PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究

为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。     

云南地方株PRRSV感染对猪细胞因子表达的影响

为了探究云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)毒株对猪部分细胞因子的影响,试验用Marc-145细胞培养云南地方株YN-2011PRRSV毒株,攻毒组仔猪通过口服和腹腔注射方式感染毒株,对照组仔猪以相同方式用生理盐水进行处理,观察仔猪体温、临床状态,分别在感染后第3,7,14,20,30天采集仔猪血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中PRRSV抗体、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-α(IFN-α)的水平,荧光定量PCR检测血清中PRRSV的病毒载量。结果表明:攻毒组仔猪出现精神沉郁、腹泻、耳朵发红、皮肤发绀等猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)临床症状;血清中PRRSV抗体水平在感染后第20天极显著上升且达到抗体阳性临界值(P0. 01); TNF-α水平在感染后第3,7,14,20,30天高于对照组,除第14天外均差异极显著(P0. 01); IL-1β及IFN-α水平在各时间点均高于对照组且差异极显著(P 0. 01),二者在感染后第7天达到最高水平;在感染后第7天攻毒组仔猪出现病毒血症,第14天病毒血症消失。说明云南地方株PRRSV YN-2011对仔猪有致病力,使仔猪PRRSV抗体及细胞因子TNF-α、IL-1β、IFN-α水平均明显上调。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒Nsp2基因缺失株Jiangxi-3灭活疫苗免疫效果评价

将猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因缺失株Jiangxi-3的第9代病毒(Jiangxi-3F9)按常规方法制成油佐剂灭活疫苗,经肌肉注射免疫PRRSV和猪圆环病毒(PCV2)抗原与抗体均为阴性的60日龄健康猪,免疫组分别于初次免疫第21和28天、二次免疫第28天(即初次免疫第28天加强免疫1次)用200LD50的Jiangxi-3 F9进行攻毒,同时各组均设立对照组。通过试验动物体温变化、临床症状、血清PRRS抗体和抗原定期检测结果评价灭活疫苗的免疫效果。结果表明,初次免疫第21和28天免疫组攻毒后体温仍然明显升高,而二次免疫第28天免疫组攻毒后体温升高不明显,最高体温约40℃。初次免疫21-28 d免疫组特异性抗体水平持续升高,初次免疫第21天与第28天抗体水平差异显著(0.01P0.05);二次免疫后免疫组抗体水平仍持续升高,第28天可达3.105±0.125,二次免疫第28天与初次免疫28天抗体水平差异显著(0.01P0.05)。初次免疫第21天和第28天免疫组攻毒后仍能在血清中检出PRRSV抗原,仍表现不同程度的临床症状,而二免第28天的免疫组攻毒后其PRRSV抗原检出率、发病率、死亡率均为0。表明初次免疫第28天加强免疫一次比免疫一次效果好。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)105.0 TCID50...     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫效力

利用猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,免疫后7、14、21、28d采血,测定免疫后血清中抗PRRSV、PCV中和抗体和ELISA抗体较价,并于免疫后28d分别用PRRSV和PCV2攻毒,攻毒后每日检测猪体温和观察临床症状,于攻毒后21d所有存活猪全部扑杀,分别对每头猪肺、肝、脾、淋巴结、心和血进行剖解病理和组织病理学观察及PRRSV和PCV2核酸检测,以确定该疫苗免疫保护率。结果表明,所有试验猪于免疫后7d血清抗体开始检出,28d达到峰值,免疫后28dPRRSV和PCV2攻毒保护率均为100%(5/5)。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗和变异株灭活疫苗的免疫效果评价

分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R致弱毒疫苗株和变异毒株灭活疫苗免疫接种40日龄～45日龄仔猪,免疫接种后4周,用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN-4变异株强毒攻毒,攻毒后21 d剖检,取主要器官作病理组织学观察和病毒抗原定位.结果显示变异毒株灭活疫苗免疫攻毒后导致的病理变化和病毒抗原分布程度均明显高于CH-1R弱毒疫苗免疫组.免疫病理学研究结果表明CH-1R 弱毒疫苗对HU-4株强毒免疫保护效果好于变异毒株灭活疫苗.     

