基于高通量测序鉴定慈姑黄化病病原

[目的]明确引致广西平乐县慈姑大面积黄化的主要病原物,为该病害的防治提供参考.[方法]从广西平乐县采集自然表现褪绿黄化症状的慈姑植株,分别提取其叶片和茎组织的总RNA,利用RNA-Seq高通量测序技术对其转录组进行测序,并对序列组装获得的重叠群(contigs)进行BLAST注释,筛选出注释为植原体16S rRNA序列的con-tigs,根据其序列设计引物Phy-F和Phy-R,以采集的褪绿黄化症状慈姑植株和无症状植株的叶片样本总DNA为模板,进行PCR鉴定.[结果]对扩增获得的长度为1.5 kb的DNA片段进行序列测定,从分子水平证实慈姑黄化病的病原为植原体(strain:AY-China).将测序获得的植原体16S rRNA序列与GenBank收录的15个植原体分组代表菌株的16S rRNA序列进行比对分析并构建系统发育进化树,发现AY-China与翠菊黄化植原体16SrI组(Aster yellows group:16SrI)聚类在同一分支,且各组代表菌株的16S rRNA序列相似性在88.3%~96.0%.进一步将AY-China与16SrI不同亚组代表菌株的16S rRNA序列进行多重比对并构建系统发育进化树,发现AY-China与翠菊黄化植原体16SrI-B亚组聚类到在一分支,且与16SrI-B亚组代表菌株的16S rRNA序列相似性高达99.5%,说明AY-China应属于16SrI-B亚组.[结论]广西平乐县慈姑黄化病病原为植原体,其隶属于翠菊黄化植原体16SrI-B亚组.     

槟榔黄化病病原及检测方法研究进展

黄化病是一种严重威胁槟榔生产种植的毁灭性传染性病害,目前主要在印度和我国槟榔主产区发生。本文从非生物与生物因素两方面对槟榔黄化病病原认识过程及检测方法进行详细的综述。     

海南槟榔黄化病与椰子致死性黄化病的病原关系初探

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测结果表明,海南槟榔黄化病株及台湾槟榔黄化病株样品用于椰子致死性黄化病病原特异性扩增引物对Ｐ１、Ｋ２３－１及Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ通用引物对Ｎｅｓｔｅｄ,Ｆｕｓ－０７进行扩增,均未发现有特异的Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ ＤＮＡ谱带,呈阴性结果。其他３个感染Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ的植物对照样品用引物对Ｎｅｓｔｅｄ、Ｆｕｓ－０７扩增,均得到特异的Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ Ｄ     

设施番茄病毒病病原鉴定

[目的]研究危害中国新疆和田地区洛浦县设施番茄的病毒种类,为该区域番茄病毒病的科学防治提供依据.[方法]2019年秋季,在洛浦县设施蔬菜产区采集8份番茄疑似感病样品.利用已报道侵染番茄的7种主要病毒的特异性引物对采集的番茄疑似感病样品进行RT-PCR检测,对番茄褪绿病毒阳性样品的CP基因进行克隆和测序,进行同源性、地理...     

