马铃薯纺锤块茎类病毒株系鉴定

 以加拿大的马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTV)强毒、中毒和弱毒株系样品作对照,用改进的往返-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,鉴定了发生在我国北方种植的马铃薯上的PSTV株系类型。从60个马铃薯品种488个样品中,所有检测到的PSTV的电泳迁移率与加拿大的弱毒株系迁移率相同。表明所有检测到的PSTV都属弱毒株系。首次明确发生在我国北方种植的马铃薯上的PSTV以弱毒株系为主要类型。没有分离到强毒株系或其它株系。     

马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）脱除技术研究进展

马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）是影响马铃薯生产、育种和种质资源保存的重要病原。脱除PSTVd是其防控的重要手段之一。本文综述了PSTVd的发生情况及其危害以及主要脱除技术。同时分析了PSTVd脱除工作中存在的主要问题及其难以脱除的可能机制,并提出了意见和建议,以期为PSTVd防控提供借鉴。     

马铃薯纺锤块茎类病毒核糖核酸(PSTV-RNA)的分离结果

作者在本文报道的是:从选自克山农科所1978年夏播田克新二号品种马铃薯纺锤块茎(经茎尖培养汰除其它病毒而未脱掉 PSTV)1979年在北京西郊栽培的植物叶组织,提取2M LiCl 可溶性核糖核酸,经5%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出 PSTV—RNA。马铃薯纺锤块茎病害在我国最早发现于黑龙江省,一般减产率达20～70%。     

4个马铃薯品种感染马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的症状

马铃薯纺锤块茎类病毒在中国及世界许多国家都是检疫性病害, 该病害可大幅度降低马铃薯产量和品质。根据植株及块茎的症状, 汰除感病的马铃薯种薯, 是控制PSTVd传播和危害的重要手段。本研究利用分子克隆及测序技术, 分离并鉴定了PSTVd的分离物351-17, 利用PSTVd田间接种技术, 分别接种了4个黑龙江省常用的马铃薯品种‘夏坡地’、‘克新18’、‘荷兰15’和‘尤金’, 对其侵染后第一代的株高、叶片、块茎外观和单株产量进行了调查, 结果表明：4个供试马铃薯品种感染PSTVd后均表现出了一定的症状, 其中‘克新18’在株高、叶片和块茎的症状方面最为明显, 单株产量下降显著, 表明其对PSTVd非常敏感。     

马铃薯纺锤块茎类病毒的检测和防治

马铃薯纺锤块茎类病毒病(potato spindle tuber viroid,PSTVd)是一种严重为害马铃薯生产的病害,降低产量20%—30%。防治的主要措施是应用无类病毒的种薯。由于目前还没有脱掉类病毒的有效措施,只能从未被饱和侵染的群体中鉴定筛选出未被侵染的个体,再脱掉其它病毒,作为核心繁殖材料。1987年以来,利用自制的电泳设备,以往复聚丙烯酰胺凝胶电泳法(return-polyacrylamide gel electrophoresis,R-PAGE)检测类病毒,筛选出未感病的个体,再用茎尖组织培养法脱掉其它病毒。经用马铃薯卷叶病毒等8种病毒酶标抗体鉴定筛选,获得既无类病毒也无主要马铃薯病毒的克新1、2、3和4号等主栽马铃薯品种的核心种。并已提供给省内外的良种场繁殖推广。1989和1990年抽样检测克山良种场繁殖的原种、一级和二级良种,未检测到类病毒。     

宁波海关邮路全国首次截获检疫性有害生物——马铃薯纺锤块茎类病毒

正2020年5月,宁波邮局海关从来自冰岛的邮件中截获1罐(0.08 kg)非法进境辣椒种子,经实验室检疫鉴定发现,其携带检疫性有害生物——马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd),这是宁波邮局海关首次从非法邮寄进境的植物种子中截获该类病毒。马铃薯纺锤块茎类病毒可引起马铃薯块茎纺锤形病变,严重威胁着马铃薯的生产、保存和育种工作。该病害在美国、加拿大的马铃     

枸杞马铃薯纺锤块茎类病毒的鉴定

<正>0 引言枸杞(Lycium Linn.)属于茄科枸杞属落叶灌木,为药食兼用植物,具较高的药用和食用价值,是我国传统中药材和重要的经济作物^[1]。随着枸杞产业的快速发展,需求量逐年增加,人们对枸杞品质的要求也越来越高。病毒是植物常见病原物的一种,病毒感染寄主后会利用寄主成分进行复制,通常会引起寄主生长缓慢、树势衰退、果实品质下降等问题。目前,枸杞上发生的病毒或类病毒尚未见报道,因此,为保障枸杞产业的健康发展,     

