撕裂蜡孔菌对烟草黑胫病的防治效果及对烤烟生长的影响

为探讨撕裂蜡孔菌Ceriporia lacerata菌株HG2011对烟草黑胫病的防治效果和对烤烟的促生作用,利用该菌株制备发酵液和固体菌剂,通过拮抗和盆栽试验研究其对烟草黑胫病病原菌烟草疫霉Phytophthora nicotianae生长的抑制作用、对黑胫病的防治效果及对烟苗生长和养分吸收的影响。结果表明:撕裂蜡孔菌菌株HG2011能显著抑制烟草疫霉生长;在带毒平板试验中,含20%发酵液的培养基对烟草疫霉菌丝生长的抑制率达54.50%;在平板对峙试验中,菌株HG2011能使烟草疫霉菌丝扭曲、畸形和空泡化,最终完全侵入并覆盖烟草疫霉菌落。在盆栽试验中,施用撕裂蜡孔菌固体菌剂可降低发病烟苗叶片中的丙二醛含量,并能维持正常的细胞膜透性,使烟苗黑胫病发病率比单独接种烟草疫霉处理显著降低了15.55%～37.77%,且预防效果71.16%优于治疗效果17.98%。在化肥配施高量菌剂处理中烟苗的株高、最大叶面积和生物量均最高,比单施化肥处理显著增加9.08%、36.28%和11.84%;烟苗氮、磷、钾的吸收量比单施化肥处理显著增加11.29%、38.73%和12.79%。表明撕裂蜡孔菌菌株HG2011能有效防治烟草黑胫病,刺激烟苗生长、促进养分吸收,表现出良好的防病促生效应。     

寡雄腐霉发酵液的动物毒性及对辣椒的促生防病效应

为研制高效、无毒、低成本的生物农药以防治辣椒炭疽病,利用自主分离的寡雄腐霉Pythium oligandrum CQ2010菌株制备浓度为1.14‰发酵液,研究其对小鼠的急性毒性、对辣椒幼苗生长的影响及对辣椒炭疽病的防治效果。结果表明,小鼠1日内灌胃寡雄腐霉发酵液60 m L/kg,连续给药14 d后,对小鼠体重增长无显著影响,其外观和行为均无异常,组织器官也未见病理改变。寡雄腐霉发酵液可显著提高辣椒叶片叶绿素含量和根系活力,促进氮、磷、钾吸收,生物量比对照增加42.4%,效果优于寡雄腐霉卵孢子制剂;并能显著提高叶片中过氧化物酶活性,诱导植株抗病性。在辣椒接种炭疽病菌前后,寡雄腐霉发酵液均显著降低了叶片丙二醛的增幅,说明细胞膜受害减轻。施用寡雄腐霉发酵液可使辣椒炭疽病发病率和病情指数显著降低,分别为40.0%~46.7%和13.3~16.7,防治效果达59.9%~68.1%;在模拟自然发病试验中也能显著提高辣椒幼苗生物量,防治效果达55.4%。表明寡雄腐霉发酵液对动物安全无毒,能促进辣椒幼苗生长并防治炭疽病。     

拮抗细菌B8对烟草黑胫病菌的抑制作用及其菌株鉴定

从烟草根际土壤中分离到对烟草黑胫病菌及其它植物病原菌具有抑制作用的菌株B8,平板对峙培养抑菌带内菌丝畸形、原生质凝集或外渗。其发酵原液和发酵液的无菌滤液均能抑制烟草黑胫病菌和蜡状芽孢杆菌;离体叶片接种法测定其发酵液对烟草黑胫病的防效,结果表明预防作用达100%。室内盆栽试验表明B8菌株发酵液对烟草黑胫病的预防作用可达78.1%,优于治疗作用。该菌菌体杆状,芽孢侧生、椭圆形,经形态学、生理生化性状和16S rDNA序列测定,将其鉴定为侧孢短芽孢杆菌。     

寡雄腐霉发酵液对温室番茄生长及灰霉病的防治作用

为了研制高效、无毒的生物农药,采用自主分离的寡雄腐霉生防菌株Pythium oligandrum CQ2010制备发酵液,研究其对温室番茄生长及灰霉病的防治作用。结果表明,寡雄腐霉发酵液(Pythium oligandrum broth,POB)能显著提高番茄叶绿素含量,增强根系活力,增加氮、磷、钾吸收,促进植株生长,使生物量比对照提高65.14%;同时能激活与叶片抗病性相关的过氧化物酶和过氧化氢酶活性,诱导植株产生抗病性反应,提高抗病能力,其效果优于寡雄腐霉卵孢子制剂;而且POB能显著抑制离体灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发;施用POB能使番茄灰霉病发病率下降22.28%~31.05%,病情指数从52.5(对照)下降至22.5~27.5,相对防治效果达47.62%~57.14%,叶片丙二醛含量显著降低,说明POB减轻了灰葡萄孢菌对细胞膜的伤害。表明POB兼具促进番茄生长及防治灰霉病的作用。     

