筛选抗病毒中草药的研究 Ⅰ微量细胞培养法和小瓶细胞培养法筛选抗病毒中草药

本文采用微量细胞培养法和小瓶细胞培养法筛选抗新城疫病毒的中草药,共试验76种。除茵陈一药外,其它各药应用两种试验方法所得结果基本一致,且微量法比小瓶法简便、快速、省料。筛选抗病毒中草药时,采用血凝试验、细胞病变试验和病毒空斑试验三种方法检测药效。用血凝试验检出22种中草药有不同程度抑制新城疫病毒的作用。用病毒空斑试验检测,有16种能明显抑制病毒血凝的药物,发现有不同程度减少病毒空斑形成的作用。用细胞病变方法检测,有5种药物能减轻细胞病变程度。     

双价苗中马立克氏病病毒含量

用显微镜观察和间接发荧光抗体试验（IFA）分别测定某马立克氏病病毒双价苗中所含两种814毒株和HVT毒株的空斑数。结果表明，IFA检测的空斑数显著大于显微镜观察的空斑数，且双价茵中两种病毒的含量与这两种病毒混合前加入的比例基本一致。这表明用IFA对双价苗中的MDV进行空斑计数从而分别测定MDV的含量是完全可行的。     

应用ELISA检测青海省部分地区牛轮状病毒抗体

<正>牛轮状病毒是引起犊牛腹泻的重要病原之一。在我国,有报道对华东地区牛血清中轮状病毒抗体的调查发现,奶牛、黄牛的抗体阳性率分别达到85.4%和83%,说明我国牛轮状病毒感染较为普遍。轮状病毒的检测主要是针对病毒核酸、病毒抗体或抗原蛋白检测和病毒分离。目前青海省对轮状病毒感染的流行情况尚缺乏系统的研究,鉴此,笔者收集青海省部分地区牛血清样品,进行了牛轮状病毒抗体的血清学     

伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+突变株的构建及其生物学特性研究

本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质料pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK－5，细胞出现病变后，反复冻融3次收毒，按1：5稀释接种于IBRS－2细胞。在X－gal存在下挑取蓝斑，蓝斑筛选3次，再进行空斑试验，同时用PCR扩增LacZ基因，经3次空斑纯化，随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因，证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^ 突变株。TCID50试验表明，TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响；Balb/C小鼠试验表明，该突变对Balb/C小鼠的安全性明显高于Bartha亲本毒株。     

痘苗病毒在猪体上的驯化

本实验应用猪体和猪胎皮肤细胞对痘苗病毒天坛株进行了复壮传代,使其适应在猪体上增殖。对细胞传代毒和疱皮毒分别作了感染力测定、猪体发疱试验和电镜检查,并对传代适应毒进行了空斑纯化,再将25个空斑克隆株分别复归猪体,结果均能明显发疱。证明痘苗病毒通过猪胎皮肤细胞反复传代,可以较快适应猪体增殖。     

肝素钠对伪狂犬病毒侵染BHK-21细胞和小白鼠的抑制

应用空斑技术,检测肝素钠对伪狂犬病毒（ＰＲＶ）在ＢＨＫ＿２１细胞上形成空斑的数量,证实肝素钠对ＰＲＶ的感染能力有较大抑制作用。小鼠试验证实肝素钠可降低病毒的致病力,但肝素钠对小鼠有一定毒性。     

我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G1OP[11]型牛轮状病毒的分离鉴定

应用轮状病毒RNA电泳方法，对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品，平均阳性率为12％（11／90）。阳性样品经RT-PCR分型鉴定，新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型，新疆另一牛场的4份样品属于G6型。对所有阳性样品进行病毒分离，获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株，经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒，命名为HM26。G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次。     

日本脑炎病毒弱毒疫苗株全长cDNA的体外合成及恢复病毒的拯救

将病毒的全基因组分成3个重叠的区段分别扩增出来,把这3个片段连接到载体中。以这3个片段为模板,通过融合PCR方法,获得JEV的全长cDNA。以cDNA为体外转录的模板,体外转录获得病毒mRNA,转染BHK-21细胞,拯救JEV病毒。通过生物学特性、分子生物学、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定,并测定恢复病毒的生长曲线和LD50。结果显示,获得了全长cDNA,体外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞后,二代恢复病毒可引起明显的细胞病变,间接免疫荧光试验和RT-PCR均为阳性。空斑试验表明,拯救病毒与原病毒空斑表型类似;恢复病毒与亲本毒相比在BHK-21细胞上生长更快;恢复病毒的LD50与亲本毒类似。     