马铃薯类病毒(PSTVd)非放射性标记cDNA探针制备及其在检测上的应用

 利用含PSTVd单体克隆的重组质粒pGEM PSTVd,通过PCR扩增技术,用生物素标记制备cDNA探针,进行杂交反应检测PSTVd,其中通过化学颜色反应进行判读灵敏度可达50pg,而用化学发光反应进行判读灵敏度可达5pg,分别是R-PAGE检测灵敏度的26倍和260倍,且2种反应特异性和专化性较强。cDNA核酸斑点杂交反应(NASH)检测PSTVd方法准确、灵敏度高,一次检测样品数量多,且对异地样品检测非常方便,是以往其它检测方法的有效补充。     

利用线虫防治马铃薯块茎蛾

S.carpocapsae隶属于能侵染4目100多种昆虫(包括马铃薯块茎蛾)的Sfeinernema线虫科。以其幼虫肠中共生的细菌(Achromobacter nematopnilus)进入昆虫血淋巴后引起败血病死亡。紫外线可制约其效果。每块茎蛾幼虫上的致病体120个以上时,3天内可使该幼虫死亡率达97.8％,从每蛾幼虫产生的有侵染力线虫的幼虫数最高达1.3万～1.7万个。     

不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

 灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。     

Simplified application of return gel electrophoresis for the routine detection of potato spindle tuber viroid

The return gel electrophoresis method for the detection of potato spindle tuber viroid has been modified to simplify its use for large-scale testing. The quantities of dissolvents for the extraction of nucleic acids were reduced and adapted to the use of disposable plastic tubes. The vertical electrophoresis system was replaced by a horizontal one, which was easier to handle. Migration distance for the separation of PSTV bands was shortened, saving time for the electrophoretic run. A single-buffer system was used. The detection limit was estimated as 0.3 ng per slot. It was possible to detect both mild and severe strains of PSTV.     

Development of a standard method for detection of potato spindle tuber viroid in potato plants

A standard test method for detecting viroids was designed, to be applied on imported plant material, for which a zero-tolerance exists in the Netherlands towards potato spindle tuber viroid (PSTV).Partial purification of nucleic acids after homogenizing leaf material with a Polytron homogenizer, followed by increasing the viroid concentration by inoculation of an intermediate tomato host, and complete purification of the small nucleic acids from the tops of these plants, followed by polyacrylamide gelectrophoretic analysis, proved successful. With this procedure, now used as a standard method, more samples could be handled than with other methods tested.Desalting by Sephadex filtration proved to be superior to dialysis. An attempt to develop a serological test for PSTV failed. Albinism, induced in PSTV-infected tomato plants by certain environmental conditions, was not of diagnostic value.

---

Samenvatting Voor het viroïde, dat de aardappelspindelknolziekte veroorzaakt (ASKV) geldt in Nederland een nultolerantie. Al het geïmporteerde aardappelmateriaal wordt daarom getoetst op het voorkomen van het viroïde. Voor dat doel is een betrouwbare en, zo mogelijk, ook snelle toets noodzakelijk, die niet alleen secundaire infecties maar ook jonge, primaire infecties kan aantonen.Een standaardmethode, die werd ontwikkeld, bleek zeer betrouwbaar, hoewel niet snel. Zij toont meer infecties aan dan snellere methoden die in het buitenland beschreven zijn. De toets omvat de volgende stappen: 2–5 g bladmateriaal wordt vermalen en op het homogenaat wordt een eenvoudige nucleïnezuurextractie en-concentratie toegepast. Dit preparaat wordt gebruikt om vier jonge tomatezaailingen te inoculeren. Door deze zaailingen 4 weken onder optimale omstandigheden te houden wordt het eventueel aanwezige viroïde vermeerderd. Geeft tenminste één van de tomateplanten symptomen, dan wordt het oorspronkelijke monster ziek verklaard. Vertoont geen van de vier tomateplanten symptomen dan wordt een nucleïnezuurextractie uitgevoerd van de topjes van deze planten. Kleine nucleïnezuurmoleculen worden geïsoleerd, geconcentreerd en tenslotte geanaliseerd met behulp van polyacrylamide gelelektroforese.Om overdracht van het ene naar het andere monster te voorkomen werd voor het vermalen gebruik gemaakt van verwisselbare schachten bij de Polytron homogenisator.Ontzouten van de nucleïnezuurextracten met Sephadexfiltratie gaf betere resultaten en was sneller uitvoerbaar dan dialyse.Pogingen om een specifiek antiserum tegen ASKV te maken zijn niet gelukt. Onder onze omstandigheden was het ook niet mogelijk om op een betrouwbare manier albinisme in geïnfecteerde planten te induceren als middel om infecties met ASKV op te sporen.

     

Comparison between ELISA and bio tin-la belled probes from cloned cDNA of potato virus X for the detection of virus in crude tuber extracts

Diseases caused by potato virus X (PVX) are of significant agronomic importance, and early detection is vital. Biotinylated DNA probes were prepared by random-primed labelling from cDNA inserts and used for the detection of PVX in crude extracts of infected tubers. The minimum detection level in these extracts is in the order of femtograms of PVX RNA. Comparison with ELISA showed that the hybridization method is 100–250 times more sensitive. Probes prepared by this method are highly specific for target RNA even in crude tuber extracts.     