链霉菌Sa-21对烟草黑胫病的防效及抑菌作用研究

烟草疫霉引起的烟草黑胫病,是烟草生产上的重要病害之一。为了明确链霉菌Sa-21防治烟草黑胫病的应用潜力,用盆栽试验测定了链霉菌Sa-21的生防效果,并用生长速率法等手段探讨了链霉菌Sa-21对烟草疫霉的抑菌作用。盆栽试验表明,链霉菌Sa-21菌株发酵液对苗期和成株期烟草黑胫病有较好的控制效果,最高防效可达98.39%。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉菌丝生长的抑菌中浓度为56.1μg/mL,50μg/mL的粗浸膏处理后可以降低50%的菌丝生物量。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉孢子囊的产生、游动孢子释放、休止孢萌发以及细胞膜透性均有抑制作用,100μg/mL的粗浸膏基本能够完全抑制孢子囊的产生,并且对游动孢子释放的抑制率达50%以上;粗浸膏浓度为150μg/mL时,对休止孢萌发的抑制率达94.35%;随着粗浸膏浓度增加,菌丝细胞膜的透性也会加大。研究结果表明,链霉菌Sa-21代谢物对烟草疫霉的生长繁殖产生抑制作用,并为链霉菌Sa-21生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治提供了理论依据。     

烟草黑胫病拮抗菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

为获得对烟草黑胫病（tobacco black shank）具有较好拮抗作用的菌株,从食腐昆虫美洲大蠊Periplaneta americana肠道分离纯化得到1株对烟草黑胫病具有较强抑制作用的D5-8菌株,拟进一步明确该菌株的分类地位,优化其发酵条件并测定其对烟草黑胫病的防治效果。利用形态特征、生理生化特性观察及16S rRNA基因序列分析对D5-8菌株进行鉴定;以细菌发酵液OD₆₀₀值及对病原菌的抑制率为指标,对其发酵培养基和发酵条件进行单因素试验及正交试验;通过室内盆栽试验,明确菌株D5-8对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,经平板对峙试验发现菌株D5-8对烟草寄生疫霉的抑制率达66.80%;通过形态特征和生理生化特征初步确定菌株D5-8为芽胞杆菌属Bacillus,结合16S rRNA基因序列分析鉴定菌株D5-8为特基拉芽胞杆菌Bacillus tequilensis;其最适培养基：牛肉浸膏8 g,酵母浸粉5 g,麦芽糖10 g,蒸馏水1000 mL;最佳的发酵条件为温度28℃、初始pH 6、转速210 r/min、装液量30 mL、接种量2%、培养时间60 h、光照时间4 h;盆栽试验结果表明,发酵条件优化后D5-8发酵液（10⁸cfu/mL）对烟草黑胫病的保护防效和治疗防效可达66.89%和53.72%,均高于原始发酵液的61.84%和51.83%。研究结果为特基拉芽胞杆菌D5-8生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治应用提供了理论依据。     

几丁寡糖对烟草黑胫病的控制效应及其机制

在室内条件下,采用菌丝生长速率法测定了几丁寡糖对烟草黑胫病菌的抑制作用,继而在温室盆栽和人工接种条件下,分别测定几丁寡糖、木霉、几丁质、几丁寡糖+木霉、几丁寡糖+木霉+几丁质等5种处理对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,几丁寡糖在离体条件下对烟草黑胫病菌菌丝生长无抑制作用,但在盆栽试验中对烟草黑胫病具有显著防治效果。5种处理中,几丁寡糖单独处理对烟草黑胫病的防治效果最高,为57.81%,其次为几丁寡糖+木霉+几丁质和几丁寡糖+木霉处理,分别为53.49%和52.49%。在温室条件下对烟草植株施用几丁寡糖及人工接种黑胫病菌后10天内,几丁寡糖能显著提高烟草体内的SOD、POD、PPO和几丁质酶活性,且活性峰值分别比对照提高96.30%、136.36%、10.34%和9.10%。     

寡雄腐霉分泌物对植物病原真菌的抑制作用及其对番茄灰霉病的防治效果

为了探明寡雄腐霉分泌物中小分子量物质对病原真菌的作用,应用玻璃纸法和生长速率法测定了分子量小于8 kD的寡雄腐霉分泌物对9种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用。结果表明,分子量小于8 kD的寡雄腐霉分泌物能强烈抑制森禾腐霉、灰葡萄孢、黄色镰刀菌的菌丝生长,抑菌率分别达到88．9%、86．7%和84．6%;对供试的4种腐霉以及尖孢镰刀菌的4个专化型的抑菌率均达显著性差异。在扫描电镜下可见,经寡雄腐霉分泌物处理的灰葡萄孢菌,菌丝细胞壁破裂、穿孔、干瘪,且菌丝分化出的分生孢子梗少,产孢量明显下降。温室盆栽试验表明,寡雄腐霉滤液对番茄灰霉病具有显著的预防保护作用与治疗作用,其预防保护作用与杀菌剂多菌灵1000倍的防治效果达到同一显著水平。     