基于SSR和SRAP标记的红花玉兰品种遗传关系分析及分子鉴定

目的为了解析红花玉兰各品种间的遗传多样性和遗传差异等问题,本研究采用SSR和SRAP分子标记方法对红花玉兰不同品种的遗传多样性水平和遗传分化程度进行评估,以建立其分子标记体系。方法以35个红花玉兰品种为实验材料,分别进行SSR和SRAP标记扩增,计算出SSR和SRAP分子标记的各遗传参数。利用NTSYS-pc2.1软件计算各品种间的遗传相似系数并用非加权法（UPGMA）进行聚类分析。通过R语言分析筛选出能够完全区分红花玉兰品种的引物对组合。结果经筛选共获得18对具有多态性且条带清晰的SSR引物,分别以35个红花玉兰品种基因组DNA为模板,共扩增出DNA条带128条,每对引物扩增条带在2 ~ 15之间,平均每对引物扩增7.1条,平均带型数为10.6,平均有效带型数为5.4,平均分辨能力（D）为0.72;不同引物的多态性位点百分比变化范围很大,在0.142 9 ~ 1.000 0之间,均值为0.730 2;Shannon’s指数平均为0.304 2,范围是0.086 4 ~ 0.433 7;平均期望杂合度为0.248 8,范围是0.059 2 ~ 0.282 3。利用筛选获得的11对SRAP引物对35个红花玉兰品种进行鉴定,共扩增156条DNA条带,引物扩增条带数在7 ~ 18之间,平均每对引物扩增14.2条,平均带型数为22.7,平均有效带型数为13.2,平均分辨能力（D）为0.93;11对引物的多态性位点百分比平均数为0.815 6,变异范围是0.657 1 ~ 1.000 0;平均Shannon’s指数为0.375 9,变异区间在0.287 2 ~ 0.455 3;平均期望杂合度为0.240 4,范围在0.180 2 ~ 0.311 6之间。结论红花玉兰具有较高的遗传多样性,经筛选和优化后的SSR和SRAP引物组合均能将现有红花玉兰品种完全区分开,实现了对红花玉兰品种的简便、快速、准确地鉴定,并为红花玉兰的保护和繁育,以及新品种的选育提供了重要的参考。      

贵州芸薹黄化病毒的分子检测及基因型鉴定

【目的】对贵州省白菜、萝卜和甘蓝感染芸薹黄化病毒（Brassica yellows virus,BrYV）进行分子检测及基因型鉴定,为马铃薯卷叶病毒属病毒的防治提供理论参考。【方法】在贵州省遵义市、威宁县、关岭县、平坝县等县（市）共采集284份蔬菜（白菜、萝卜和甘蓝）疑似病毒病样品,利用马铃薯卷叶病毒属的通用引物进行RT-PCR分子检测,并对检测出的16个BrYV分离物进行P0和CP基因序列扩增,再与已报道的BrYV基因序列进行比对,从而构建系统发育进化树,鉴定其基因型。【结果】284份疑似病毒病样品中,有43份样品检测出BrYV,检出率为15.14%,其中,感染BrYV白菜样品12份,占白菜总样品数的12.77%;感染BrYV萝卜样品14份,占萝卜总样品数的20.29%;感染BrYV甘蓝样品17份,占甘蓝总样品数的14.05%。贵州16个BrYV分离物P0基因核苷酸序列的相似性为89.9%~100.0%,CP基因核苷酸序列的相似性为93.5%~100.0%,二者编码的氨基酸序列相似性均为100.0%。基于P0基因构建的系统发育进化树可知,BrYV-Pingba-BC-2、BrYV-Zunyi-LB-1和BrYV-Zhijing-BC-1均与BrYV-BJS和BrYV-BBJ聚为一类,其余13个分离物均与BrYV-ABJ和BrYV-AJS聚为一类。基于CP基因构建的系统发育进化树可知,贵州不同地区不同蔬菜作物的16个BrYV分离与BrYV-A和BrYV-B基因型无明显分界,亲缘关系均较近。BrYV P0基因检测到5个重组事件,BrYV CP基因未检测到潜在重组事件。【结论】BrYV在贵州白菜、萝卜和甘蓝上普遍发生,但对萝卜的危害最重,主要存在BrYV-A和BrYV-B 2种基因型。     

多聚酶链式反应检测海南槟榔黄化病

应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测海南槟榔黄化病。结果表明：槟榔黄化型黄化病病株样品分别用2组植原体(Phytoplasmas)通用引物（R16mF／R16mR2、R16mF2／R16R2和1067／1068)测定，均出现特异的Phytoplasmas DNA谱带，呈阳性结果；而健康植株相应组织样品(对照)和其它样品则均未出现上述谱带，呈阴性反应。因此，黄化型的槟榔黄化病病株组织内存在植原体，植原体是导致槟榔发生黄化型黄化病的病原菌。     

马铃薯X病毒的分子鉴定与检测技术

为建立快速、灵敏、特异的马铃薯X病毒(PVX)分子鉴定与检测技术,利用反转录—聚合酶链式反应(RT—PCR)技术扩增得到了PVXcp基因,并进行序列测定,同时采用RT—PCR方法和核酸斑点杂交(NASH)方法对PVX进行了分子检测。结果表明:利用PVXcp基因序列及蛋白氨基酸序列分析可准确鉴定PVX,并可分析各分离物间的分子差异。利用PVX特异性引物和DIG标记的PVXcp基因采用RT-PCR技术和NASH技术可对PVX进行准确的检测,其特异性及灵敏度均优于传统方法。     

