基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因序列的帘蛤科贝类分子系统发育研究

对21种帘蛤科贝类线粒体细胞色素c氧化酶亚基I(cytochrome c oxidase subunit I,COI)基因核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发生研究中的应用价值.测序结果表明,所有物种扩增片段长度均为707 bp(含引物),序列A+T含量(62.4％-67.8％)明显高于G+C含量.物种间共有变异位点379个,其中简约信息位点334个;此区段共编码235个氨基酸,种间共有氨基酸变异位点100个.以COI基因片段序列为标记,用中国蛤蜊(Mactra chinensis)作外群,构建了35种帘蛤科贝类(其中14种贝类COI序列从GenBank下载)的系统发生树,结合拓扑结构分析和序列比对分析,结果表明:支持将短文蛤(Meretrix petechinalis)和丽文蛤(M.lusoria)订为文蛤(M.meretrix)的同物异名的观点,建议将丽文蛤和短文蛤订为文蛤的地理亚种;支持将薄片镜蛤(Dosinia corrugata)和D.angulosa订为2个独立种的观点;认为将波纹巴非蛤(Paphia undulata)和织锦巴非蛤(P.textile)订为2个独立种是合适的.COI基因序列含有丰富的遗传信息,适合作为帘蛤科贝类种群遗传结构和系统发生研究的分子标记.     

细胞色素C氧化酶的纯化及动力学性质研究

采用硫酸铵分级沉淀和CytochromeC -Sepharose 4B亲和层析 ,从牛心线粒体中纯化了细胞色素C氧化酶 (CytochromeCOxidase ,简称CCO ) ,其比活性为 1 7 88s- 1 ·mg- 1 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条带 ,血红素A (HemeaA)含量达到 1 5 4nmol/mg。纯化后的CCO具有典型的CCO特征 ,还原态CCO峰值出现在 60 5nm和 443nm ,氧化态CCO峰值出现在 598nm和 42 4nm。CCO的稳态动力学参数Vm1、Km1、Vm2 、Km2 分别为 1 42s- 1 、 0 53μmol/L、 2 71s- 1 、 1 81 μmol/L。     

巨柏细胞色素氧化酶同工酶变异分析

为阐明巨柏Cupressus gigantea的濒危机理,根据聚丙烯酰胺琼脂电泳对巨柏3个大居群的36个个体功能叶片的细胞色素氧化酶的同工酶谱带测定结果进行编码,对各酶谱带进行聚类分析;同时结合细胞色素氧化酶的3个遗传指标进行分析。结果表明,来自同一居群的个体,同工酶谱带相似性高,遗传杂合度小（HeA．=0．726,HeB=0．691,HeC=0．704）,相似性系数大,遗传距离小,这说明居群内个体遗传分化小;而不同居群间的个体则恰好相反（IAB=0．240,IAC=0．259,IBC=0．401;DAB=1．427,DAC=1．351,DBC=0．914）,这主要是由青藏高原特殊的气候条件和巨柏的地理分布格局所造成的。     

K型小麦不育系花药壁细胞色素氧化酶的分布

用电镜细胞化学定位技术，对ｍｓ（Ａｅ，ｋｏｔｓｃｈｙｉ）－７７（２）雄性不育花药及其保持系花药四层组织和维管组织细胞中的细胞色素氧化酶进行了定位和相对定量的研究，结果表明，药壁中层，绒毡县细胞内细胞色素氧化酶的变化，不育系与其保持系基本一致，而药壁表皮，药室内壁和维管组织细胞内线粒体中的细胞色素氧化酶的含量明显低于其保持系，推测，细胞色素氧化酶活性降低可能是导致花粉败育的重要因素之一。     

Psathyrostachys huashanica和Pseudoroegneria strigosa细胞色素c成熟蛋白亚基ccmFN基因的序列分析

研究报道了禾本科小麦族物种Psathyrostachys huashanica和Pseudoroegneria strigosa的细胞色素c成熟蛋白亚基ccmFN基因部分序列。序列分析显示,Psathyrostachys huashanica和Pseudoroegneria strigosa的ccmFN序列相似性为99%。它们与小麦的ccmFN具有98%的相似性,与水稻和玉米分别有97%和93%的相似性。还讨论了该基因具有的系统学意义。     

濒危植物缙云卫矛细胞色素氧化酶的同工酶变异

采用丙烯酰胺琼脂电泳技术,对重庆北碚缙云山麓特产缙云矛３个居群的３６个个体功能叶片细胞色素氧化酶的同工酶谱带进行了测定,并进行编码,然后采用Ｓｏｋａｌ－Ｓｎｅａｔｈ结合系数的组平均法（ＵＰＧＭＡ）和Ｓｏｋａｌ－Ｍｉｃｈｅｎｅｒ结合系数的加权平均法（ＷＰＧＭＡ）对各酶谱带进行聚类分析;同时结合遗传杂合度（Ｈｅ）、遗传相似性系数（Ｉ）、遗传距离（Ｄ）进行遗传分析。结果表明,来自同一居群的个体,不但同工     

