一氧化氮对猪腔前卵泡颗粒细胞凋亡的影响

本试验旨在研究在培养液中添加不同浓度的NO供体硝普钠(sodium nitro-prusside,SNP)(0、0.001、0.01、0.1、1.0 mmol/L)处理,研究培养4 d后的腔前卵泡颗粒细胞凋亡情况。结果表明,1.0 mmol/L SNP组凋亡率显著高于其他各组(P0.05),而0.001 mmol/L SNP组凋亡率显著低于其他各组(P0.05)。说明高浓度的SNP对猪腔前卵泡颗粒细胞凋亡起促进作用,低浓度的SNP起抑制作用。     

猪三种不同直径卵泡中颗粒细胞的比较研究

为探究不同直径有腔卵泡中猪卵巢颗粒细胞的生理机能差异,以期为后续生殖毒理学研究奠定基础。采用剖剪法获取猪卵巢内三种直径范围的有腔卵泡（小型〈2mm,中型2-5mm,大型≥5mm）并获得颗粒细胞,台盼蓝染色方法计算细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞形态并计算细胞纯度,实时定量方法检测促卵泡刺激素受体基因（FSHR）及促黄体生成素受体基因（LHR）的表达进一步鉴定颗粒细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线。结果显示从大中小三种不同直径有腔卵泡中获得的猪卵巢颗粒细胞存活率分别为68%、75%、72%,纯度分别为97%、95%、90%;细胞生长曲线表明,从24h开始进入对数生长期,并于120h达到最大值,且中型卵泡中获得的颗粒细胞生长增殖状态最佳;实时定量结果显示FSHR在猪三种直径的有腔卵泡颗粒细胞中均表达阳性,且呈现差异。     

猪囊尾蚴总RNA的提取与mRNA的分离

目的为比较对猪囊尾蚴总RNA提取与mRNA分离方法的优点。方法采用Promega公司的SV总RNA分离体系、RNAgents总RNA分离体系和hioDev—Tech的TRIZOL LS试剂,对猪囊尾蚴总RNA进行了提取;用Promega的PolyA Ttract mRNA分离体系和Amersharn的Quickprep微量mRNA纯化试剂盒对mRNA进行分离。结果表明经改良的TRIZOLLS试剂,提取猪囊尾蚴RNA效果好,而PolyA Ttract mRNA分离体系分离的mRNA含量高,纯度好。结论所分离的mRNA适合于构建cDNA表达文库。     

家禽卵泡颗粒细胞体外培养方法研究进展

家禽卵巢中颗粒细胞在卵泡发育和闭锁中起着重要作用,包括信号传递、营养供给以及离子平衡等。卵泡颗粒细胞的增殖与分化自身也受到生殖激素和细胞因子的综合调节,其作用机制是当前研究热点。家禽卵泡颗粒细胞的体外培养可作为研究繁殖生理调节的理想细胞模型。本文对家禽卵泡颗粒细胞的体外培养研究现状及颗粒细胞在卵泡生长发育和闭锁中的作用进行简要概述,并总结了原代颗粒细胞体外培养模型的建立方法。     

miR-15a对猪卵泡颗粒细胞BDNF基因表达的影响

为探索miR-15a对猪卵泡发育的影响,选取健康大卵泡、中等卵泡和闭锁卵泡,研究不同卵泡中miR-15a的相对表达量以及其是否对卵巢颗粒细胞中有BDNF表达具有调节作用。分别抽取直径3-5 mm、大于5 mm健康卵泡和3-5 mm闭锁猪卵泡,采用q PCR检测发现闭锁卵泡中miR-15a表达显著升高。免疫组化结果显示中等健康卵泡颗粒细胞上BDNF、Tr KB均有表达,而在靠近卵泡腔的凋亡颗粒细胞BDNF免疫阳性反应较弱。分离培养猪卵巢颗粒细胞,过表达miR-15a能显著上调BDNF基因表达水平,Bcl-2基因表达有下降趋势但差异不显著;抑制miR-15a表达能显著抑制BDNF、bcl-2基因表达水平。Western-Blot结果发现,过表达miR-15a显著下调BDNF蛋白水平,而抑制miR-15a表达则能显著上调BDNF蛋白水平。实验结果显示miR-15a可能经由其靶基因BDNF参与猪卵泡的发育和闭锁。     

颗粒细胞对卵泡发育的影响

卵泡发育是一个复杂的生理过程,通过间隙连接,颗粒细胞在卵母细胞的生长发育过程中起营养作用,并促进卵母细胞的成熟;颗粒细胞和膜细胞的相互作用是卵泡发育和维持正常功能的重要条件。作为卵泡发育的标志,颗粒细胞的生长分化是原始卵泡启动和生长的关键,并通过受体介导途径调控生长期卵泡的发育及卵泡闭锁,从而在卵泡发育过程中起重要的调控作用。     

