雪松和黄山松对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的抵抗性

过去3年的调查表明,在江苏南京镇江松材线虫病区内雪松(Cedrus deodara)自然枯死相对很少,在采得的22株枯死雪松松材中,从未查见松材线虫。在1987—1989年用松材线虫分离物1号、3号或4号(分别分离自江苏和深圳罹病黑松Pinus thunbergii和马尾松P.masso-niana病材中),分5次接种60株4或7—8年生雪松苗或20多年及30多年生雪松树,仅2株4年生接种苗发病死亡,从死苗中分离到的松材线虫数量远低于接进的虫量。可见雪松苗期至成材期在江苏病区都能高度抵抗松材线虫。黄山上4年生黄山松(P.taiwanensis)苗在南京人工接种条件下,对松材线虫分离物1号及3号都高度感染,20株接种苗全部发病死亡。     

松材线虫口岸检疫方法

通过2001～2007年在南京机场、新生圩等3口岸现场采集的695批次木材料样本进行检疫,4次发现了松材线虫;总结了切合口岸实际的松材线虫检疫方法;针对口岸上截获松材线虫时常出现仅有幼虫的问题,研究了用真菌进行单异活体培养和松材线虫罹病木保湿法培养松材线虫的两种快速培养方法;9种真菌选择培养松材线虫效果表明,灰葡萄孢是培养松材线虫的最有效真菌,盘多毛孢等用作培养松材线虫也有一定效果.     

Duplex PCR 快速检测松材线虫

利用duplex PCR技术对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)与拟松材线虫(B. mucronatus)的rDNA部分核苷酸序列扩增.根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,设计出特异性引物,检测松材线虫的存在;在5.8S,28S保守序列区设计通用引物,检测伞滑刃线虫的存在.     

利用RAPD研究松材线虫和拟松材线虫亲缘关系

 用RAPD技术对18个松材线虫株系、8个拟松材线虫株系基因组DNA多态性进行研究。在事先优化的条件下,用15个随机引物进行PCR扩增,一共扩增出165条谱带,多态性为91.5%。通过聚类分析,结果表明:松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的差异性,但种间差异大于种内差异,因而松材线虫和拟松材线虫应为2个独立的种。     

湖南病死马尾松中分离线虫的鉴定

分离自对湖南郴州、耒阳、张家界地区的病死马尾松样品,采用形态鉴别和分子生物学鉴别相结合的方法对其进行鉴定.形态鉴定结果显示分离检出线虫更符合拟松材线虫特征.同时采用ITS-PCR-RELP方法对病死马尾松中分离线虫进行分子鉴定,ITS区经EcolI和HindⅢ酶切后得到110、160、242、404bp 4条特征带,与拟松材线虫相同,而与松材线虫有明显区别.而且ITS及CoI基因序列信息显示,湖南病死马尾松中分离线虫与松材线虫的同源性分别为92.9%、89.3%,而与拟松材线虫的同源性高达97.2%、95.2%.研究结果表明湖南病死马尾松中分离的线虫为拟松材线虫.     

木质包装中松材线虫的实时荧光PCR检测

松材线虫是进境木质包装中的重要检疫对象之一。本研究以进境木质包装中截获的12种伞滑刃属线虫,包括4种不同来源的松材线虫、3种不同来源的拟松材线虫、豆伞滑刃线虫、大尖尾伞滑刃线虫、阿苏里伞滑刃线虫、伯氏伞滑刃线虫及拟小刺伞滑刃线虫为材料,进行实时荧光PCR检测。结果显示,仅松材线虫可观察到明显的荧光强度变化,而其他线虫的荧光强度没有变化。通过研磨样品的方法,提取单条松材线虫的DNA,进行实时荧光PCR试验,检测成功率为100%,且不论是雄虫、雌虫或幼虫均能检测出来。该研究对于我国口岸进境木质包装中松材线虫的检测具有一定的实际意义。     

繁殖松材线虫最佳真菌筛选试验

 据全国第一届线虫病害研讨会报道,目前国内外培养繁殖松材线虫线虫Bursaphelenchus xylophilus常用的真菌是灰葡萄孢Botrytis cinerea。作者在1988年至1991年开展对松材线虫致病性、松材线虫对药剂毒性反应的研究过程中,急需繁殖大量松材线虫供试验使用,因此开始了本试验。     