拓展AcMNPV宿主域至家蚕的研究

将核型多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ　ｃａｌｉｐｈａｎｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＡｃＭＮＰＶ）与家蚕核型多角体病毒（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＮｍＮＰＶ）基因组ＤＮＡ的Ｓｍａ　Ｉ酶切Ｃ片段共转染Ｓｆ细胞，共转染上清液接种到ＢｍＮ细胞中进行扩增，然后在ＢｎＮ中进行空斑分析，挑取多角体空斑进行扩增。发现所得到的病毒即能在Ｓｆ纫胞中增殖，也能在ＢｍＮ细胞中增殖，并产生多角体颗粒。用重组病毒的多角体口服感染幼虫，能引起家蚕幼虫发病。     

抗传染性喉气管炎病毒中药的筛选试验

本文用细胞培养法、鸡胚培养法对42种中药进行抗传染性喉气管炎病毒的筛选试验。通过细胞病变（CPE）抑制试验对42种中药进行初步筛选，结果发现石榴皮等5种中药有抑制CPE的作用。培养细胞有20％的细胞发生病变，认为这些中药有抗ILTV的作用；应用空斑形成抑制试验对5种抗ILTV中药进行复筛，结果表明5种中药均有不同程度的抑制病毒空斑形成作用。其中以石榴皮等2种中药作用较强，空斑形成抑制率可达98％以上；应用鸡胚培养法对5种中药进行抗ILTV试验，结果发现5种中药均显著地减少了鸡胚绒毛尿囊膜上的痘疱，其中以石榴皮等2种中药抑制痘疱形成的强度最高；通过不同加药时间，观察CPE抑制情况。结果表明，在接毒前48h给药有2种中药具明显的抑制CPE。接毒同时加药以及接毒后1h加药，这5种中药均呈现明显的抑制CPE。     

抗传染性支气管炎病毒中药的研究

用细胞培养法、鸡胚培养法对车前子、麦冬等40种中药进行抗传染性支气管炎病毒（IBV）的筛选试验。通过细胞病变（CPE）抑制试验，石榴皮等5种中药有抑制CPE的作用。培养细胞有20%发生CPE，认为这些中药有抗IBV的作用。应用空斑形成抑制试验对5种抗IBV中药进行复筛，结果表明5种中药均有不同程度的抑制病毒空斑形成作用，其中以石榴皮等2种中药作用较强，空斑形成抑制率可达98%以上。应用鸡胚培养法对5种中药进行抗IBV试验，结果发现5种中药均显著地减少了鸡胚体的死亡，其中以石榴皮等2种中药抑制制胚体病变的作用最强。通过不同加药时间观察到在接毒前48h给药，有2种中药具有明显抑制CPE的作用；接毒同时加药以及接毒后1h加药，这5种中药均能明显抑制CPE。     

检测猪肉中病毒的样品处理方法初步研究

进行了从猪肉样品中回收一种模拟病毒的抽提和浓集方法研究。将20g经实验性污染有脊髓灰质炎病毒1型弱毒的样品悬浮于100ml pH8.8甘氨酸-NaOH缓冲液中,置冰浴中均质。均质液中的固体猪肉成分先经聚阳离子污物凝结剂Cat-Floc凝聚成团,再以离心法和过滤法去除。每份样品抽提液均经脱水(HE)、超滤(UF)和聚合物两相分离(PTPS)三种方法之一浓缩,用HeLa细胞单层以空斑试验法作病毒的定量测定。实验表明:样品抽提方法切实可行;用HE法、UF法和PTPS法浓集,猪肉样品中病毒的平均回收率分别为53.0、68.0和65.1％;未作病毒污染的猪肉制备的样品浓集液中无空斑形成单位检出。认为本研究建立的抽提和浓集方法能用于检测猪肉中病毒的样品处理。     

牛轮状病毒的流行情况及预防措施

轮状病毒（Rotavirus,RV）属于呼肠孤病毒科,轮状病毒属,其是引起多种幼龄动物病毒性腹泻的主要病原体。 1947年有学者第1次以病理学及流行病学描述了轮状病毒在幼鼠中引起的流行性腹泻,1963年第1次通过电镜观察到引起鼠流行性腹泻的病毒。     

我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G10P[11]型牛轮状病毒的分离鉴定

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测.在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90).阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型,新疆另一牛场的4份样品属于G6型.对所有阳性样品进行病毒分离,获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株,经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒,命名为HM26.G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次.     

