白血病抑制因子在胚泡植入期大鼠卵巢中的表达

采用免疫组织化学超敏SP法,对大鼠胚泡植入期卵巢组织内白血病抑制因子(Leukemia inhibito-ry factor,LIF)的表达进行了检测。结果表明,LIF在不同发育阶段卵泡的颗粒细胞中均有表达,在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡的卵母细胞中高表达,成熟卵泡的卵母细胞中等表达;在初级卵泡和次级卵泡的内膜细胞中LIF高表达,在成熟卵泡的内膜细胞低表达;在卵巢组织基质细胞、血管内皮细胞、粒性黄体细胞、生殖上皮中高表达,在卵泡液中中等表达。说明LIF在大鼠胚泡植入期卵巢中的多种细胞内均呈高水平表达。     

生长分化因子9在兔卵巢中的免疫组织化学定位

［目的］探讨生长分化因子9（GDF9）在兔卵巢卵泡发生过程中的调控机制。［方法］采用免疫组织化学方法测定GDF9蛋白在兔卵巢中的表达定位情况。［结果］GDF9在原始卵泡中没有表达;在初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞及有腔卵泡颗粒细胞、透明带及卵泡液中均检测到GDF9蛋白;在黄体中也有GDF9的表达。［结论］GDF9不仅是卵母细胞分泌因子,而且是颗粒细胞的分泌因子,其表达随兔卵巢中卵泡发生呈时空动态变化,在兔卵巢卵泡发生过程中发挥了重要作用,参与了黄体活动的调节。     

骨形态发生蛋白15在兔卵巢中的免疫组化定位

[目的]探讨BMP15蛋白在兔卵巢卵泡发生过程中的调控机制。[方法]采用免疫组织化学方法测定了BMP15在兔卵巢中的表达定位情况。[结果]BMP15蛋白在原始卵泡中没有表达,在初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞及有腔卵泡颗粒细胞和卵泡液中均有表达,在黄体溶解早期也有表达,但是在闭锁卵泡中的表达则受到抑制。[结论]BMP15参与了兔卵泡发育全过程,并且与黄体溶解机制有关;而在闭锁卵泡中,其低水平的表达可能是由其他因子所抑制,进而共同调节了卵泡的闭锁。     

白血病抑制因子(LIF)对繁殖能力的影响

白血病抑制因子是一种具有多种生物活性的细胞因子，对胚胎干细胞的生长、增殖与分化有广泛的作用，与胚胎发育、卵泡的发育、胚泡着床和性激素的分泌相关，并与流产有关。这表明LIF对繁殖功能起着重要的作用。     

羔羊卵巢AMH的免疫组织化学分析

为探讨AMH在羔羊和成年羊卵巢中时间和空间表达变化,揭示卵泡生长发育调控的机制。收集1月龄羔羊和正常成年羊卵巢,采用HE染色观察卵巢的组织学特征,免疫组化法检测绵羊卵巢AMH蛋白表达分布,RT-PCR技术分析卵巢卵丘细胞中AMH基因的表达变化。结果显示,卵巢HE染色后,对外源激素处理有反应的卵巢存在大量的大直径卵泡,且无中等卵泡和小卵泡,也没有黄体化和排卵;对外源激素没有反应的卵巢仅存在原始卵泡和少量的初级卵泡,无有腔卵泡。免疫组化结果显示,AMH存在于生长期的腔前卵泡和小的有腔卵泡,以及卵丘细胞,大多原始卵泡无AMH的表达,而在原始卵泡向初级卵泡转变,外层的颗粒细胞由扁平向柱状转变时AMH有表达,颗粒细胞存在表达AMH和不表达AMH 2种类型。RT-PCR结果显示,羔羊卵丘细胞的表达量高于成年羊。AMH可能参与卵泡发育的启动、向促性腺激素依赖期的转变等过程的调控,其功能作用还有待于深入研究。     