烟草炭疽菌的分子鉴定与检测

克隆并测定烟草炭疽菌r DNA全序列,序列全长2870 bp。序列比对发现,烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌的rDNA序列相似性最高,达96.0%~96.2%;从构建的系统关系树也可以看出,烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌聚成一个单独的分支,说明烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌的亲缘关系最近。因此,结合烟草炭疽菌的形态学特征,可以初步将从贵州烟草分离的烟草炭疽菌鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。根据所测烟草炭疽菌的rDNA序列设计特异性引物,不仅可以从8种不同的烟草病原真菌中鉴定出烟草炭疽菌,而且可以从7种炭疽菌中鉴定出烟草炭疽菌。用烟草炭疽菌接种普通烟,以接种发病的病组织总DNA为模板,利用该特异性引物进行PCR扩增,同样可以扩增出特异性条带,表明该方法可用于烟草炭疽菌的鉴定和快速检测。     

枣疯病植原体的分子检测与同源性鉴定

[目的]采用植原体16S通用引物建立枣疯病植原体PCR检测体系.[方法]采用植原体16S rDNA通用引物R16mF1/R16mR1,对陕西和山西具有枣疯病的枣树植株总DNA进行PCR扩增,获得了相关的枣疯病植原体序列.采用DNAMAN软件分析其同源性,绘制系统进化树.运用pDRAW32软件对17种具有16S rDNA分组的典型的限制性内切酶进行计算机模拟RFLP,确定枣疯病植原体同源性关系.[结果]从陕西和山西的枣疯病的植株中,分别得到1 433 bp和1 432 bp的条带,与已报道的枣疯病植原体比较,同源性达到99;以上,而与其他植物的植原体16S rDNA同源性多低于93;,并且与16S rDNA V-B组的遗传距离最近.pDRAW32软件模拟RFLP结果表明它们和已报道的JWB的RFLP图谱相似.[结论]枣疯病植原体归属于16SrDNA V-B,为枣疯病植原体PCR检测体系提供了理论基础.RFLP分析进一步验证了枣疯病植原体属于16SrDNA V-B,具有随地域变异性较小的特性,这将有利于不同地区枣疯病检测技术的建立.     

玉兰蒸腾规律及移植过程中茎流变化研究

用GREENSPAN茎流测定系统监测玉兰树干茎流动态变化,使用HOBO气象站同步测定气象因子,分析不同天气情况下树体茎流变化与气象因子的关系.结果表明:太阳辐射是影响树体茎流变化的决定因素,气温和相对湿度是影响茎流变化的主导因子;通过多元线性回归分析建立评价茎流速率与气象因子关系的模型,利用此模型得到预测值与实测值之间的差别,通过比较预测值和实测值之间的差异研究水分失衡的程度.     

白玉兰始花期与气象因子的关系分析

利用金华市2000—2012年白玉兰始花期物候记载和同期气象资料,研究了白玉兰始花期的物候特征及其与气象因子的相关关系,结果表明：（1）金华市白玉兰始花期年际间波动幅度较大,最早出现在2 月12 日,最迟出现在3月21日;（2）影响白玉兰始花期变化的主要气象因子是上年2月的雨日和日照、当年1月、2月的日照和平均温度以及当年1月负积温;（3）运用多元线性回归方法建立了基于主要气象因子的白玉兰始花期预测模型,模型可以提前预测白玉兰始花期,模型实用性较强、拟合预报效果较好。     

木兰属植物分子生物学研究进展

木兰属是木兰科最具代表性的属,几乎包括了木兰科各属的共同特征,有必要开展更多的研究。对运用分子标记解决木兰属植物系统进化以及遗传多样性等方面的研究进展进行了总结,并指出应通过分子辅助育种为木兰属植物的选择育种和开发利用开创一条捷径,以及应加强对木兰属植物进行遗传图谱构建相关方面的研究。     