不同猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗在猪体内的动态学及临床免疫效果比较

为了比较国内不同猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)弱毒疫苗的安全性和有效性,本研究将17头PRRSV抗原和抗体双阴性的28日龄仔猪随机分为4组,TJM-F92株弱毒疫苗组,JXA1-R株弱毒疫苗组,经典株弱毒疫苗(VR2332来源)组和注射生理盐水对照组。免疫后7,14,21,28d分别采血,ELISA抗体检测试剂盒检测PRRSV抗体,结果从免疫后14d起PRRSV抗体开始转阳,但各试验组的抗体水平无明显差异。对免疫后14d所采血样进行病毒分离,TJM-F92株免疫组未分离到PRRSV疫苗毒,JXA1-R株免疫组2头猪分离到PRRSV疫苗毒,经典株免疫组只1头猪分离到PRRSV疫苗毒。免疫后28d,所有猪接种PRRSV强毒株TJ株进行攻毒试验,观察各组猪的体温、临床症状;攻毒后21d,所有猪安乐死,剖检观察肺部病理变化。结果显示,TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未出现临床发病猪,经典株免疫组2头猪出现临床发病,对照组全部临床发病,死亡1头。经典株免疫组临床发病猪出现典型PRRSV感染肺部病理变化,而TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未发现典型PRRSV感染肺部病理变化。本研究证实TJM-F92株和JXA1-R株对高致病性PRRSV的免疫效果优于经典株弱毒疫苗,TJM-F92疫苗株与JXA1-R疫苗株相比,疫苗毒在体内带毒时间更短,安全性更高。     

猪繁殖与呼吸综合征DNA重组质粒对猪的免疫效应

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)灭活疫苗、表达GP5蛋白的DNA重组质粒分别与表达IL-2和IL-4的重组质粒(pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4)联合免疫健康仔猪,经3次免疫后人工感染PRRSV HB-2株,检测仔猪体液免疫以及攻毒保护性反应。研究结果显示,重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生抗GP5抗体,最高ELISA抗体效价可达1∶285。攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率下降30.3%,与对照组相比,差异显著(P<0.05),表明表达PRRSV GP5的DNA重组质粒pCI-GP5可诱导一定的免疫效力。pcDNA-IL-2与pCI-GP5联合免疫后,病毒血症的出现频率减少38.9%,PRRSV阳性组织检出率下降28.8%,与对照组差异显著(P<0.05);pcDNA-IL-4与pCI-GP5联合免疫后,最高ELISA抗体效价可达1∶320,病毒血症的出现频率下降38.9%,PRRSV阳性组织检出率减少34.8%,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。本研究表明,PRRS DNA重组质粒pCI-GP5对猪的免疫保护力是稳定的,真核表达的细胞因子pcDNA-IL-2与pcDNA-IL-4能够显著增强pCI-GP5的免疫保护力。     

姜黄素对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪的作用评价

为研究姜黄素对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染仔猪的作用,将PRRSV攻毒PRRSV阴性的健康仔猪后,用姜黄素拌料饲喂仔猪,每日测量仔猪的直肠温度,并分析病毒血症,PRRSV特异性抗体淋巴细胞产生和增殖情况。结果显示,姜黄素并不能降低PRRSV感染引起的直肠温度升高,但于攻毒后21 d,姜黄素可显著降低病毒血症水平。而且,姜黄素不能诱导PRRSV特异性抗体显著升高,但可以诱导PRRSV特异性淋巴细胞增殖。这表明姜黄素对PRRSV在仔猪体内的感染具有一定的抑制作用,但仍需进一步提高治疗效果。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)临床免疫效果的研究

为评价高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)的临床免疫效果,分别选择PRRS阴性猪场、PRRS免疫阳性猪场和PRRS野毒感染猪场进行免疫接种研究,接种剂量分别为1头份和2头份,接种后观察猪群临床症状,监测抗体水平并抽取部分仔猪进行攻毒试验。结果表明:PRRS阴性猪场和PRRS免疫阳性猪场接种TJM-F92株疫苗后,仔猪保育阶段成活率、育肥阶段成活率、出栏率及母猪窝产健活仔数与未免疫猪比较无明显差异,仔猪免疫后第28天攻毒保护率均为80%。PRRS野毒感染猪场接种疫苗后仔猪保育阶段成活率、育肥阶段成活率、出栏率及母猪窝产健活仔数均明显提高。说明高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)具有较好的临床保护效果。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株的毒力评价