神经生长因子及其受体在蛋鸡卵巢上的表达

以83日龄性未成熟和230日龄性成熟蛋鸡各5只为试验动物,通过免疫组织化学方法和荧光定量PCR技术研究神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(TrkA)和神经营养素受体p75(p75)在蛋鸡卵巢和等级前卵泡上的表达定位及其mRNA表达水平。结果表明:在83日龄性未成熟蛋鸡卵巢上均未发现NGF及其受体TrkA和p75阳性表达细胞,但在230日龄等级前卵泡的膜细胞和颗粒细胞中均发现有其阳性细胞表达。NGF及其受体的mRNA表达水平在230日龄蛋鸡小黄卵泡(SYF)上的表达量显著高于各自在小白卵泡(SWF)和大白卵泡(LWF)上的表达量。此外,230日龄蛋鸡血清中的雌激素和孕激素水平都显著高于83日龄蛋鸡。综上所述,NGF可能在蛋鸡等级卵泡的生长、发育和排卵过程中起一定调节作用。     

PDGF及其受体mRNA在鹅不同等级前卵泡中的表达差异

为探讨血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)及其受体(PDGFR)mRNA在鹅等级前卵泡中的表达差异及生物学意义。选取健康的产蛋前期和产蛋期籽鹅各3只为试验材料,利用实时荧光定量PCR方法检测PDGF和PDGFR mRNA在产蛋前期和产蛋期鹅等级前卵泡(分为SYF、LWF、MWF、SWF、PE 5个等级)中的表达差异。结果表明:产蛋期PDGF及其受体mRNA在5个等级前卵泡中的表达量均高于产蛋前期(P0.05),说明PDGF及其受体mRNA对卵泡发育有促进作用;产蛋前期和产蛋期PDGF及其受体mRNA表达量均在初级卵泡(PE)中最高,说明初级卵泡是主要表达部位,其中颗粒细胞形态由扁平变成立方形后开始大量增殖,通过促进颗粒细胞的增殖进而促进卵泡发育;在初级卵泡向小白卵泡(SWF)发育过程中,PDGF及其受体mRNA表达量有明显下降(P0.05),推测这可能与PDGF抑制类固醇的合成进而抑制卵泡发育有关,使优势卵泡更有序的进行筛选。     

AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达

本研究旨在分析AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达特征,为水禽卵泡发育的分子机制研究积累基础资料。以连城白鸭为研究对象,通过定量PCR技术分别检测了卵巢不同等级卵泡中AMH基因及其相关调控基因的表达情况。结果表明,随着卵泡的发育,AMH及其相关基因AMHR2、BMP6、SF1、GATA4和WT1的表达量逐渐降低,而CYP19A1基因的表达量逐渐升高,SOX9和FSHR基因的表达量保持不变。我们推测AMH基因在鸭等级前卵泡中的高表达量可能有助于维持颗粒细胞未分化的状态,且可能是通过抑制FSHR信号通路来实现的。     

荆豆凝集素-1受体在犬子宫内的分布与激素调节

采用组织化学方法对荆豆凝集素-1(ulex europaeus agglutinin-1,UEA-1)受体在发情周期和早期妊娠犬子宫内的分布以及激素调节进行了研究。结果显示,UEA-1受体主要存在于犬子宫内膜腔上皮和腺上皮,其表达量随妊娠阶段的不同而发生动态性变化。UEA-1受体在休情期犬子宫内未见表达,而在发情期犬子宫内膜腔上皮和腺上皮内的表达量很高。在早期妊娠犬子宫内,在妊娠第6天和12天犬子宫内的表达量较低,此后其表达量逐渐增加,在妊娠第17天时,UEA-1受体在子宫内膜腔上皮和腺上皮内的表达量达到峰值,此后其表达量又逐渐下降,在妊娠第23天时未见表达。注射雌激素可明显促进卵巢切除后犬子宫内膜UEA-1受体的表达。结果表明,犬子宫内UEA-1受体的分布与胚胎着床前胚胎与子宫内膜之间的黏附和植入有关,UEA-1受体在犬子宫内的表达受母体分泌的激素所调控。     