骨组织中总RNA提取方法的改进

为了改进经典Trizol法,我们建立了一种有效提取矿化骨组织中总RNA的新方法。在Trizol裂解时加入等体积水饱和酚,在异丙醇沉淀时加入高浓度的盐溶液,并重复氯仿抽提1次。通过紫外分光光度法和1%甲醛变性凝胶电泳法分析提取RNA,以其逆转录cDNA为模板,经PCR扩增雌激素受体(ER)基因予以鉴定。结果,本方法获得的总RNA A260/A280达到1.85以上,电泳条带显示RNA完整,RT-PCR结果显示其纯度较好。结果表明,改良Trizol法是一种从矿化骨组织中提取总RNA的高效便捷的方法。     

CRABP1过表达载体的构建及其对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响

本实验通过构建猪视黄酸结合蛋白1(Cellular Retinoic Acid-Binding Protein1,CRABP1)过表达载体并揭示其对猪卵泡颗粒细胞凋亡的效应.从猪卵巢组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR克隆CRABP1基因,并使用T4连接酶将其连入pcDNA3.1载体,进一步转化到感受态...     

啮齿动物卵泡颗粒细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡一直是生物学研究的热门课题.卵泡颗粒细胞凋亡引起的卵泡闭锁是卵巢衰退的原因之一,揭示卵泡颗粒细胞凋亡的分子机制有助于降低细胞的凋亡率,延长卵巢寿命.本文对细胞凋亡的过程与调控机制以及影响啮齿类动物卵泡颗粒细胞凋亡的因素进行阐述,为进一步研究细胞凋亡调控机制奠定理论基础.     

猪卵泡闭锁期间凋亡因子对颗粒细胞的影响

在哺乳动物卵巢中,约有99%的卵泡经历一个"闭锁"的退化过程,在卵泡发育期间仅有少数发育、排卵.多数未知的分子机制(包括细胞死亡配体-受体系统)是控制哺乳动物闭锁卵泡上颗粒细胞凋亡的主要因素,在猪卵巢颗粒细胞的报道中至少有5种细胞死亡配体-受体系统.文章阐述了猪卵泡闭锁期间凋亡因子对颗粒细胞的影响.     

颗粒细胞生长发育及其在卵泡发生中的作用

本文简述了影响颗粒细胞分裂化以及生长与机能的因素，阐明了颗粒细胞在卵泡发生及随后的卵母细胞受精与胚胎发生中的作用，并探讨了颗粒细胞在卵母细胞体外成熟中的应用。     

颗粒细胞凋亡影响家禽卵泡闭锁的研究进展

卵巢是家禽的重要繁殖器官,会产生大量卵泡,而卵泡在生长发育的各个阶段中都可能因为不同因素的调控而发生闭锁,最终导致繁殖性能衰退。颗粒细胞对卵泡的生长发育有重要调控作用,其凋亡会诱导卵泡发生闭锁。诱导颗粒细胞发生凋亡的因素较多,包括激素、细胞因子、氧化应激、线粒体及其他体外因素。颗粒细胞凋亡主要由线粒体途径导致,其涉及到半胱天冬酶（Caspase）家族参与,当线粒体裂解时会释放细胞色素C （Cyt-C）,随后形成凋亡小体激活Caspase-3和Caspase-8,最终激活Caspase-9导致颗粒细胞凋亡;当颗粒细胞发生凋亡,家禽体内卵泡丧失生物功能并且卵泡细胞之间的调控失衡,促使卵泡内卵母细胞和膜细胞凋亡,最终导致卵泡发生闭锁;颗粒细胞在存活状态下所分泌的生长因子、性腺类固醇、细胞因子能减少卵母细胞氧化损伤,防止细胞内活性氧（ROS）水平过高导致的线粒体DNA损伤,从而避免线粒体功能障碍而造成的颗粒细胞凋亡。作者从颗粒细胞凋亡及其影响因素、颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁的关系、颗粒细胞凋亡对卵泡闭锁的影响3个方面进行阐述,以期为减少卵泡闭锁、提高家禽繁殖性能提供理论依据。     