为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）NADC30-like毒株的毒力，试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6～7周龄健康易感猪，以进行毒力评价（A-E组），并设立未攻毒阴性对照组（F组）。所有组攻毒后进行临床症状观察，并在第0、3、5、7、10、14和21天采集全血、咽拭子和肛拭子进行病毒载量检测。结果显示，除D组外其他攻毒组表现一过性体温升高，偶有到41℃，而D组在攻毒后第4～15天，该组试验猪平均体温均不低于40.5℃，体温显著高于其他攻毒组。病毒血症检测发现，除D组外，其他攻毒组在第3、5、7和10天均为核酸阳性，在第14天部分转为核酸阴性，但到第21天又转为阳性，而D组从攻毒到结束病毒血症始终为阳性。肛拭子和咽拭子病毒载量测定发现，除D组外，其他攻毒组在第3、5和7天均为核酸阳性，在第10、14和21天部分猪有时转为阴性，后又转为阳性；D组攻毒到结束肛拭子始终为阳性。从上述数据统计综合分析，结果表明D组所攻击的毒株毒力高于其他毒株，可引起3/5猪发病，且死亡一头，该毒株感染能产生PRRSV的典型临床症状，可初步用于NADC30-...     

三种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果评价

为研究不同猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗的的免疫特性,分别采用PRRSV变异株(JXA1-R)弱毒疫苗、经典PRRSV(VR 2332)弱毒疫苗、变异株(JXA1)灭活疫苗,免疫接种PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫接种后70d用PRRSV变异株强毒攻毒,ELISA检测血清中PRRSV特异的抗体水平及IFN-γ、IL 2、IL 4、IL 8、IL 10的水平,并进行临床症状和肺部病理组织学观察和评分。结果表明,VR 2332、JXA1-R弱毒疫苗对免疫猪攻毒保护效果差异不显著,均为63.6%(7/11),JXA1灭活疫苗免疫攻毒保护效果较差,为36.4%(4/11)。试验还发现病毒感染猪血清中细胞因子IFN-γ和IL-10的比值可以作为评价疫苗免疫效果的一个指标。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因不同变异毒株对仔猪致病性研究

为了评价猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同分离毒株致病性差异,选择4株PRRSV分离毒株,即YX0907、BB0907、SY0909(属于NSP2基因亚型Ⅰ,具有30aa缺失特征)和NT0801(属于NSP2基因亚型Ⅱ,其NSP2上不存在缺失)进行动物接种试验。将23头45日龄PRRSV、猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌阴性健康仔猪随机分为5组,第1～4组各5头猪,分别颈部肌内注射上述4株PRRSV分离株(均为第3代)2×104.32TCID50.(mL.头)-1,第5组3头猪作为空白对照,隔离饲养21d,每天观察临床症状。攻毒后不同时间测定病毒血症,并对死亡猪和第21天处死猪进行病理剖解、观察大体病理变化和组织病理变化。结果显示,BB0907毒株毒力最强,试验猪感染后体温明显升高,临床症状明显,可引起3/5死亡,病猪肺脏组织具有明显病理变化;YX0907毒株毒力较强,试验猪临床症状和病理变化明显,可引起2/5死亡;NT0801毒力较弱,部分试验猪感染后出现1～2d体温升高和轻度临床症状,未引起死亡;SY0909毒株毒力最弱,感染猪出现1～3d体温升高,临床症状不明显,病理变化较轻;而对照猪无临床异常表现和...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白间接ELISA方法的建立

为研制特异性敏感性较好的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测方法,更好地实现PRRSV的流行病学监测和诊断,将PRRSV GDr180毒株N蛋白基因序列克隆到p ET32a(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内实现了高效表达,表达形式为可溶性表达,通过Western blot证明表达产物与PRRSV GDr180株阳性血清具有很好的反应原性和特异性。将大肠杆菌表达的N蛋白经过超声、离心、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原检测血清中的PRRSV抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了能检测PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法;对方法的特异性和重复性以及与同类成品试剂盒间的应用效果对比进行了试验。结果表明,研究建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中PRRSV抗体、监测猪繁殖与呼吸综合征的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株FJZ03的致病性分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒新流行毒株——类NADC30毒株的生物学特性和致病特征,将类NADC30PRRSV FJZ03毒株和HP-PRRSV FJLYDX毒株分别接种30日龄PRRSV和PCV2阴性仔猪,观察、记录和对比各试验组感染猪的临床症状、体温变化、体外排毒情况、病毒血症及组织病变等情况。试验结果显示,FJZ03株能在猪体内快速复制,引起仔猪较高滴度的病毒血症,体温升高和体外排毒时间均早于高致病性毒株FJLYDX,并且引起严重的间质性肺炎和脾萎缩。细胞因子检测结果表明FJZ03组仔猪细胞因子的浓度都有不同程度的升高,与FJLYDX组相比最明显的是产生较高水平的TNF-α和IL~(-1)0。综上表明FJZ03对仔猪具有较强的致病性。     

