法氏囊三肽囊素的研究：Ⅰ.抗Bursin单克隆抗体杂瘤细胞株的建立

以戊二醛法制备Ｂｕｒｓｉｎ－ＫＬＨ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂，与ＳＰ２融合，用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出与Ｂｕｓｉｎ－ＢＳＡ结合，不与ＢＳＡ结合的２Ｆ９－４克隆株克隆株，经鉴定，抗体属性为ＩｇＭ，Ｋ轻链。水溶性Ｂｕｒｓｉｎ可阻性２Ｆ９－４对鸡法氏囊的反应，切片标本经ＰＢＳ处理，反应性消失，免疫组织化学染色于法氏囊上获得特征阳性结果。     

法氏囊三肽囊素(Bursin)的研究 Ⅱ.Bursin在鸡体免疫器官中免疫组织化学的定位

以抗Ｂｕｒｓｉｎ单抗２Ｆ９－４，用免疫组织化学方法，检测Ｂｕｒｓｉｎ在鸡胚胎期及出壳后１～９周龄雏不同免疫器官中的定位分布。结果表明：胚胎期１２日龄囊（上皮芽、上皮）、骨髓呈阳性；１４日龄囊（上皮芽、芽突）、胸腺髓质有阳性细胞；２０日龄胸腺有阳性细胞。新生雏囊单层或假复层上皮ＦＡＥ和ＩＦＳＥ呈阳性、髓质有稀少ＤＲＥＣ阳性、ＣＭＥ弱阳性。出壳１～３周ＤＲＥＣ与哈德氏腺阳性，反应随周龄增加有所增强，胸腺髓质呈阳性，３周脾脏极少数散在阳性细胞。４周ＣＭＥ、ＤＲＥＣ、ＩＦＳＥ与ＴＤＩＡ的基底膜有阳性细胞。６周ＦＡＥ、ＦＡＥＳＣ、ＣＭＥ、ＤＲＥＣ、ＩＦＳＥ与ＴＤＩＡ的基底膜有阳性细胞。８周ＦＡＥ、ＦＡＥＳＣ、ＣＭＥ、ＤＲＥＣ呈阳性。９周ＣＭＥ、ＤＲＥＣ呈阳性。４，６，８，９周Ｈａｓａｌ小体、６，９周骨髓呈阳性；４，６周脾脏散在阳性细胞；４，６，９周哈德氏腺有阳性细胞。     

人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ　Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ　Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。     

钩端螺旋体七日热血清型（56610）特异性单克隆抗体的研制

钩端螺旋体七日热血清型（５６６１０）培养物，经甲醛灭活后免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合获得６株阳性杂交瘤，分别定名为１Ａ９、１Ｂ８、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４、３Ｅ８，其中１Ａ９、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４为特异性抗５６６１０杂交瘤。抑制试验结果表明，多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗，这些特异性单抗被鉴定为ＩｇＧ１亚类。     

钩端螺旋体七日热血清型(56610)特异性单克隆抗体的研制

钩端螺旋体七日热血清型（５６６１０）培养物，经甲醛灭活后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合获得６株阳性杂交瘤，分别定名为１Ａ９、１Ｂ８、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４、３Ｅ８，其中１Ａ９、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４为特异性抗５６６１０杂交瘤．抑制试验结果表明，多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗，这些特异性单抗被鉴定为ＩｇＧ１亚类．     

小麦胆色素原脱氨酶的电泳性质分析

经反应红１２０亲和层析纯化的小麦胆色素原脱氨酶（Ｐｏｒｐｈｏｂｉｌｉｎｏｇｅｎ ｄｅａｍｉｎａｓｅ,ＰＢＧＤ,ＥＣ．４,３,１,８）,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ－ＰＡＧＥ上均显示一条带,表明已ＰＢＧＤ纯化至均一,它的亚基分子量３６ＫＤ,ｐＩ为４．８。酶活性染色呈一条带,表明无同工酶存在。ＰＡＧＥ显示两条带,证明小麦幼苗中存在酶与底物结合的中间物。脲梯度电泳呈现之字形,在４ｍｏｌ／Ｌ的脲浓度下可使酶     