K型小麦不育系花药壁细胞色素氧化酶的分布

用电镜细胞化学定位技术，对ｍｓ（Ａｅ，ｋｏｔｓｃｈｙｉ）－７７（２）雄性不育花药及其保持系花药壁四层组织和维管组织细胞中的细胞色素氧化酶进行了定位和相对定量的研究。结果表明，药壁中层、绒毡层细胞内细胞色素氧化酶的变化，不育系与其保持系基本一致，而药壁表皮、药室内壁和维管组织细胞内线粒体中的细胞色素氧化酶的含量明显低于其保持系。推测，细胞色素氧化酶活性降低可能是导致花粉败育的重要因素之一。     

乐果急性、亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶及细胞色素氧化酶影响的研究

对6周龄雄性SD大鼠分别单次灌胃给予50%(LD50)的乐果、连续5 d灌胃给予20%(LD50)的乐果,观察给药后至屠宰前大鼠的急性、亚急性毒性反应。采用丁酰硫代胆碱法测定红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶;采用定量RT-PCR法测定试验大鼠肝脏中细胞色素氧化酶8个亚型的表达量。结果表明:供试大鼠用药后不同时间出现了呕吐、流泪、流涎、震颤等典型的有机磷药物中毒症状。红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶均明显降低,以试验组和对照组脑组织中胆碱酯酶差异最为显著,急性暴露组大鼠脑组织中的胆碱酯酶降低80.12%,亚急性暴露组大鼠脑组织中的胆碱酯酶降低93.13%,试验组大鼠细胞色素氧化酶中CYP2B1/2亚型的表达量明显增加,为对照组大鼠表达量的4~8倍。     

家蚕细胞色素C基因的克隆及其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放

 【目的】细胞色素C是线粒体凋亡路径上的关键因子,通过家蚕细胞色素C基因的克隆和其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放研究,为家蚕细胞凋亡的研究奠定基础。【方法】利用生物信息学和分子生物学方法克隆家蚕细胞色素C基因,通过紫外线照射诱导家蚕细胞凋亡,应用流式细胞仪和Western-blotting检测家蚕凋亡细胞的线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放。【结果】在家蚕中克隆了一个含有细胞色素C保守结构域的同源基因,该基因cDNA长570 bp,有3个外显子,开放阅读框（open reading frame,ORF）长324 bp,编码108个氨基酸,存在参与细胞凋亡时与下游凋亡蛋白酶激活因子（Apaf－1）相互作用的保守关键位点;紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1凋亡后12 h,细胞线粒体跨膜电位明显下降,同时检测到了细胞色素C由线粒体向细胞质释放。【结论】在家蚕细胞凋亡中可能存在细胞色素C由线粒体释放的路径。     

温光诱导甜菜当年抽薹过程中细胞色素氧化酶的分析

通过温光条件诱导甜菜 (Beta vulgaris L .)当年抽薹的过程中 ,诱导株内部发生着复杂而综合的生理和生化过程 ,在低温春化后细胞色素氧化酶活性表现出较高水平 ,以后随着生育的进程而逐渐降低 ,与对照组差异显著。试验设计中首次运用甜菜材料进行了细胞色素氧化酶的超微细胞化学定位 ,并与上述结果相互佐证 ,结果表明     

两种鲷属鱼类线粒体COI基因片段序列的比较

利用通用引物成功扩增了黄鳍鲷和黑鲷的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基（COI）基因序列。通过序列测定，得到581bp的基因片段，碱基A、T、G、C平均含量分别为25．8％、32．6％、18．0％和23．6％，序列中的A＋T含量明显高于G＋C含量，与其他鱼类的C01基因片段研究结果相一致。通过序列分析发现黄鳍鲷和黑鲷两序列共存在14处碱基变异，其中在第19～139bp之间检测到13个变异位点，是变异频率较高的区段，可以考虑作为鲷属或者种群鉴别的分子标记。与黄鲷、真鲷、三长棘真鲷等鱼类比较，无插入和缺失位点，转换明显高于颠换。序列差异比较结果显示，真鲷与黄鳍鲷的序列差异在这5种鱼类中最大，达到了18．2％，黄鳍鲷和黑鲷的筹异最小（2．4％）。两个序列已提交到GenBank数据库中．序列臀录号为DQ185608和DQ185609.     

蕉类果实催熟过程中多酚含量、多酚氧化酶和过氧化物酶活性变化研究

研究了5个蕉类品种在果实催熟过程中多酚含量、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性的变化.蕉类果实催熟后,其多酚含量均有所提高,不同品种的多酚含量表现为鸡蕉＞红达卡蕉＞大蕉＞粉蕉＞威廉斯蕉;PPO活性除了大蕉呈现先降低再升高而后降低的趋势外,其他4个品种均呈现先升高而后降低的趋势,不同品种的PPO活性表现为红达...     