C型尿钠肽在动物卵巢表达及对生殖机能影响的研究进展

C型尿钠肽（C-type natriuretic peptide, Cnp）为尿钠肽家族成员之一,广泛分布于动物大脑、肾脏、心脏及血管等组织,具有维持心血管系统功能稳态、调控细胞增殖及促进骨骼生长等功能。普遍认为哺乳动物有3种钠尿肽受体(Natriuretic peptide receptor, NPR) ：NPR1,NPR2和NPR3。Cnp主要通过结合NPR2受体激活下游信号通路,发挥生物学作用。Cnp信号传导通路的组成成分主要包括：配体（Cnp）、跨膜受体（NPR2）及cGMP等。当Cnp分子与跨膜受体NPR2结合后,使受体的激酶同型区域（kinase homology domain, KHD）构象发生变化,进而激活鸟苷酸环化酶,将GTP转化为cGMP后激活下游信号通路。目前,许多研究表明Cnp及受体在雌性动物卵巢上表达模式相似,Cnp主要在卵泡壁层颗粒细胞上表达,NPR2受体主要在卵丘颗粒细胞上表达。另外,动物体内卵泡生长期间,Cnp和受体Npr2表达受激素调控,FSH通过雌激素介导促进卵泡颗粒细胞Cnp和受体Npr2表达;同时卵母细胞通过分泌卵母细胞分泌因子促进了颗粒细胞Npr2表达。LH可能通过表皮生长因子信号通路降低卵泡颗粒细胞Cnp和受体Npr2表达。值得注意的是,研究表明Cnp与FSH功能类似能够促进动物卵泡发育,有利于卵丘颗粒细胞的形成,并能诱导一些与卵泡成熟和类固醇合成相关的颗粒细胞基因表达,揭示卵泡颗粒细胞分泌的Cnp与FSH具有类似的功能,作用于颗粒细胞上的受体分别经由cGMP和cAMP的信号通路影响颗粒细胞基因表达,刺激卵泡生长,促进卵母细胞成熟。另外,近年研究揭示Cnp是动物体内维持卵母细胞减数分裂阻滞的关键物质,卵泡壁层颗粒细胞分泌的Cnp,作用于卵丘颗粒细胞上的受体NPR2,激活鸟甘酸环化酶后将cGTP转化为cGMP,cGMP进入卵母细胞后抑制磷酸二酯酶phosphodiesterase, PDE)的活性,维持卵母细胞内高水平的cAMP,卵母细胞内高水平的cAMP通过激活蛋白激酶A（protein kinase A, PKA）使成熟促进因子（maturation promoting factor, MPF）的催化亚基磷酸化,进而抑制MPF的活性、维持减数分裂阻滞,但对裸卵没有影响,说明Cnp通过作用卵丘颗粒细胞间接影响卵母细胞减数分裂成熟。此外,研究表明Cnp体外前处理卵丘卵母细胞复合体,有利于卵母细胞胞质成熟,提高了成熟受精后的发育能力。综上,动物体内卵泡生长期间,卵巢内产生的Cnp可能通过影响颗粒细胞的正常功能,在维持卵母细胞减数分裂阻滞的同时促进胞质成熟,保证成熟受精后具有较高的发育能力。基于此,Cnp在用作生理性的减数分裂阻滞剂增强家畜卵母细胞体外发育方面将具有重要的应用前景。因此,论文综述了Cnp结构、信号转导通路、在动物卵巢上表达及对卵巢生殖机能的影响。     