Fenridazon—K产品流动相离子色谱分析方法研究

建立了一个Ｆｅｎｒｉｄａｚｏｎ－Ｋ流动相离子色谱分析方法。用Ｄｉｏｎｅｘ ｓｅｒｉｅｓ ４０００ｉ离子色谱仪，ＭＰＩＣ－ＮＳＩ分离柱，ＡＭＭＳ－ＭＰＩＣ抑制柱和电导检测器，分别以ＮＨ３．Ｈ２Ｏ，ＴＭＡＯＨ，ＴＥＡＯＨ和ＴＢＡＯＨ为离子对试剂，ＣＨ３ＣＮ为有机改性剂，对Ｆｅｎｒｉｄａｚｏｎ－Ｋ皆可获得符合残留分析检测水平的灵敏度，最小检出量２－５ｎｇ，在２ｎｇ－１０μｇ范围内线性关系良好。据此建立了     

不同组合复方BFA对雏鸡主要免疫器官发育、白细胞数及ND疫苗免疫效果的影响

选用１日龄尼克红蛋公雏８０５只（平均Ｎ Ｄ母原抗体水平为６．９１ｌｏｇ２）,随机分成７个组,在饲料中分别添加不同剂量的Ｚｎ,Ｓｅ,ＶＣ,ＶＥ,生化黄腐酸（ＢＦＡ）配合而成的复方生化黄腐酸（ＣｏＢＦＡ）,其中一组为对照。分别计数白细胞总数、嗜中性白细胞数和淋巴细胞总数,测定ＮＤ抗体效价;分离胸腺、脾脏和法氏囊,分别称重。分析比较各因素与雏鸡免疫器官（胸腺、脾脏和法氏囊）重量、血细胞数及ＮＤ疫苗免疫效果的相关性,遴选最适组合。结果表明：雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊重、血液白细胞总数、嗜中性白细胞数、淋巴细胞总数及ＮＤ抗体水平与Ｚｎ,Ｓｅ,ＶＣ,ＶＥ,ＢＦＡ均为正相关,其中胸腺与Ｚｎ,Ｓｅ极显著相关（Ｐ＜０．０１）,脾脏与Ｚｎ,Ｓｅ显著相关（Ｐ＜０．０５）,法氏囊与Ｓｅ显著相关（Ｐ＜０．０５）,淋巴细胞与ＶＣ极显著相关（Ｐ＜０．０１）,与ＶＥ,ＢＦＡ显著相关（Ｐ＜０．０５）。ＮＤ抗体水平与Ｖｃ, ＶＥ, ＢＦＡ极显著相关（Ｐ＜ ０．０１）。综合分析各试验组合的效果,认为以添加量分别为Ｚｎ １２０ｍｇ· ｋｇ－１, Ｓｅ０．３０ｍｇ·ｋｇ－１,ＶＣ１８０ｍｇ· ｋｇ－１,ＶＥ ２００ｍｇ·ｋｇ－１,ＢＦＡ ４５０ｍｇ·ｋｇ－１的饲     

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１     

马传染性贫血病病毒L株前病毒全基因组核苷酸序列分析

 本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长     

甘薯青枯病菌单克隆抗体的分类及其血清型研究

用甘薯青枯病菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｃｕｍ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交融合，建立了４株分泌抗甘薯青枯病菌的特异性、有鉴别力的杂交瘤细胞株：ＰＳＢ２４、ＰＳＢ２８、ＰＳＢ４６、ＰＳＢ５６。 交瘤细胞株染色体数范围为９８－１０４，ＥＬＩＳＡ试验培养液抗体滴度为保这ＭｃＡｂ的玫＃＃     

FPV282E4株BamHI7．3kb片段的亚克隆

选用ＦＰＶ２８２Ｅ４株ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ含非必需区片段，经ＸｂａⅠ酶切，将Ａ、Ｂ、Ｃ３个片段亚克隆于ＫＳ（—）质粒中，同时使Ｄ片段自身环化，获得ＫＳＦａ、ＫＳＦｂ、ＫＳＦｃ、ｐＵＣＦｄ４个重组克隆，经酶切鉴定证明亚克隆正确。为以ＦＰＶ基团组非必需区的ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ片段中ＢｇｌⅡ片段所在区域构建重组载体质粒和体内重组表达外源基因的研究以及非必需区的核苷酸序列分析奠定基础     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的分离纯化和鉴定