Development of an EU protocol for the detection and diagnosis of Potato spindle tuber pospiviroid*

The work described here formed part of the EU SMT DIAGPRO project, to develop diagnostic protocols for 18 regulated pests. The Potato spindle tuber pospiviroid (PSTVd) protocol was developed primarily for testing in vitro‐ and glasshouse‐grown potato plants for the purposes of post‐entry quarantine and the production of pathogen‐tested nuclear stock. After a performance audit of methods used by 12 laboratories in Europe and America by ring testing, four methods were chosen for multilaboratory validation. For most laboratories, the detection limits were 10–20 mg of PSTVd‐infective tissue for R‐PAGE; 0.25–0.5 mg for DIG‐probe; 0.062 mg for RT‐PCR; and 0.0155 mg for TaqMan (this was the lowest weight of infective tissue tested). Some laboratories were able to extend the detection limit to 0.0155 mg for DIG‐probe and RT‐PCR. The DIG‐probe and R‐PAGE are recommended as primary detection methods, with confirmation of viroid presence by any of the four validated detection methods. Specific diagnosis requires the viroid to be sequenced. Other methods may be used for primary detection, providing that they preferably detect all PSTVd isolates and other Pospiviroids that have the potential to infect potato, and detect viroid in at least 1/10 of the tissue weight normally tested per plant.     

法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析

为检测法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒（Hop stunt viroid,HSVd）,对其进行了RT-PCR检测及序列测定,并构建系统进化树比较了不同地域来源HSVd间的分子差异性。结果表明基于HSVd基因序列设计合成的1对引物能够扩增出302 bp大小的目标片段,而健康植株无此扩增产物。法国葡萄砧木中检出的HSVd分离物,与国内外已报道毒株的核酸序列同源性达90%~97%,与已报道的HSVd全基因组序列间差异较小,表明HSVd的序列变异与地域、寄主等无明显相关性。     

梨泡状溃疡类病毒的RT-PCR检测及序列分析

正梨泡状溃疡类病毒(Pear blister canker viroid,PBCVd)为马铃薯纺锤块茎类病毒科(Pospiviroidae)苹果锈果类病毒属(Apscaviroid)成员~([1])。该类病毒在自然条件下主要侵染野生和栽培的梨和苹果~([2~4]),梨和榅桲多数品种感染PBCVd后无明显症状,通过嫁接传染该类病毒可诱导梨指示植物     

Transmission of potato spindle tuber viroid by aphids

Aulacorthum solani (Kaltenbach),Macrosiphum euphorbiae (Thomas) andMyzus persicae (Sulzer) were used for transmission experiments in laboratory and glasshouse. As inoculum served PSTV-containing tomato foliage and artificial diets containing purified PSTV. It is concluded thatM. euphorbiae can transmit PSTV in a non-persistent way.Samenvatting Aardappelspindelknolviroïde (PSTV) wordt tot een vrij nieuwe groep van pathogenen, de viroïden, gerekend. De ziekte, die er door wordt veroorzaakt, wordt sedert 1923 waargenomen in Noord-Amerika en is meer recentelijk ook aangetroffen in Afrika, Australië, Sowjet-Unie en Zuid-Amerika maar tot dusver niet in West-Europa.PSTV kan gemakkelijk mechanisch worden overgebracht. De overdracht door bladluizen was nog niet betrouwbaar vastgesteld. De bladluissoortenMyzus persicae (Sulzer),Aulacorthum solani (Kaltenbach) enMacrosiphum euphorbiae (Thomas) zijn daarom in overdrachtsproeven betrokken, waarbij als inoculum met PSTV geïnfecteerd blad en een door een membraan afgesloten gezuiverde PSTV-bevattende suspensie is gebruikt. Het laatstgenoemde type inoculum is gebruikt, om een mogelijke mechanische overdracht bij het overzetten van bladluizen van de viroïdebron naar de toetsplant tomaat cv. Sheyenne uit te sluiten. Er is vastgesteld, datM. euphorbiae PSTV op non-persistente wijze kan overbrengen.     

Comparison of direct-RT-PCR and dot-blot hybridization for the detection of Potato spindle tuber viroid in natural host plant species

Potato spindle tuber viroid (PSTVd) is an EPPO A2-listed quarantine pathogen and its detection in large scale surveys requires complex decision schemes. In this study, a simple and rapid application of direct-RT-PCR was evaluated together with dot blot hybridization for the detection of PSTVd in dormant potato tubers harvested from primary infected plants, as well as in tomato and solanaceous ornamental plants. In all infected dormant potato tubers tested, both direct-RT-PCR and dot blot hybridization detected two different PSTVd isolates, with direct-RT-PCR being ten times more sensitive than dot blot. Similarly, in infected tomato and Brugmansia spp., PSTVd was detected by direct-RT-PCR with higher sensitivity compared to that of dot blot hybridization. However, in Brugmansia spp., a ten-fold decrease of the typical working concentration of the sap was required for an unequivocal detection of the viroid by direct-RT-PCR. The potential to use direct-RT-PCR for routine PSTVd examination is discussed.