钼对小鼠后代醛氧化酶和黄嘌呤氧化酶转录水平的影响

试验选用60只二月龄的清洁级ICR小鼠,随机分成4组,每组10只雌性和5只雄性小白鼠,雌雄分开饲养,饮水中加入不同剂量的钼,分别是空白对照组、低钼组(100 mg.L-1)、中钼组(200 mg.L-1)、高钼组(400mg.L-1),4周后雌雄合笼饲养。产仔后从每组仔鼠中随机雌性小白鼠30只和15只雄性小白鼠按原分组给予不同剂量的钼,8周后,再从每组中随机选取雌性小白鼠10只和5只雄性小白鼠合笼饲养,待其产仔。如此往复,使小鼠繁殖四代。以第三代(F2代)作为研究对象,应用实时荧光定量PCR的方法测定肝脏AOX和XO的转录水平。结果表明,与对照组相比F2代小鼠AOX和XO的转录水平随钼添加剂量的增加呈递增趋势,实验组与对照组差异显著(P<0.05)。可见长期钼暴露可提高小鼠后代AOX和XO的转录水平。     

茶树扦插生根过程中3种氧化酶活性及多酚含量变化研究

对3个国家茶树品种扦插生根情况以及扦插过程中3种氧化酶活性和茶多酚含量变化进行研究。结果表明,不同品种间扦插繁育能力存在差异,扦插成活率排序为：皖茶91>舒茶早>石佛翠。在扦插过程中,PPO活性均呈上升→下降→上升趋势,扦插15 d时达到高峰且皖茶91高于舒茶早和石佛翠;POD活性与扦插生根呈负相关,除石佛翠呈上升趋势外,其他2个品种均先降后升;IAAO活性除石佛翠基本无变化外,其他2个品种均呈上升→下降→上升趋势,皖茶91变化幅度比舒茶早大;这3种氧化酶与茶树扦插成活率具有明显的相关性。插穗叶片中茶多酚含量的增加也有利于插穗成活率的提高。     

菜豆果实发育过程中多胺氧化酶活性与多胺含量的变化

对菜豆（Phaseolus vulgaris L．）果实发育过程中的多胺氧化酶（Polyamine oxidase,PAO）活性及腐胺（Putrescine,Put）、亚精胺（Spermidine,Spd）和精胺（Spermine,Spm）等3种多胺（Polyamines,PAs）含量的变化动态进行了测定和分析．结果表明,花后果皮PAO活性变化呈明显的下降趋势,但从种子中未能检测到PAO活性;花后第2d果皮中的Spd含量最高,随后Spd和Spm含量变化大致呈“W”型,而Put含量则呈先升后降的趋势;花后第2d,种子中的Put、Spd和Spm含量均显著高于其在果皮中的含量,但在花后第2—8d迅速下降,随后降速趋缓;花后果皮和种子中3种PAs的总含量变化均呈下降趋势,且花后第2～8d种子中的PAs总含量远高于果皮．     

巨(魾)细胞色素氧化酶基因多态性及系统进化研究

采用PCR技术克隆得到12尾巨(魾)(Bagarius yarrelli)的细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)、细胞色素氧化酶Ⅱ(COⅡ)和细胞色素氧化酶Ⅲ(COⅢ)的基因序列.结果显示:巨(魾)CO Ⅰ基因序列全长1 551 bp,12个个体共出现9个单倍型,13个突变位点;COⅡ基因序列全长691 bp,12个个体共出现5个单倍型,5个突变位点;COⅢ基因序列全长784 bp,12个个体出现7个单倍型,8个突变位点.通过最小进化法Minimum Evolution (ME)构建系统发育树分析显示,巨(魾)与14种鱿科鱼在序列上有一定的同源性,并且CO Ⅰ、COⅡ和COⅢ都与中华纹胸姚(Glyptothorax sinense)、福建纹胸鱿(Glyptothorax fukiensis)、三线纹胸鱿(Glyptothorax trilineatus)和长丝黑鱿(Gagata dolichonema)在同一个分支,表明巨(魾)与纹胸鱿属和黑跳属有较近的亲缘关系.     

豚草提取液对小鼠肝脏CarE活性及蛋白质含量的影响

采用超声法提取豚草活性物质,通过灌胃给药途径喂给小白鼠,以有机磷药剂敌敌畏(DDVP)和空白组作为对照,研究豚草提取液对哺乳动物肝脏羧酸酯酶(CarE)活性及蛋白质含量的影响。结果表明:豚草提取液对小鼠肝脏CarE活性有激活作用,在给药后6 h内酶比活力值上升显著,达到15.006 μmol/（min•mg）;随后逐渐降低,24 h时酶比活力值降至9.156 μmol/（min•mg）,基本恢复至正常水平。DDVP对小鼠肝脏CarE活性产生明显抑制作用,给药后其CarE活性始终处于被抑制状态,显著低于空白组,且恢复缓慢。豚草提取液和DDVP均对小鼠肝脏蛋白质含量有抑制作用。作为杀虫抑菌制剂,豚草活性物质的安全性显著优于有机磷药剂。