。此诊断方法检出时间早,且特异、敏感、经济、快速,可普遍推广,在禽流感诊断和防制中具有重要意义和应用价值。