钙离子对曲霉原生质体的保护与促再生效应

研究了光照和黑暗条件下,钙离子浓度,处理时间对曲霉原生质体的保护和促再生效应。结果表明：黑暗下钙处理使原生质体数量比对照高,９ｈ处理比对照原生质体数量高达１．４３倍和１．６７倍,而光照下,钙处理反而使原生质体数量比对照低。黑暗下,不同浓度钙处理使黑曲霉原生质体再生提高１．４７倍到３．４０倍,使米曲霉提高１．０８倍到２．５８倍,二菌株钙促再生的最佳处理时间分别为２ｈ和４ｈ,最大再生率分别为２８．０８     

蛋白酶对曲霉原生质体稳定性再生及融合的影响

４种蛋白酶对黑曲霉，米曲霉原生质体稳定性，再生有主融合的研究结果表明，蛋白酶用于原生质体灭活前或后保温均显著降低原生体数量，同时提高原生质体再生率及灭活性原生质体融合指数。蛋白酶安全，无毒可以替代常规促融合剂聚乙二醇。     

复合氮源对土曲霉洛伐他汀生物合成的影响

【目的】研究不同复合氮源对土曲霉生物合成洛伐他汀的影响。【方法】以酵母粉、蛋白胨、花生粉、燕麦粉、玉米浆和黄豆粉分别为复合氮源,通过摇瓶培养检测培养过程中洛伐他汀产量及其关键中间代谢物2-甲基丁酸盐和monacolinJ的积累量。【结果】以蛋白胨为氮源时,土曲霉细胞比生长速率最大,为8.06d-1;以花生粉为氮源时,洛伐他汀比产物合成速率最大,为1.44mg/(g·h),同时培养过程中2-甲基丁酸盐和monacolinJ对细胞得率明显高于其他氮源,均约为玉米浆的4倍;以酵母粉为氮源时,2-甲基丁酸盐的合成速率是monacolinJ的4倍,其monacolinJ转化率最高(92.0%),约是玉米浆的1.6倍。【结论】不同复合氮源不仅影响次级代谢的碳代谢流,还可能通过调控洛伐他汀合成途径中的关键酶(LovD或LovF)影响其生产。     

稻瘟病菌原生质体的制备和再生菌株的致病性

以稻瘟病（Ｍａｇｎａｒｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ）菌株ＺＡ４９、１３１为供试菌株,进行原生质体的制备试验。结果表明：用９种酶均能消化该菌细胞壁,并获得一定数量的原生质体;产生原生质体效率最高的是酶Ｎｏｖｏｚｙｍ ＾ＴＭ２３４和Ｄｒｉｓｅｌａｓｅ,且这两种酶以１０ｍｇ／ｍｌ浓度产生的原生质体数量最多,消化２￣３ｈ后即可获得相当数量的原生质体,最适作用温度分别为３０℃和３２℃。以几丁质降解酶与Ｎｏｖｏｚｙｍ ＾ＴＭ２３４或Ｄｒｉｓｅｌａｓｅ混且时对制备原生质体有很好的增效作用。作用认为,Ｎｏｖｏｚｙｍ ＾ＴＭ２３４和Ｄｒｉｓｅｌａｓｅ的作用浓度以５ｍｇ／ｍｌ最为经济、实用。所制备的原生质体均能再生菌丝和具有产生与原菌株相同致病性分生孢子的能力。     

鸡腿菇原生质体制备与再生研究

以鸡腿菇双核菌丝为材料,利用溶壁酶制备原生质体,采用单因素试验确定最佳条件。结果表明,原生质体产量最高的条件是取菌龄为5 d的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,在酶解温度30℃、酶浓度20 g/L、菌丝量20 g/L的条件下酶解3 h,制备的原生质体量为2.5×107个/m L。将制备的原生质体稀释并涂布于再生培养基,再生率为10.9%,研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。     

水稻纹枯病菌原生质体制备与再生条件的优化

为获得进行水稻纹枯病菌遗传转化所需的高质量原生质体,选用该病菌强致病力菌株GD-118,分别从酶种类、菌龄、酶解时间、酶解温度、酶液pH值和渗透压稳定剂及其浓度6个方面优化了原生质体的制备条件,从酶解时间和渗透压稳定剂及其浓度2个方面优化了原生质体的再生条件。结果表明:优化后的水稻纹枯病菌原生质体制备的最佳条件组合是"纤维素酶+溶菌酶+崩溃酶"组合酶、总酶终质量浓度10mg/mL、菌丝菌龄15h、酶解时间3h、酶解温度35℃、酶液pH5.6、以0.6mol/LMgSO4.7H2O为渗透压稳定剂,此最佳条件组合所制备的原生质体产率高达4.00×107/g;原生质体最佳的再生条件是酶解3h的原生质体在含1.0mol/L甘露醇的再生培养基上26℃时进行培养,在此条件下可获得最佳的再生效果,再生率为39%。     

平菇原生质体制备及再生培养研究

平菇菌丝原生质体的释放以菌龄４～６ｄ的幼嫩菌丝,用２％Ｌｙｗａｌｚｙｍｅ采用０．６ＭＫＣｌ为渗稳剂在ｐＨ值为５．５、温度为３５℃、酶解２～２．５ｈ生长较好,可达１０７个／ｍＬ,孢子释放原生质体在１．５％溶壁酶和１．５％纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达１００％。原生质体再生以２号培养基在０．６Ｍ甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达１２．３％。     