HP-PRRSV HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒对仔猪外周免疫器官及肺脏的损伤

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株在其致弱过程中对仔猪外周免疫器官及肺脏损伤的变化,试验分别采用HuN4F5及其致弱代次F15、F23、F30及HuN4弱毒疫苗F112感染30日龄PRRSV抗原抗体阴性健康断奶仔猪,每天进行体温测定及临床症状观察,并在感染后0,3,5,7,10天检测病毒血症情况。病毒感染后10天剖杀试验猪,观察外周免疫器官及肺脏的病理变化并对肺脏和主要外周免疫器官病毒载量进行测定。结果表明:HuN4 F5、HuN4 F15组在临床症状、病毒血症、外周病毒载量及病理变化方面都明显比其他组严重,HuN4 F23组发病明显减轻,HuN4 F30组、HuN4 F112组无明显发病特征,与空白对照组无明显差异。说明HP-PRRSV HuN4株在致弱过程中,传代至30代时毒力发生显著减弱。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因工程亚单位疫苗免疫保护试验

为了探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因工程亚单位疫苗的免疫保护效果,试验利用大肠杆菌表达并纯化了重组PRRSV N蛋白,添加佐剂制成亚单位疫苗进行免疫保护试验。试验猪分为2个不同佐剂制备的PRRSV N蛋白亚单位疫苗免疫组,1个PRRSV TJM-F92株减毒活疫苗免疫组和1个攻毒对照组。首免5周后,用PRRSV NVDC-JXA1强毒株攻击,观察临床表现并在攻毒后21 d对试验猪进行剖检。结果表明:首免3周后2个亚单位疫苗组和减毒活疫苗组抗体全部转阳,组间无显著性差异(P0.05);攻毒后PRRSV N蛋白亚单位疫苗免疫1#组有2/3的猪只、2#组有1/3的猪只的临床症状、体征和解剖病变较攻毒对照组猪只轻微,转归较好且成活,但保护作用不及PRRSV TJM-F92株减毒活疫苗组;剩余的亚单位疫苗免疫1#组1/3的猪只和亚单位疫苗免疫2#组2/3的猪只,与攻毒对照组猪只一样表现为比较典型的PRRS症状,并在8~12 d内死亡。说明PRRSV N蛋白亚单位疫苗能够引起机体的体液免疫反应,具有部分保护作用,但不能提供完全的保护,单独使用达不到减毒活疫苗的效果。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征 GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响

为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对猪瘟兔化弱毒株的间隔免疫干扰研究

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对猪瘟病毒(CSFV)C株的间隔免疫干扰情况,本实验设计在免疫高剂量PRRSV TJM-F92株疫苗毒后第7 d和第14 d分别免疫低剂量CSFV C株疫苗毒,并于CSFV C株疫苗毒免疫后第14 d用CSFV石门系血毒攻击实验动物,通过体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行评价。结果表明,间隔7 d免疫组与间隔14 d免疫组CSFV ELISA抗体水平与CSFV C株单独免疫对照组抗体水平无显著差异;攻击CSFV石门系血毒后,间隔7 d免疫组与间隔14 d免疫组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,对CSFV石门系血毒攻击可产生良好的保护效果。CSF阴性对照组实验动物5/5表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。以上结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株间隔7 d或14 d免疫,PRRSV TJM-F92株对CSFV C株无免疫干扰作用。     

高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟兔化弱毒株的免疫干扰研究

为研究高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟病毒(CSFV)C株是否存在免疫干扰作用,本研究对不同方式免疫动物从体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行免疫干扰评价。结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株联合免疫组CSFV抗体水平与低剂量CSFV C株单独免疫对照组CSFV抗体水平无显著差异,联合免疫组中高剂量PRRSV TJM-F92株未抑制低剂量CSFV C株抗体生成;攻击CSFV石门血毒后,联合免疫组与低剂量CSFV C株单独免疫对照组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,两组免疫组均可对CSFV石门系血毒攻击产生良好的保护效果。阴性对照组实验动物均表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。本研究表明,高剂量PRRSV TJM-F92株对低剂量CSFV C株无免疫干扰作用。本研究为PRRSV免疫防制措施的制定提供了实验依据。