噁唑菌酮·霜脲氰对烟草黑胫病病菌的室内毒力及田间防效

为明确52.5%噁唑菌酮·霜脲氰水分散粒剂对烟草黑胫病的防治潜力,采用菌丝生长速率法测定了该药剂对贵州省不同烟区烟草黑胫病菌的室内毒力,并在德江烟区开展田间试验,调查了包括噁唑菌酮·霜脲氰在内的5种药剂对烟草黑胫病的防效。结果表明,来自德江烟区的烟草黑胫病病菌对噁唑菌酮·霜脲氰的敏感性最强,EC_(50)为1.344 1 mg/kg;52.5%噁唑菌酮·霜脲氰水分散粒剂的田间防效最佳,达91.52%,显著高于其他对照药剂。另外,该药剂还有促进烟株生长的作用。     

拮抗放线菌TA21对烟草根黑腐病菌的抑制及其控病作用

菌株TA21是一株从重庆烟区土壤中筛选出的对烟草根黑腐病菌Thielaviopsis basicola有较强拮抗作用的放线菌,为了明确其抑菌效果和控病作用及其在烟草根黑腐病生防中的应用潜力,本文进行了菌株TA21抑菌活性检测和温室控病测试;并通过形态学、生理生化和分子分类的方法确定其分类地位。室内测定试验表明,菌株TA21对烟草根黑腐病菌的抑菌带宽达12.5mm;温室控病试验发现其对烟草根黑腐病防治效果达85.3%。无菌滤液试验表明,在试验浓度范围内无菌滤液均能有效抑制烟草根黑腐病菌菌丝生长、减少孢子萌发。根据菌株形态特征、培养性状、生理生化特性、细胞组分及16S rDNA序列分析,确定菌株TA21为链霉菌属吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。     

拮抗真菌HTC的鉴定及其对辣椒疫病的生物防治潜力

为明确拮抗真菌HTC对辣椒疫霉Phytophthora capsici的拮抗机制,采用平板对峙、形态学鉴定和18S rDNA序列比对分析等方法对菌株HTC进行了鉴定,并研究其发酵液与抗生物质粗提液对辣椒疫霉不同发育阶段的影响。经鉴定,菌株HTC为金色毛壳菌Chaetomium aureum。在平皿对峙试验中,菌株HTC的红色分泌物能抑制辣椒疫霉菌丝的生长,抑制率为59.1%,后期HTC菌丝可缠绕并降解辣椒疫霉菌丝。发酵液与抗生物质粗提液对辣椒疫霉不同发育阶段均有抑制作用,发酵液对辣椒疫霉菌丝生长的抑制率高达97.58%,对辣椒疫病的防治效果均高于70%。浇灌发酵液后,可提高辣椒苗的苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶的活性,并明显促进辣椒苗生长,鲜重和干重增加32.27%和18.09%。研究表明,金色毛壳菌菌株HTC是一株具有开发潜力的生防菌株。     

烟草黑胫病拮抗根际芽胞杆菌FB-16的筛选鉴定及其抑菌活性

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生长速率法、作用机制试验、温室防病试验测定FB-16的抑菌作用,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果显示,菌株FB-16发酵液对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率为95.96%;其代谢产物对烟草黑胫病菌菌丝有致畸作用;菌株FB-16为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliauefaciens(Gen-Bank登录号为JN245982);饱和度25%硫酸铵获得的抑菌物质对烟草黑胫病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达42.00 mm;FB-16活性产物处理的烟草植株在接种烟草黑胫病菌7天后的防治效果为69.96%。表明菌株FB-16在烟草黑胫病生物防治中具有潜在的利用价值。     

烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定

为获得对烟草黑胫病和根黑腐病具有双重防病效果且能够促进烟草生长的假单胞杆菌,采用稀释涂布法从40份土壤样品中分离出201株细菌,通过平板对峙和含毒介质法,筛选出对烟草黑胫病和烟草根黑腐病病原菌均具有良好拮抗作用的菌株PA2101和PG3402。盆栽促生试验表明,菌株PA2101和PG3402能协调地改善烟草地上部分的生长和烟草根系发育,均在一定程度上增加了烟草的株高、叶面积、株鲜重、根鲜重、叶片数和根长,提高了烟草的根冠比和根活力。盆栽试验结果表明,菌株PA2101对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为70.11%和62.67%,均高于其对照药剂;菌株PG3402对两种病害的防效分别为60.92%和60.00%,与对照药剂相当。抗性标记菌株的定殖试验结果表明,菌株PA2101和PG3402在接种后第29 d能定殖于烟草根际土壤和根内,在烟草茎和叶内也能长时间存在,表明两菌株能够良好定殖。16Sr DNA序列、菌落形态和生理生化性状分析表明,菌株PA2101为铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa,菌株PG3402为格拉纳达假单胞杆菌Pseudomonas granadensis。综上所述,菌株PA2101和PG3402对烟草具有良好的促生作用,并对烟草黑胫病和根黑腐病有较好的防病效果,是具有生防潜力的菌株。     

