产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium implicatum)对南方根结线虫生防潜力

 由于化学杀线剂给环境带来了污染问题,寄生线虫的生防真菌成为研究热点。为进一步鉴定和筛选高效食线虫真菌,从山东日照五莲烟草北方根结线虫卵中分离到1株较高应用潜力菌株WLE1。根据形态学和rDNA-ITS序列分析方法鉴定该菌为交枝顶孢Acremonium implicatum。该菌是1株能够产生几丁质酶的食线虫真菌,在第4天几丁质酶活性到达高峰,为18.49 μmol·h^-1·mL^-1 ,直到第16天依然维持较高活性;活性电泳测定其几丁质酶分子量分别为98.0、82.9、70.2和35.9 kDa;交枝顶孢几丁质粗酶液处理南方根结线虫卵,第7天卵的孵化抑制率为80.17%。该菌能够寄生南方根结线虫卵、2龄幼虫和雌虫。第6天卵和2龄幼虫的寄生率分别为82.11%和73.97%。说明具有高效产生几丁质酶特性且能寄生南方根结线虫不同生活史阶段的交枝顶孢WLE1对南方根结线虫具有巨大生防潜力。     

聚多曲霉Snef210对南方根结线虫毒性的研究

蔬菜根结线虫病在我国乃至世界危害日益严重,安全防控该病害成为目前急需解决的农业生产问题。本研究筛选到一株可毒杀南方根结线虫Meloidogyne incognita的生防真菌Snef210,经形态学和分子生物学鉴定为聚多曲霉Aspergillus sydowii(Bain.et Sart.) Thom et Church。该菌株发酵液对南方根结线虫2龄幼虫(J_2)具有很强的毒杀作用,原液处理24 h后校正死亡率达90.1%,处理3 d后对卵孵化的抑制率达92.8%。盆栽试验中,与对照相比,菌株发酵液10倍稀释液土壤处理对番茄根部的根结减退率为66.7%。聚多曲霉代谢产物丰富,多用于抗菌和抗肿瘤的研究,本文首次发现其对南方根结线虫有效,是一类潜在的控制植物线虫病害的新型生防因子。     

根结线虫生防真菌交枝顶孢原生质体的制备与再生体系构建

本研究以根结线虫生防真菌交枝顶孢Acremonium implicatum为供试菌株, 探究了菌龄?降解酶种类?酶解温度和时间?不同渗透压稳定剂?不同pH等因素对其原生质体制备的影响, 并建立了交枝顶孢原生质体制备体系; 制备的原生质体在SR培养基上再生率达到17.78%?此外, GFP遗传转化菌株的获得充分表明制备的原生质体可作为后续遗传转化材料, 为进一步研究交枝顶孢对根结线虫的生防机理奠定基础?     

华南地区主要番茄品种对南方根结线虫的抗性评价

通过人工接种方式, 对华南地区番茄主要栽培品种对优势根结线虫——南方根结线虫（Meloidogyne incognita）的抗性进行了评价。结果表明,广东栽培品种年丰、红宝石、新星、福安、粤红玉、穗丰、金丰、益丰、丰顺、大丰顺、满丰和法国品种SAINT PIERRE均高度感病; 而法国品种 PIERSOL VFN高度抗病,根结率为0。根据SAS8.0多重比较分析表明,在F0.01的水平上, 品种PIERSOL VFN与其余品种之间对根结线虫的抗性均存在显著性差异,而其他12个品种间对根结线虫的抗性差异不显著。     

防治南方根结线虫的根瘤内生细菌的筛选及鉴定

根结线虫的严重发生给农作物生产造成巨大经济损失,生物防治是控制该病的一种安全有效措施。本研究从448株根瘤内生细菌分离株中筛选出3株对南方根结线虫有较好防效的生防细菌Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000,3个菌株发酵滤液对南方根结线虫2龄幼虫（J2）均有高毒杀活性,处理24 h校正死亡率达85%以上,同时对卵孵化具有抑制作用,并可促进番茄种子生长。盆栽试验结果表明,3个菌株发酵液灌根处理均能显著减少根结数和卵囊数,相对防效为37.95%~44.51%,同时促进番茄植株的生长。经形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定菌株Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000分别为氧化微杆菌Microbacterium oxydans、油菜假单胞菌Pseudomonas brassicacearum和蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus。氧化微杆菌为首次报道对根结线虫有效的生防菌株。这些根瘤内生细菌菌株的发掘,为植物线虫病害的生物防治提供了新的微生物资源。     