玉兰种质资源与分类系统的研究

对玉兰进行了全面系统的分类、整理和研究,首次根据《国际植物命名法规》和《国际栽培植物命名法规》中有关规定,以及玉兰的形态特征,报道了该种有2亚种(1原亚种、1新分布亚种)、9变种(6原变种、2新变种、1新改隶组合变种)、10品种群(1原品种群、9新品种群)、37品种(1原品种、26新品种、8新改隶组合品种和2新组合品种)。同时提出了玉兰新分类系统:种→亚种→变种及种→品种群→品种。     

白玉兰花发育过程中DNase,RNase活性及同工酶谱的研究

白玉兰从花蕾到花开放过程中,蛋白质含量及脱氧核糖核酸酶(DNase),核糖核酸酶(RNase)的活性均下降;过氧化物酶同工酶谱带亦减少。分析白玉兰花中各层花瓣的干物质积累和蛋白质含量,表现出中、内层花瓣的生长量大于外部花瓣,进而导致花的开放。白玉兰花内含有17种氨基酸,以花蕾期的氨基酸含量最高,药用价值最大。     

白玉兰光合生理特性对锑矿区土壤复合重金属胁迫的响应

为了解锑矿区土壤复合重金属污染对白玉兰光合生理特性的影响,分重度污染、轻度污染和无污染土壤栽培白玉兰苗木进行盆栽试验,并采用LI-6400光合测定系统对重金属胁迫处理的白玉兰进行了光合生理特性日变化研究.结果表明:在白玉兰盆栽试验中,联盟和对照的Pn日变化呈"单峰型"曲线,峰值都出现在12:30左右,长龙界的Pn日变化无规律,3个处理的光合能力为联盟＞对照＞长龙界,重金属胁迫对植物的光合有抑制作用.Gs与Tr在日变化过程中具有显著性正相关(联盟0.981**,长龙界0.829*,对照0.87*),Tr在很大程度上决定于气孔的活动状态.白玉兰光合速率控制因子为非气孔限制.重金属污染越严重,白玉兰对环境条件的适应能力越弱(对照＞联盟＞长龙界).     

红花玉兰播种育苗技术的初步研究

红色系玉兰群红花玉兰新种Magnolia wufengensis和多瓣红花玉兰新变种Magnolia Wufengensis var．multitepala的发现具有重要的科学意义和开发价值。作为一个类型十分丰富的红色系列类群，在与原产地自然条件差异很大的武汉、咸宁大田育苗获得成功和在北京引种1年生苗正常生长说明，红花玉兰对气候的适应性较宽。在成宁1年生播种苗平均地径为0．69cm，平均苗高78．18cm；2年生和3年生移植苗平均地径和平均苗高分别为1．64，1．57cm和107．55，81．66cm，造成3年生移植苗比2年生小的原因是由于3年生苗是2002年在武汉东西湖苗圃地播种育苗和2003年移植（苗圃地土壤肥力不高），2004年又集中移植到咸宁所致，说明红花玉兰育苗需要较好的水肥条件。由于红花玉兰类型多样，而2001—2003年在原产地采集的种子是混系种子，因此需要进一步进行选优，单系采种或进行嫁接繁殖，培育成品种，同时要加快引种和区域化试验。表4参11     

天女木兰幼胚离体培养及组织快繁

利用正交试验进行了天女木兰的幼胚离体增殖培养的研究,对基本培养基类型、活性炭、糖、BA、IBA的质量浓度都进行了仔细的筛选。结果表明:幼胚培养所需要的最适培养基为附加BA(0.01 mg.L-1)、IBA(0.01 mg.L-1)、糖(50.0 g.L-1)、活性炭(1.5 g.L-1)的B5培养基,幼胚萌发率可达100%。天女木兰实生苗最适的增殖培养基为B5 BA(2.0 mg.L-1) NAA(0.04 mg.L-1) IBA(0.5 mg.L-1) 活性炭(1.0 g.L-1),此时繁殖系数大于3.6,可以满足生产需要。最适生根培养基为1/2MS 0.5 mg.L-1IBA 1.0 mg.L-1DA-6,生根率可达60%。