松材线虫组DNA条形码筛选

本文基于Gen Bank中登录的14种松材线虫组线虫的28S、18S和ITS部分基因DNA序列,利用遗传距离法及分子生物学方法评价其各自作为松材线虫组DNA条形码序列的适用性。结果显示,28S(拟松材线虫不分亚种)、28S(拟松材线虫分亚种)、18S和ITS的基因序列种内成对遗传距离平均值分别为0.0071、0.0030、0.0007、0.0043,种间成对遗传距离平均值分别为0.0476、0.0454、0.0052、0.1556,其中28S、18S基因序列种内及种间距离存在一定程度的重叠,ITS具有一定程度的Barcoding gap。3个基因序列构建的NJ进化树显示,28S、ITS构建的系统进化树具有较高的节点支持率,可以有效将14个松材线虫组线虫分离成独立分支,而且28S可以有效鉴别出拟松材线虫的2个亚种;基于18S基因构建的进化树不能对吉拉尼伞滑刃线虫、日本冷杉伞滑刃线虫、拟松材线虫进行有效区分。因此,28S、ITS区具有一定的遗传距离间隔以及相对较高的物种识别率,可以作为松材线虫组线虫候选条形码基因。     

日本松材线虫和南京松材线虫对雪松和马尾松的致病性研究

用来自日本的木质包装材料上截获的松材线虫和南京松材线虫进行对雪松Ｃｅｄｒｕｓｄｅｏｄａｒａ和马尾松Ｐｉｎｕｓｍａｓｏｎｉａｎａ的致病力试验，发现日本松材线虫能使４～５年生雪松苗２０％发病，１０％左右枯死，而南京松材线虫则没有致病力；１０年生雪松对两种松材线虫具有高度抗性。这两种松材线虫都能使马尾松中度感病和１０％左右的枯死     

松材线虫rDNA的测序和PCR-SSCP分析

 本文为克服形态鉴定的不足,用分子生物学的方法鉴别松材线虫。线虫核糖体DNA(r DNA)的内部转录间隔区(ITS1)区(约308bp)的测序结果显示:松材线虫种内区别很小,不超过1bp;拟松材线虫种内区别较大,最大达7bp;这2种线虫的种间区别为32~39bp。根据以上测序结果,本文结合单条线虫DNA的提取技术,对14个松材线虫和拟松材线虫样本进行了单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,结果表明PCR-SSCP分析技术可明确区分这2种线虫,该技术可为单条松材线虫的鉴定提供一套灵敏而可靠的方法。     

松材线虫的远距离传播及其检疫问题

松材线虫Bursaphelenchus xylophilus从一个寄主个体(一株树、一段圆木等)向另一寄主个体的转移依赖昆虫介体。至今发现有24种昆虫可携带松材线虫,已证实其中有6种天牛可通过下述方式传播松材线虫萎蔫病:从病死树中羽化出的天牛感染松材线虫,在补充营养取食和产卵时     

感染松材线虫病松树滑刃目线虫调查

 本研究首次在全国范围内调查感染松材线虫病松树体内滑刃目线虫的种群组成,包括种类记述和数量组成分析。结果表明:在300份样品中共分离得到10种滑刃目线虫,隶属于3科、4属,其中有2个国内新记录种;它们是松材线虫、拟松材线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫、薄荷滑刃线虫、大核滑刃线虫、小麦长尾线虫(国内新记录种)、爱尔密那长尾线虫(国内新记录种)、李氏长尾线虫、吴氏长尾线虫和外滑刃科线虫一种;描述并且图示比较它们的形态特征。种群数量组成分析表明:松材线虫在感病松树体内占据绝对的优势,削弱了松树线虫群落组成的多样性,即线虫群落结构趋向单一化。研究还表明,利用长尾属线虫的捕食习性来控制中国松材线虫病的流行与危害值得进一步探索与研究。     

松材线虫检测鉴定技术研究进展

松材线虫是全球十分关注的检疫性线虫，对松林危害巨大。该文介绍了松材线虫的研究背景，以及形态学和分子生物学检测鉴定技术的最新进展，并对口岸松材线虫鉴定流程提出建议。未来，快速、便捷的线虫智能识别和等温扩增技术将取得广泛应用。     

南通狼山风景区针叶树线虫疫情调查

前言松材线虫Bursaphelenchus xylophilus是我国禁止入境的植物二类危险性有害生物,在我国江苏等地区局部分布.因其对以松属为主的针叶树木造成的毁灭性危害,为防止松材线虫从境外传入,近年来我国检验检疫机关对来自松材线虫疫区的进境木质包装材料加强了检疫工作,并多次截获松材线虫.     