Structure of an extracellular gp130 cytokine receptor signaling complex

The activation of gp130, a shared signal-transducing receptor for a family of cytokines, is initiated by recognition of ligand followed by oligomerization into a higher order signaling complex. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus encodes a functional homolog of human interleukin-6 (IL-6) that activates human gp130. In the 2.4 angstrom crystal structure of the extracellular signaling assembly between viral IL-6 and human gp130, two complexes are cross-linked into a tetramer through direct interactions between the immunoglobulin domain of gp130 and site III of viral IL-6, which is necessary for receptor activation. Unlike human IL-6 (which uses many hydrophilic residues), the viral cytokine largely uses hydrophobic amino acids to contact gp130, which enhances the complementarity of the viral IL-6-gp130 binding interfaces. The cross-reactivity of gp130 is apparently due to a chemical plasticity evident in the amphipathic gp130 cytokine-binding sites.     

Human vaginal secretions: volatile fatty acid content

Vaginal samples (682) were collected by a tampon method from 50 healthy young women. Samples were analyzed by gas chromatography. The volatile aliphatic acids increased during the late follicular phase of the menstrual cycle and declined progressively during the luteal phase. Women on oral contraceptives had lower amounts of volatile acids and did not show any rhythmic changes in acid content during the menstrual cycle. These same substances possess sex-attractant properties in other primate species.     

Characterization of gp41 as the transmembrane protein coded by the HTLV-III/LAV envelope gene

Radiolabeled amino acid sequencing was used to characterize gp41, an antigen of HTLV-III/LAV, the virus believed to be the etiological agent of the acquired immune deficiency syndrome. This antigen is the one most commonly detected in immunoblot assays by sera of patients with AIDS or AIDS-related complex (ARC) and other individuals infected with HTLV-III/LAV. A mouse monoclonal antibody that was reactive with gp41 precipitated a 160-kilodalton protein (gp160) in addition to gp41, but did not precipitate a 120-kilodalton protein (gp120) from extracts of metabolically labeled cells producing HTLV-III. Extracts of infected cells that had been labeled with tritiated leucine or isoleucine were immunoprecipitated with the monoclonal antibody. The immunoprecipitates were fractionated by polyacrylamide gel electrophoresis and the p41 was eluted from the gel bands and subjected to amino-terminal radiolabeled amino acid sequencing by the semiautomated Edman degradation. Leucine residues occurred in cycles 7, 9, 12, 26, 33, and 34 among 40 cycles and isoleucine occurred in cycle 4 among 24 cycles analyzed. Comparison of the data with the deduced amino acid sequence of the env gene product of HTLV-III precisely placed gp41 in the COOH-terminal region of the env gene product. Gp160 is thus the primary env gene product and it is processed into gp120 and gp41.     

山羊原始生殖细胞的分离与培养

从46例山羊胎儿中分离培养原始生殖细胞,发现胎龄在25～38d的胎儿原代培养时都可获得大量的细胞集落,适合做胚胎生殖细胞的分离培养,最高传至6代。以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)、山羊胎儿成纤维细胞(GEF)、牛胎儿成纤维细胞(BEF)为饲养层,在不添加细胞因子情况下,都可以培养出原代山羊的胚胎生殖细胞。传代结果表明,MEF的培养效果较好,但与GEF组差异不显著(P>0.05),BEF组培养效果较差(P<0.05)。以3个不同质量浓度LIF的培养液培养山羊原始生殖细胞(PGC)结果表明,在原代培养时,效果差异不显著(P>0.05);而在传代过程中,以含LIF10ng/mL组培养效果最好,但与含LIF5ng/mL组差异不显著(P>0.05),LIF1ng/mL组培养效果较差(P<0.05)。     

绵羊垂体促性腺激素细胞的细胞类型以及在发情周期内的变化

本研究以绵羊发情周期内的不同时期、即黄体期,卵泡前期,卵泡后期和排卵后期的垂体组织为研究对象,利用免疫荧光单和双标记方法研究绵羊垂体促性腺激素细胞的细胞类型以及在发情周期内的变化。研究结果证明：在绵羊发情周期内,垂体促黄体激素免疫萤光单标记,促卵泡激素免疫荧光单标记和ＬＨ／ＦＳＨ免疫荧光双标记细胞的细胞阳性率之间地间无显著差异;绵羊垂体ＦＳＨ和ＬＨ分泌细胞属同一细胞类型,并且在发情周期内无明显变化     