依次采用ＤＥＡＥ－纤维素、肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，酪蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和羟基磷灰石层析将大鼠酪蛋白激酶Ⅱ纯化了２４８６倍，回收率９．５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明ＣＫⅡ由三个不同亚基组成，分子量分别是３７，３５和２６ＫＤ。该激酶利用酪蛋白为底物，Ｃａ~（２＋），Ｃａ~（２＋）－磷脂酰丝氨酸和ｃＡＭＰ对ＣＫⅡ的活性无影响，而肝素对该酶的活性有抑制作用。     

黄曲霉毒素B1间接竞争抑制ELISA定量分析法的建立和应用

以合成的黄曲霉毒Ｂ１（ＡＦＢ１）－Ｃ３－羧甲基肟－牛血清白蛋为免疫原,制备了高亲和力的多抗血清,建立了简便、灵敏的ＡＦＢ１间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ定量分析法。ＡＦ类似物Ｂ１,Ｂ２,Ｇ１,和Ｇ２与ＡＦＢ１抗体的相对交叉反应率分别为１００％,３．４％,９．１％和小于１．３％。本法测定ＡＦＢ１的线性检测范围为１２．５～２５０ｐｇ,批内和批间平均变异系数分别为５．３％和７．９％,大米和混合饲料中测定ＡＦＢ１     

大鼠肝酷蛋白激酶Ⅱ的分离纯化和鉴定

依次采用ＤＥＡＥ－纤维素、肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，酷蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和羟基磷灰石层析将大鼠酷蛋白激酶Ⅱ纯化了２４８６倍，回收率９．５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明ＣＫⅡ由三个不同亚基组成，分子量分别是３７，３５和２６ＫＤ。该激酶利用酷蛋白为底物，Ｃａ＾２＋，Ｃａ＾２＋－磷脂酰丝氨酸的ｃＡＭＰ对ＣＫⅡ的活性无影响，而肝素对该酶的活性有抑制作用。     

鸡传染性法氏囊病BK912变异株疫苗安全及效力试验

使用３批ＩＢＤ－ＢＫ９１２冻干疫苗对２０日龄在隔离器中饲养的ＳＰＦ鸡经２次点眼、口服各２０００ＴＣＩＤ５０，干二免后１４天用１００ＢＩＤ５０１０８４Ａ法氏囊囊毒攻毒，对照组１００％发病，免疫的３个组１００％保护，通过对囊指数的测定，疫苗安全，对囊无损伤。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

牛冠状病毒4H12/1D4单链基因片段在大肠杆菌中的表达

用ＥｃｏＲＩ酶切ＰＲ５Ｂ４质粒，采用“Ｖ”字形内槽电洗脱法回收约０．８０４Ｋｂ牛冠状病毒基因工程抗体４Ｈ１２／１Ｄ４单链基因片段，并将其插入载体质粒ＰＥＴ－１７ｂ的ＥｃｏＲＩ位点构成重组质粒ＰＥＴ－Ｄ４，将重组质粒转化ＤＨ５α感受态细胞，在ＩＰＴＧ的诱导下表达，细菌裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳筛选，发现含ＰＥＴ－Ｄ４细菌经诱导新增一条约２８ＫＤα蛋白带，该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符，经光密度扫描，表达量约占菌体总蛋白的１４％     

烟叶超氧物歧化酶的研究

从烟叶中提取的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），经ＰＡＧＥ垂直板电泳后，用氮蓝四唑（ＮＢＴ）法活性染色，并经凝胶薄层扫描（λ＝５９５ｎｍ），结果显示粗酶液有６条同工酶谱带，经纯化后的酶只有一条谱带。此纯酶液置冰箱３６ｈ后，可获得长方形结晶。结晶酶液用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析（１．５ｃｍ×１００ｃｍ）和ＳＤＳ－和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为２４８３０和２８９００。用等电聚焦电泳测得该酶等电点为６．８０。该酶在ｐＨ５～９范围内活性较稳定，在７５℃保温１５ｍｉｎ活性尚保留５４％。此酶对ＫＣＮ、氯仿－乙醇不敏感，但受到ＥＤＴＡ，Ｈ_２Ｏ_２的强烈抑制，表明烟叶中分离纯化得到的ＳＯＤ为酶分子中结合Ｆｅ的Ｆｅ－ＳＯＤ。