响应面法优化根结线虫生防真菌Snef5的发酵工艺

为提高生防真菌Simplicillium chinense Snef5的杀线虫活性,本研究采用响应面法对其发酵条件进行优化。首先,采用Plackett?Burman法筛选出有显著效应的3个因素：初始pH值、蔗糖和MgSO₄·7H₂O用量,而后通过Box?Benhnken设计和响应面分析法对其进行分析,获得了优化的最佳初始pH值为6.74,蔗糖含量4.19%,MgSO₄·7H₂O含量0.04%。经摇瓶和发酵罐发酵验证,该理论预测值与实测值无显著差异;优化后的发酵液杀线虫活性与原始发酵液相比,摇瓶发酵与30 L发酵罐产出的发酵液对南方根结线虫2龄幼虫的致死率分别提高了20.6%和21.3%,显示出较好的优化效果。试验结果对生防真菌的发酵及实际应用具有重要指导作用。     

Suppression of clubroot and Verticillium yellows in Chinese cabbage in the field by the root endophytic fungus, Heteroconium chaetospira

Chinese cabbage seedlings inoculated with an isolate of the hyphomycete, Heteroconium chaetospira, were transplanted to the field. After 3 months, they showed a 52–97% reduction in clubroot and a 49–67% reduction in Verticillium yellows compared with noninoculated controls. H. chaetospira colonized the cortical cells, especially in the root tip region. Infected plants showed no disease symptoms. The infection process involves the formation of appressoria on the cell surface and the subsequent growth of hyphae within cells. H. chaetospira colonized 18 plant species, indicating a wide range of hosts. It may have potential as a biocontrol agent for clubroot and Verticillium yellows.     

交枝顶孢霉杀柑橘全爪螨活性及其生物学特性研究

为了明确交枝顶孢霉Acremonium implicatum CQBBW8的杀螨活性及其生物学特性,采用触杀毒力法检测CQBBW8菌株对柑橘全爪螨的致死率,通过单因素试验测试不同培养基、碳源、氮源、温度、pH及紫外线对CQBBW8菌株生长、产孢及其分生孢子萌发的影响。结果表明,CQBBW8菌株对柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)的校正致死率为54.42%,LC_(50)为1.2×10~6个/mL,LT_(50)值为5.175 9d。最佳生长和产孢培养基分别为PDA和SEA;菌丝生长最适碳源和氮源为甘露醇和蛋白胨,产孢最适碳源和氮源为可溶性淀粉和氯化铵;最适生长温度为25℃,最适产孢和分生孢子萌发温度为30℃;最适生长和产孢pH为6.0,最适萌发pH为7.0;紫外线对菌丝生长影响不明显,对产孢影响较大,紫外线照射时间越长,孢子萌发率越高。综上,CQBBW8菌株对柑橘全爪螨有较强的毒力,对营养需求不高,环境适应性较强,具有开发为杀螨真菌制剂的潜力。     

Nematicidal fluorescent pseudomonads for the in vitro and in vivo suppression of root knot (Meloidogyne incognita) of Capsicum annuum L