Wnt1和Frizzled2在性成熟前小鼠卵巢组织织定位及配受体关系鉴定

为揭示Wnt1和Frizzled(Fzd)2参与卵巢和卵泡发育的作用机制,选择12只3周龄小鼠,应用免疫组化研究Wnt1和Fzd2在卵巢组织内的定位,免疫共沉淀鉴定其蛋白间的配受体关系.结果表明:在健康初级、次级卵泡卵母细胞以及腔前和腔后卵泡近基膜颗粒细胞的胞质和胞膜中,Wnt1均表现较强的免疫染色,Fzd2在胞质内免疫染色;在卵泡腔周围颗粒细胞和透明带周围卵丘细胞中Wnt1免疫染色弱;从卵巢中心扩展或环绕生长卵泡的条形基质细胞中Wnt1和Fzd2免疫染色阳性,间质腺存在免疫染色细胞;在闭锁卵泡卵母细胞中Wnt1和Fzd2呈非均匀强染色;在卵母细胞裂解液的Wnt1或Fzd2免疫沉淀物的电泳图谱中,分别同时存在Fzd2和Wnt1蛋白条带.表明Wnt1定位于卵母细胞和近基膜颗粒细胞的胞质和胞膜中,Fzd2定位于胞质内:在卵巢基质细胞、卵泡膜细胞和间质腺细胞中存在Wnt1和Fzd2分布;Wnt1和Fzd2之间可能为配体-受体关系.     

豚鼠发情周期不同时期的子宫LHR mRNA差异表达研究

 【目的】克隆豚鼠子宫黄体生成素受体(LHR)基因片段并分析其进化关系,研究豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期不同时期的表达特性。【方法】以豚鼠子宫总RNA为模板,根据小鼠、大鼠、猪LHR保守区设计引物,RT-PCR扩增LHR基因片段。筛选阳性克隆测序,采用DNAMAN软件分析比对同源性。以?-actin为分子内参,采用优化的半定量RT-PCR技术,测定豚鼠发情周期不同时期的子宫组织LHR mRNA表达量。【结果】测序得到686 bp的剪接变异体1和缺失75 bp 4号外显子的剪接变异体2。686 bp序列与人类LHR mRNA序列同源性为83.8%,与牛、猪及绵羊LHR mRNA序列同源性分别为84.6%、84.2%及83.6%,而与大鼠和小鼠LHR mRNA序列同源性则分别高达93.7%和99.4%。LHR mRNA在豚鼠整个发情周期的子宫中都有表达,发情周期第0天的表达水平为0.635 ± 0.0194,第4天为0.617 ± 0.099,均显著低于第8天的表达水平(P＜0.05),随之在第12天升至1.218 ± 0.049。【结论】克隆的片段为豚鼠LHR基因的部分序列,其mRNA存在着剪接变异体。豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期第0、4天表达水平较低,第12天升至最高,即发情周期不同时期的LHR mRNA表达呈现明显的规律性,该结果为探究哺乳动物非性腺组织中LHR的功能及生殖内分泌调控机制提供了理论依据。     

Sexual differentiation of pituitary function: apparent difference bewteen primates and rodents

Surges in luteinizing hormone secretion resembling those which occur spontaneously during the menstrual cycle were induced by acute elevations in circulating estrogen concentrations in both male and female rhesus monkeys gonadectomized in adulthood. These experiments demonstrate that in primates, in contrast to rodents, exposure of the hypothalamohypophyseal unit to androgens throughout fetal and postnatal development does not prevent the differentiation of the control system that governs cyclic gonadotropin secretion.