黑曲霉原生质体形成与再生影响因子的研究

运用正交试验设计研究酶系统、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂等因素对黑曲霉原生质体形成与再生的影响,确定黑曲霉原生质体形成与再生的最佳条件,获得高产原生质体,其浓度可达3.0×106个/mL,再生率达25%以上。并于欧林巴斯相差显微镜下观察了黑曲霉原生质体的形成过程。     

高粱红曲菌M-3原生质体制备与再生

通过单因素及正交试验优化,拟建立高粱红曲菌M-3的菌丝高效制备和再生原生质体的优化方法。试验结果表明,在以1.0mol·L~(-1)山梨醇(pH8.0)为高渗透稳定液,以纤维素酶(0.3%)和蜗牛酶(0.3%)为裂解酶的条件下,考查不同酶解时间、酶解温度及酶解pH等单因素对原生质体形成与再生的影响;在单因素试验的基础上,采用正交设计试验确定原生质体制备与再生的最佳工艺参数为:酶解时间2h、pH值为6.0、温度32℃,在此工艺条件下,原生质体形成数为3.000×10~6个·mL~(-1),原生质体原生质体再生率为19.33%(再生菌落数为5.80×10~5个·mL~(-1))。     

一株木霉菌SWFC1511原生质体形成及再生条件的研究

研究了一株木霉菌SWFC1511菌株原生质体的制备及再生条件,并观察其原生质体释放过程。结果表明:木霉菌SWFC1511原生质体制备的最佳条件为:菌丝培养20 h后,用比例为1∶3的2%溶菌酶与2%蜗牛酶为酶解液,在35℃下酶解3 h后,原生质体的产量较高。所形成的原生质体在再生培养基1上的再生率较高。     

木霉菌T23菌株原生质体制备及再生研究

本文研究了木霉菌T23菌株原生质体制备及再生条件,并对原生质体的释放和再生过程进行了系统的观察。结果表明,木霉菌T23菌株原生质体制备的最佳条件:菌龄为24h,裂解酶采用崩溃酶,酶浓度为15mg.ml-1,酶解时间在3～4h之间,酶解温度以30～35℃时最为适合。观察到木霉菌以菌丝断裂方式释放原生质体,以产生不规则突出的方式进行再生。     

枯草芽孢杆菌Snb2原生质体制备和再生研究

研究了青霉素、甘氨酸、溶菌酶浓度、酶解温度、菌龄、再生培养基对生防芽孢杆菌Snb2原生质体的形成与再生的影响。培养液中青霉素和甘氨酸的终含量分别为0.3%和1.0%时,菌株Snb2的生长量最佳;菌株原生质体形成的最佳条件是,溶菌酶浓度为2.0mg·mL-1,酶解温度为35℃,生产原生质体的最佳菌龄为对数生长中期;在最佳再生培养基HCNB培养基上,原生质体再生率为66.0%。     

草莓原生质体的培养和植株再生

通过对已分离提纯的草莓原生质体的培养研究 ,比较得出以KM为培养基 ,以 0 .4mol L葡萄糖和 0 .1mol L蔗糖或仅以 0 .5mol L葡萄糖作碳源 ,采用低溶点琼脂糖包埋的培养方式 ,培养密度采用 1× 10 6个 mL ,原生质体出现分裂和小愈伤组织形成的时间都较早。以MS1 、MS2 、MS3 为培养基、采用分步诱导的方法 ,能顺利诱导产生新植株 ,并在MS培养基上生根良好     

木霉菌原生质体的制备和再生的研究

采用正交拉丁设计对影响木霉菌原生质体制备和再生的条件进行了系统研究。结果表明：木霉菌原生质体制备受到缓冲体系、渗透压稳定剂、木霉菌菌龄、细胞壁降解酶的种类、酶解时间和再生培养基的影响，而不受木霉菌株系的影响。其中以磷酸缓冲体系和蔗糖为渗透压调节剂的降解体系为最佳，木霉菌菌龄以培养20h较好，崩溃酶对木霉菌细胞壁的降解效果好，酶解时间以4h为最佳，再生培养基以基础培养基和NaCl为渗透压调节剂为最佳。     

龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)原生质体制备与再生条件研究

报道了龟裂链霉菌（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ ｒｉｍｏｓｕｓ） 原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在 Ｓ生长培养基中加入φ＝ １ ％ 甘氨酸进行菌丝体培养２４ ｈ ,原生质体制备最佳条件为：溶菌酶浓度φ＝ ３ ％ 、酶解温度２８ ℃、酶解时间９０ ｍｉｎ ,其制备的原生质体数达到６ ．０ 亿个／ ｍ Ｌ 以上;原生质体最佳再生培养基为 Ｒ５ 再生培养,其再生率达到４６ ％ 。     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李（ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ．）原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０７个／ｇ和９５％．以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

绿色木霉菌T23原生质体的制备和再生

试验研究了绿色木霉T23菌株原生质体制备及再生的适宜条件,并对原生质体的释放和再生过程进行了形态观察。结果表明:绿色木霉T23菌株原生质体制备的最佳条件:菌龄为24 h,酶浓度为15 mg/mL,酶解时间为3~4 h,酶解温度为30~35℃。观察到木霉菌以菌丝断裂方式释放原生质体,以2种方式进行再生。