BACKGROUND: Considerable attention has been paid to plant‐growth‐promoting rhizobacteria (PGPR), especially the fluorescent group of Pseudomonas species, as the best alternatives to chemicals for facilitating ecofriendly biological control of soil‐ and seedborne microorganisms. On the basis of their novel plant‐growth‐promoting attributes, two rhizobacteria Pseudomonas aeruginosa VP1 and VP2 selected out of over 63 isolates from the rhizosphere of chilli (Capsicum annuum) were identified as potential candidates for biocontrol of the root‐knot nematode Meloidogyne incognita on chilli. RESULTS: The nematicidal activity of both strains was evaluated in vitro and in vivo for their efficacy against M. incognita. P. aeruginosa VP2 exhibited strong nematicidal activity in comparison with VP1, based on the in vitro killing of the second‐stage juveniles (J2) of M. incognita. Seed bacterisation with both strains VP1 and VP2 was able to manage root‐knot M. incognita on chilli (C. annuum) in a pot trial study. Increase in root and shoot length and in fresh and dry weight of root and shoot and reduction in the root‐knot index over the control were attained. In overall performance, VP2 was 29.5% more effective than VP1, and about 30% more effective than the control (non‐bacterised). CONCLUSION: The application of P. aeruginosa VP1 and P. aeruginosa VP2 controls the development of M. incognita in C. annuum, and hence they are recommended as efficient plant growth promotors and biocontrolling agents for raising healthy crop of C. annuum that can promote the growth of plants and reduce the nematode (M. incognita) population. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

南方根结线虫拮抗链霉菌的筛选和鉴定

通过生物测定和温室防病试验 ,对分离自江苏省南京、淮阴和上海三地 3 0份土样的 3 44株放线菌菌株进行筛选 ,得到了 1株对南方根结线虫有较高生物活性的链霉菌菌株LH1 2 1。其培养滤液在离体条件下对南方根结线虫二龄幼虫有较强的触杀作用 ,4h内击倒率达 1 0 0 % ,1 2h内致死率达 1 0 0 % ;番茄植株上的活体防病试验表明 ,2ml/株培养滤液对根结和卵块形成的抑制率分别为52 .8%和 63 .5%。遗传稳定性试验表明LH1 2 1菌株能稳定产生杀线活性物质。LH1 2 1培养滤液主要通过直接触杀二龄幼虫或干扰其侵入植株而达到防治目的。根据形态、培养和生理生化特性的分析 ,将LH1 2 1鉴定为玫瑰暗黄链霉菌     

八角根围土壤真菌种类鉴定及其对南方根结线虫的活性评价

采用平板稀释法分离广西八角根围土壤真菌13个属1 329株, 利用贝氏皿浸渍法对其发酵液进行了杀线虫活性筛选, 计算其对南方根结线虫卵孵化抑制率及对2龄幼虫(J2)致死率的影响。菌株Gisf326、Gisf495和Gisf415发酵液原液对南方根结线虫卵孵化的相对抑制率分别为96.67%、83.33%和73.33%, 发酵液20倍稀释液对J2校正死亡率分别为93.13%、87.81%和93.38%; 经形态学鉴定和ITS序列分析, 3种真菌分别为淡紫拟青霉( Paecilomyces lilacinus )、黑曲霉( Aspergillus niger ) 和日本曲霉( A. japonicus )。本研究为植物线虫病害的防治提供了新的生防真菌资源。     

有机酸类化合物对南方根结线虫的生物活性

采用室内离体测定方法,测试了15种有机酸对南方根结线虫(Meloidogyne incognita) 2龄幼虫致死率和卵孵化抑制率。结果表明,甲酸和丙酸对2龄幼虫和卵的生物活性最高,明显优于其他供试有机酸,但是活性低于对照药剂阿维菌素。对生物活性结果及有机酸化学结构进行比对发现,小分子量化合物对南方根结线虫具有较高生物活性。     

七株黄瓜内生真菌对南方根结线虫二龄幼虫的不同作用

本文研究了7株黄瓜内生真菌对南方根结线虫Meloidogyne incognita的不同作用方式。结果表明,枝顶孢Acremonium sp.菌株Ac985、毛壳菌Chaetomium sp.菌株Ch1001和拟青霉Paecilomyces sp.菌株Pa972的PDB培养滤液对南方根结线虫J2具有致死作用,48h暴露后致死率分别达到100%、98.5%和100%;叶点霉Phyllosticta sp.菌株Ph511培养滤液对J2具有击倒作用,但击倒的虫体在清水中能恢复活性。木霉Trichoderma sp.菌株Tr882和菌株Ac985、Ch1001的培养滤液对J2的活动有趋避作用。镰刀菌Fusarium spp.菌株Fu234、Fu654和菌株Pa972、Ch1001、Ph511的菌丝可以穿透J2体壁并消化虫体。Ch1001、Fu654、Ph511三菌株孢子悬浮液处理黄瓜种子后,能诱导黄瓜萌发的主根对J2从其根尖伸长区穿透的抗性。     