绵羊卵泡颗粒细胞的体外培养与保存

哺乳动物卵巢内含有数量庞大的腔前卵泡,然而在生理条件下,这些卵泡只有大约1%能发育到成熟的排卵阶段,其余都由于闭锁而退化,这是对雌性繁殖潜力的极大浪费。通过在体外培养复苏这些卵泡的生长,可以为体外受精,克隆和转基因等生物工程技术提供潜在的同种质卵母细胞来源[1]。特别是随着克隆和转基因技术的发展,将来对卵母细胞的需要越来越大,只靠回收窦腔卵泡中的卵子已经不能满足需求,通过体外培养卵巢组织或者卵泡,复苏卵巢中占主导地位的腔前卵泡的生长,可以加强我们对卵泡颗粒细胞生存、发育的生理调节机制的了解,对于提高高遗传和经济价值的家畜以及在科研上具有重要价值的动物的繁殖潜力,珍稀或濒危动物的保护以及人类生育能力的保存和辅助受孕具有重大意义[2]。     

花生四烯酸对家禽卵泡颗粒细胞的影响

花生四烯酸是一类顺式多不饱和脂肪酸,是动物细胞膜磷脂的重要组成部分。在家禽生产中,花生四烯酸作为一种必需脂肪酸调控家禽的生长发育;而且作为功能性营养因子,通过在禽蛋中的蓄积来满足人体需求。除了作为前列腺素合成的前体物调节动物生殖过程外,花生四烯酸在调节卵泡颗粒细胞功能的过程中也起重要作用。     

辽宁绒山羊卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的研究

采用TUNEL原位法和DNA梯度电泳法等方法对卵巢上闭锁卵泡中凋亡的颗粒细胞类型和分布状况等进行研究.结果表明,辽宁绒山羊闭锁卵泡是细胞凋亡引起的.DNA梯状电泳表明,不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡程度不同;而颗粒细胞TUNEL原位标记表明,健康卵泡、轻度闭锁卵泡及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡比例分别为13.21%±1.23%、32.13%±2.13%、51.31%±3.02%;不同健康程度卵泡中类固醇激素水平不同,健康卵泡中E2水平较高,孕酮浓度较低;闭锁卵泡中E2浓度较低,P4浓度较高,健康、轻度闭锁和闭锁三类卵泡中E2/P4比值分别是2.62±0.03、0.074±0.000 3、0.028±0.000 4.     

瘦素和FSH对绵羊卵泡颗粒细胞孕激素分泌的影响

试验旨在探明瘦素和卵泡刺激素(FSH)对绵羊卵泡颗粒细胞孕激素分泌的影响并建立瘦素和FSH之间的相互作用.从屠宰场收集健康母羊的卵巢,机械分离卵泡,收集卵泡颗粒细胞.在细胞培养液中加入不同浓度的FSH(0 U/mL,2.5 U/mL,5 U/mL,7.5 U/mL,10 U/mL)培养24 h和48 h,通过MTT检测...     

苜蓿总RNA提取方法比较研究

以苜蓿叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法、Tris-热硼法和尿素法等五种方法提取的苜蓿总RNA的质量和纯度.结果表明:改良CTAB法提取的RNA的OD260nm/OD230nm大于2.O并且OD260am/OD280nm接近1.8,具有较高的纯度.凝胶电泳结果表明,改良CTAB法有28SrRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解;其它四种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象.将改良CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增后出现4条清晰的条带,进一步证明了改良CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求.     

牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养

分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系.采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察2种细胞的生长方式和形态特点.输卵管上皮细胞贴壁生长时,呈多边形,且呈单层成簇生长.培养144 h～216 h,可形成细胞单层.颗粒细胞贴壁生长时,呈现聚集生长特性,贴壁细胞形状不规则,呈放射状.培养72 h～96 h,形成颗粒细胞单层.     

柱花草总RNA提取方法比较

以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis Reyan No.2）叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较SDS 酚抽提法、CTAB法、Trizol试剂盒和柱式植物RNAout试剂盒法提取柱花草总RNA的质量和纯度。结果表明,改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA的OD260 nm/OD280 nm分别是1.85和1.93,OD260 nm/OD230 nm均大于2.0。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法及柱式植物RNAout试剂盒法均有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。其他两种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA逆转录成cDNA,cDNA能扩增出一条清晰的β actin基因片段,进一步证明了改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的总RNA具有很高的纯度,其中柱式植物RNAout试剂盒法的效果好于改良CTAB法。     

牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养

从牦牛输卵管壶腹部获取上皮细胞,用抽吸法从牦牛卵泡中获取颗粒细胞,对牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞进行体外培养和传代的培养,观察培养过程中2种细胞原代和传代培养的生长方式及形态特点。两者培养144~216 h可形成融合的单层细胞,其传代密度保持105~106/mL为宜。