荷斯坦犊牛轮状病毒及其检测方法

1轮状病毒的病原特性轮状病毒属于呼肠孤病毒科轮状病毒属,病毒粒子呈圆形,由形似车轮而得名,为无囊膜病毒,具有11个片断的双股RNA基因组,编码6个结构蛋白(VP1￣4,V P6￣7)和五个非结构蛋白(NSP1￣5),包裹在三层蛋白衣壳内;外层由两个蛋白组成,VP4和VP7,V P4(相对分子质量为88000)蛋白,呈穗状刺突突出于病毒粒子的表面,它与病毒的多种功能有关,其中主要的功能是接触细胞膜,并且穿透进入细胞,在穿透宿主细胞中,它决定着宿主细胞的趋向性和运载蛋白酶敏感的血清特异型;V P在促细胞裂解酶的作用下,裂解为增强病毒感染性和快速内化形成V…     

新分离牛轮状病毒及其血清型的研究

从爆发犊牛腹泻的牛群中分离到一株轮状病毒,(CHLY)并以其感染的MA-104为试验材料,较为系统的对轮状病毒的形态结构及其宿主的超微病变进行了观察,并将其主要保护性抗原VP7基因克隆入pUCm-T载体进行序列分析及测定,鉴定其血清型。轮状病毒粒子为圆形颗粒,直径在60~70 nm之间,病毒粒子由双层衣壳包裹,呈典型的轮状病毒车轮状结构。在轮状病毒感染的细胞质中,可观察到处于不同发育阶段的子代病毒粒子。对轮状病毒的中和抗原VP7的序列分析结果表明CHLY与G6血清型轮状病毒RF株同源性最高,核苷酸同源性为98.9%,结果表明分离的轮状病毒CHLY株为G6型轮状病毒。     

猪轮状病毒HeBei-12株在MA-104细胞上最适繁殖时间的摸索

本试验将He Bei-12株猪轮状病毒在MA-104细胞上培养,通过对病毒的细胞培养物进行核酸提取及RT-PCR检测证明,该病毒可以很好的适应细胞。为获得最佳的病毒培养量,本试验分别从间接免疫荧光,增殖动力学曲线以及病毒感染细胞后的超薄切片电镜对病毒的繁殖周期做了初步研究。结果表明,He Bei-12株猪轮状病毒在感染MA-104细胞时,病毒粒子是随着时间的变化而变化的,当病毒接种20 h时即可在细胞质中观察到病毒粒子。当病毒感染细胞64 h时,滴度达到最大值4.8 log TCID50/m L,此后滴度逐渐下降。本试验对猪轮状病毒地方流行株He Bei-12株在MA-104细胞上的最佳繁殖时间进行摸索,为进一步研究其生物学特性和疫苗研制奠定了基础。     

新分离牛轮状病毒及其血清型的研究

从爆发犊牛腹泻的牛群中分离到一株轮状病毒,（CHLY）并以其感染的MA-104为试验材料,较为系统的对轮状病毒的形态结构及其宿主的超微病变进行了观察,并将其主要保护性抗原VP7基因克隆入pUCm-T载体进行序列分析及测定,鉴定其血清型。轮状病毒粒子为圆形颗粒,直径在60-70nm之间,病毒粒子由双层衣壳包裹,呈典型的轮状病毒车轮状结构。在轮状病毒感染的细胞质中,可观察到处于不同发育阶段的子代病毒粒子。对轮状病毒的中和抗原VP7的序列分析结果表明CHLY与G6血清型轮状病毒RF株同源性最高,核苷酸同源性为98．9％,结果表明分离的轮状病毒CHLY株为G6型轮状病毒。     

人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病毒的作用

为探讨人参皂苷及其衍生物体外抗马立克氏病毒(MDV)的作用机理,采用空斑试验测定人参皂苷及其衍生物对马立克氏病毒感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的保护效果,结果发现人参皂苷及其衍生物均具有较好的抗病毒效果,特别是人参皂苷衍生物组增殖抑制的抗MDV空斑减少率达到盐酸吗啉胍的77%(55.62/72.52)。表明人参皂苷及其衍生物可以减轻病毒对CEF细胞的损伤程度。     

轮状病毒腹泻的研究进展

本文从轮状病毒病毒分子和轮状病毒腹泻的机理进行了介绍，指出在进行轮状病毒腹泻的治疗时进行体液的补充应结合分泌型肠细胞抑制的治疗。