氟噻唑吡乙酮对烟草疫霉的室内毒力及对烟草黑胫病的防效研究

烟草黑胫病是由烟草疫霉引起的一种土传性真菌病害, 对烟叶生产造成严重的危害。为了探究氟噻唑吡乙酮对烟草黑胫病的防治效果, 在室内离体条件下测定其对烟草疫霉菌丝生长、孢子囊形成的抑制作用;并通过室内盆栽和大田试验评价氟噻唑吡乙酮对烟草黑胫病的防治效果及对烟草的安全性。结果表明, 氟噻唑吡乙酮对各个地区烟草疫霉菌丝生长和孢子囊形成的抑制效果均很好, 与其他对照药剂相比, 毒力较高, EC 50分别为0.000 5 mg/L和0.000 4 mg/L。室内盆栽试验结果表明, 10%氟噻唑吡乙酮可分散油悬浮剂4 000倍液对烟草黑胫病的防效为84.33%, 2 000倍液防效则达到了96.00%, 与对照药剂相比有显著差异。田间药效试验结果表明, 10%氟噻唑吡乙酮可分散油悬浮剂2 000、3 000、4 000倍液的防效分别达到了93.82%、90.18%和83.27%, 对照药剂80%烯酰吗啉水分散粒剂2 500倍液和80%代森锰锌可湿性粉剂600倍液防效分别为77.82%和75.27%。此外, 相比于对照药剂, 氟噻唑吡乙酮在株高、有效叶片数、叶长、叶宽和光合速率方面有更好的促进作用。本研究结果表明, 氟噻唑吡乙酮能够有效防治烟草黑胫病, 并在一定程度上可以提高烟草产量和品质。     

烟草疫霉拮抗细菌B44R-1的筛选及其生防效果

为获得烟草疫霉Phytophthora nicotiana的优良拮抗菌,从烟草根际土壤和根系中分离对烟草疫霉具有较好拮抗作用的菌群,并从中筛选具有较强抑菌效果的拮抗菌株。通过形态学、生理生化试验、16S rDNA基因测序分析鉴定拮抗菌株种属,评价其防病效果及对烟草的促生作用。结果表明,从烟草根际土壤和根系分离得到拮抗菌群39个,并从中筛选得到拮抗效果较好的菌株B44R-1,初步鉴定其为皮特不动杆菌Acinetobater pittii。菌株B44R-1对烟草黑胫病的防效达到55.37%,对烟株根系生长发育影响明显,烟株鲜重、干重、株高、茎围、叶数和最大叶面积相比对照均有提高。本研究筛选获得对烟草黑胫病菌的拮抗菌不动杆菌,对烟草黑胫病防治效果和促生作用显著,具有较好的生防潜力。     

Evaluating diverse systems of tobacco genetic resistance to Phytophthora nicotianae in Yunnan,China

Black shank, caused by the soilborne pathogen Phytophthora nicotianae, is one of the most devastating diseases affecting tobacco production in China. The most effective strategy for reducing economic loss from this pathogen is development and use of resistant tobacco varieties. Multiple sources and systems of resistance have been developed in the Western Hemisphere; however, populations of P. nicotianae are variable around the world, including the predominance of different races. Different P. nicotianae isolates may react differently on tobacco plants with different systems of resistance, a possibility that could complicate the breeding of cultivars with resistance that is effective in different tobacco production regions worldwide. The objective of this research was to evaluate an array of tobacco germplasm possessing different systems of genetic resistance to black shank disease in tobacco-growing regions of Yunnan, China. Resistance types included simply inherited resistance mechanisms introgressed from wild Nicotiana relatives and polygenic partial resistance systems of N. tabacum origin. The loci of Wz exhibited high level resistance to black shank in the five diverse disease environments in Yunnan, China. K326 Php/−Wz/− genotype and Beinhart 1000 exhibited the greatest levels of resistance in both 2015 and 2016. Field observed results for 13 tobacco genotypes were highly correlated with those tested in growth chamber evaluation. These findings suggest that both Wz− and Beinhart 1000-mediated resistance have important commercial value in flue-cured tobacco breeding programmes in China. Cultivars developed for black shank resistance in China may also have utility in other tobacco-growing areas.