松材线虫传播特点及检疫对策

口岸检疫松材线虫必须先弄清楚传播过程和病木、媒介昆虫、线虫三者之间的关系。松材线虫从甲地传播到乙地为害有远距离传播和近距离扩散两个过程。 松材线虫飘洋过海作远距离传播必须有三个因子(木材、昆虫、线虫)的组合体同时从甲地传播到乙地,才对乙地的松树构成威胁,其中只有两个     

松材线虫种群遗传多样性AFLP标记的建立及其应用

 松材线虫是极具危险性的外来入侵生物,其引起的松材线虫病,目前正在我国部分地区迅速扩展和蔓延,对我国林业生产造成了严重的经济损失。开展松材线虫的种群遗传学研究,是了解其成功入侵和爆发成灾内在机理的重要途径。但迄今为止,尚未找到很有效的分子标记方法来检测松材线虫入侵种群的遗传变异。本文采用AFLP分子标记技术,通过对各反应体系和反应条件的优化及对多态性引物组合的筛选,成功地建立了松材线虫的AFLP分子标记实验体系,并筛选出52对高效多态性的引物组合。应用4对引物对27个松材线虫种群样品进行遗传多样性检测,结果表明,AFLP是进行松材线虫种群遗传学研究的一种很灵敏和可靠的分子标记。此外,本文还对AFLP技术在松材线虫研究中的应用前景进行了讨论。     

ganA在路德维希肠杆菌杀松材线虫中的功能解析

生防微生物已被用于防控松材线虫病,但其杀线防病的分子机制尚不明确。本研究发现,经路德维希肠杆菌AA4处理后,松材线虫的校正死亡率达85%以上,菌株AA4能够显著减轻松树幼苗上松材线虫病的发生。为了探究AA4抑杀松材线虫的分子机制,本研究采用DNA同源重组技术,构建了菌株AA4 β-半乳糖苷酶基因ganA的敲除突变体,并对ganA在AA4抑杀线虫中的功能进行了解析。研究结果表明,敲除ganA后,突变体菌株抑杀松材线虫与防治松材线虫病的效果均显著降低,菌株的运动性与其在线虫上的定殖能力亦显著减弱。此外,与野生型菌株相比,gan A敲除突变体菌株限制线虫运动的能力显著减弱。因此,gan A可能通过调控AA4定殖松材线虫与限制线虫运动的能力,在AA4抑杀松材线虫中发挥重要功能。     

食线虫真菌蠕虫埃斯特菌对植物寄生线虫的侵染特性

为评价食线虫真菌蠕虫埃斯特菌Esteya vermicola菌株NKF 13222的生防应用价值,采用2%水琼脂培养基平板接种法测定了该菌株对7种植物寄生线虫的诱引、黏附和侵染能力,并比较了其对不同线虫的侵染特性.结果显示,该菌株的菌丝对松材线虫、拟松材线虫、腐烂茎线虫和水稻干尖线虫均有诱引作用,而对南方根结线虫、禾谷孢囊线虫和穿刺短体线虫无诱引作用;菌株的粘性分生孢子对有诱引现象的4种线虫都能黏附,接种24 h后的黏附率达到82%～99%,对无诱引现象的3种线虫不能黏附;粘性分生孢子黏附虫体后对不同线虫的侵染力存在差异,接种7 d后的松材线虫死亡率可达98%,而拟松材线虫、腐烂茎线虫和水稻干尖线虫死亡率分别为43%、35%和9%.表明蠕虫埃斯特菌不仅是松材线虫的强内寄生真菌,而且对其它重要植物寄生线虫也具有一定的应用潜力.     

松褐天牛与马尾松大量萎蔫死亡关系的调查

马尾松萎蔫死亡主要是由松褐天牛携带的松材线虫侵害引致。由于马尾松不是松材线虫的感病松属,对松材线虫的繁殖存在一定的抗性。松材线虫疫区马尾松所以大量快速死亡,不但与松材线虫及其主要传播媒介松褐天牛幼虫为害有关,而且与松材线虫侵入后,使大量已受松突圆蚧为害生势衰退的马尾松更趋衰弱,从而引致除松褐天牛外,还有赤梗天牛、松白星象等已查明的8种专门为害生势衰弱马尾松的害虫迅速繁殖为害有关。不及时砍伐快速死亡马尾松灭虫的疫区尤其严重。病虫综合为害是疫区马尾松大量萎蔫死亡的基本因素。     

松材线虫PCR快速检测方法研究

松材线虫是许多国家的检疫性有害生物 ,其形态与拟松材线虫非常相似。为克服传统的形态学鉴定的不足 ,本研究依据松材线虫rDNA基因部分序列 ,通过单个碱基的故意错配 ,设计了一对特异性引物 ,运用PCR方法 ,最终实现了对单条松材线虫的快速检测。该检测方法具有很好的实用性和稳定性