毒杀南方根结线虫的木霉种类鉴定及活性研究

木霉是国际上研究与应用非常普遍的生防真菌之一,具有重要的科研价值和广阔的应用前景。本研究采用形态学鉴定、ITS和β-tubulin序列分析法对4株具有杀线虫活性的木霉菌株进行种类鉴定,结果显示FT311和FT312为绿色木霉(Trichoderma viride),FT1937和FT85为哈茨木霉(T.harzianum)。利用贝氏皿浸没法测定,4株木霉发酵滤液均能显著降低南方根结线虫卵的孵化和2龄幼虫(J2)的活性,其中FT1937和FT85对卵孵化抑制率和J2致死率均达到85%~92%,而FT311能够达到80%~85%,但FT312毒性较低,仅达40%~60%;2株哈茨木霉的活性好于2株绿色木霉;同时观察到发酵液对线虫卵和幼虫体壁有消解作用、抑制和延迟卵孵化,并使幼虫体内空泡化。本研究为根结线虫病害的生防防治提供了更多的木霉资源信息。     

10种植物提取物对南方根结线虫毒杀活性研究

采用触杀法研究了10种植物干材料无水乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物对南方根结线虫2龄幼虫的毒杀活性。结果表明,这10种植物材料的3种有机溶剂提取物对根结线虫都有不同程度的毒杀活性。其中,牡丹皮、丁香、八角茴香、何首乌和地肤子的无水乙醇和乙酸乙酯提取物的毒杀活性最强,48h校正死亡率均大于90%;八角茴香石油醚提取物也表现出较高毒杀活性,48h校正死亡率也达到了80%以上。     

南方根结线虫对生姜生长及内源激素的影响

 试验结果表明,南方根结线虫侵染生姜后,首先损伤根系,进而显著降低生姜植株的株高、地上鲜重、根系鲜重和根茎重,减产47.96%。南方根结线虫侵染可使生姜叶片中赤霉素(GA)、吲哚乙酸(IAA)、玉米素核苷(ZR)含量显著降低,感病生姜的脱落酸(ABA)则表现为前期降低,后期增加的趋势,并促使叶片中GA/ABA的迅速下降,严重影响了生姜的生长,使感病植株矮小、叶片黄化,提前衰老。感病生姜根茎GA、IAA、ZR、ABA的变化规律与叶片相似,但9月份ZR、IAA含量的迅速上升,与根结线虫建立侵染据点、形成巨型细胞,从而造成根茎的局部疣裂有关。南方根结线虫侵染可引起病株根系GA/ABA升高以及GA含量在生长后期上升,促进营养物质向根部运输,从而造成根系的补偿性生长;但IAA和ZR含量的下降不利于根结线虫建立侵染据点,不能在根系中形成过多的根结。     

温湿度对南方根结线虫卵孵化和二龄幼虫的影响

根结线虫病害是世界上最难防治的蔬菜病害之一,是否可以通过控制生态条件经济有效地防治根结线虫病害值得深入研究。本文利用室内纯培养技术研究了温湿度单因素和双因素对南方根结线虫（Meloidogyne incognita）2龄幼虫(J2)的致死率和卵囊中卵孵化率的影响。试验结果表明,该线虫对温度敏感,40 ℃以上高温和5 ℃以下低温即可抑制J2存活和卵囊中卵孵化,15～30 ℃是线虫的适宜温度;该线虫对湿度不十分敏感,只有干旱（含水量低于1%）和高湿（含水量高于30%）时,对线虫才有一定抑制作用。低温（5 ℃以下低温、含水量5%以上湿度）和高温高湿（35 ℃以上温度和30%含水量）抑制卵囊中卵孵化和J2的存活。本数据的获得将为设施园艺中生态控制南方根结线虫病害提供理论指导和数据支持。