猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪隐孢子虫感染率不同,年龄越小感染强度越大,育肥猪的感染率为4%,断奶仔猪的感染率为11%。     

抗酸染色法对隐孢子虫卵囊的检查

本试验主要是为探明抗酸染色法在隐孢子虫病诊断中的作用和特异性。为了证明改良抗酸染色对隐孢子虫卵囊的特异性和敏感性,用改良抗酸染色法对相似原虫进行染色。结果显示只有隐孢子虫卵囊和鞭虫卵染成红色,其他虫卵不着色。鞭虫卵外形和体积与隐孢子虫卵囊相差非常大,很容易区别。其他粪样材料呈现绿色,有些结构也可染成红色,从外形和大小上很容易与隐孢子虫卵囊相区别。     

合肥市犬隐孢子虫感染情况初步调查

目的了解合肥市犬隐孢子虫的感染情况。方法在合肥市随机采集不同年龄、性别与饲养条件的犬粪样69份,采用金胺-酚改良抗酸染色法检测粪样隐孢子虫感染情况,并根据卵囊大小和形态,进行虫种鉴定。结果犬隐孢子虫感染率为28.99%。对68个隐孢子虫卵囊进行观察和测量,椭圆形卵囊大小平均为6.20μm×4.34μm,卵囊形状指数平均为1.44,初步鉴定为鼠隐孢子虫（Cryptosporidium muris）;近圆形卵囊,大小平均为4.69μm×4.58μm,卵囊形状指数平均为1.125,初步鉴定为微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）。结论犬隐孢子虫的感染率存在年龄差异,年龄越小,感染率越高;饲养管理条件差的犬隐孢子虫感染率高;而隐孢子虫感染率与性别没有关系。     

贵州省部分地区山羊隐孢子虫病的调查分析

我们在息烽、修文、龙里、罗甸采集羔羊粪样222份,进行隐孢子虫病感染调查,每份粪样涂片分别用改良抗酸染色法和沙黄一美蓝染色法镜检卵囊,结果阳性124份,阴性98份,感染率为55.86%.采用蔗糖梯度离心法,检测OPG为1.542×105个,在光镜下测量卵囊的大小为3.333μm×3.666μm～6.666μm×6.9993μm,平均4.3175μm×4.7528μm,根据染色形态、大小等特征,初步诊断为小隐孢子虫(C.Panvum).     

合肥野生动物园灵长类动物隐孢子虫感染情况调查

[目的]调查合肥野生动物园灵长类动物隐孢子虫的感染情况。[方法]采用饱和蔗糖水漂浮法对环尾狐猴、赤猴和狒狒等6种灵长类动物粪便进行卵囊浓集,采用抗酸染色法对其卵囊染色后进行形态学观察。在形态学观察基础上,对上述疑似粪样中的卵囊进行DNA提取,并采用PCR技术扩增隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP),以1%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物,并对该园内灵长类动物感染隐孢子虫情况作统计分析。[结果]经形态学鉴定,初步判定从该动物园灵长类动物粪便中获得的卵囊大小为4.66μm×5.18μm,与报道的隐孢子虫形态特征相一致;利用PCR技术扩增得到的目的基因大小为377bp,与预期结果相一致。数据统计表明:合肥野生动物园灵长类动物隐孢子虫感染率为16.67%。[结论]合肥野生动物园灵长类动物存在隐孢子虫感染情况,具有感染人畜的潜在风险。     

隐孢子虫病诊断方法研究──组织内隐孢子虫虫体不同染色法效果比较

隐孢子虫病诊断方法研究──组织内隐孢子虫虫体不同染色法效果比较田纯见（华南农业大学兽医系）近十年来，为了检查粪便内隐孢子虫卵囊，人们曾试用了各种染色方法，如姬姆沙染色、番红－次甲基蓝染色、改良抗酸染色等。我们试图把这些方法应用到组织内虫体的染色，以观...     

隐孢子虫卵囊部分特性研究

本试验对小球隐孢子虫卵囊、鼠隐孢子虫卵囊以及新发现的隐孢子虫亚型卵囊的抗酸染色特性进行了观察，发现只有小球隐孢子虫卵囊具有酸染色特性。     

上海市发现牛寄生小隐孢子虫和鼠隐孢子虫

近来我们在检查上海某奶牛场牛犊粪便中发现隐孢子虫卵囊，经形态学检查及抗酸染色后确定。卵囊有大小二类，测量大卵囊30个，其长×宽为5．98～8．01μm×5．12～5．74μm，平均6．83μm×5．56μm，卵囊指数平均为1．24。测量小卵囊50个，其长×宽为3．55～4．75μm×3．27～4．63μm，平均为4．15μmX4．05μm，卵囊指数平均为1．02。和国内外有关文献对照，大的为鼠隐孢子虫，小的为小隐孢子虫。国内外均已报道小隐孢子虫寄生于人，湖南、北京、河南等省报道该省牛体内分别有这2种隐孢子虫，但上海地区尚未见报道。上海市发现牛寄生小…     

河北省奶牛场犊牛安氏隐孢子虫的分离鉴定

本研究从河北省奶牛场有腹泻症状2月龄左右的犊牛粪便中分离卵囊,进行病原分离与虫株鉴定。采集腹泻犊牛的新鲜粪便24份,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊,观察卵囊形态、大小。提取卵囊基因组DNA,进行18S rRNA基因PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测。对扩增片段进行序列测定及分析,进一步确定分离虫株隐孢子虫的种类/基因型,根据18S rRNA基因核苷酸序列构建系统发育进化树,确定虫株亲缘关系。结果显示,5份样品检出隐孢子虫卵囊,感染率为20.83%。形态学观察卵囊呈长圆形或椭圆形,大小为(5.0～8.2)μm×(4.2～6.3)μm,平均大小为6.6μm×5.3μm,卵囊指数为1.24,鉴定分离虫株为安氏隐孢子虫。PCR扩增出预期大小为1 188 bp的特异性片段,序列分析和同源性分析结果表明,分离株与安氏隐孢子虫AB089285.2株、AB513856.1株、AY954885.1株的同源性为98.7%～98.8%,进一步表明分离的隐孢子虫虫株为安氏隐孢子虫。在种系进化关系上,分离株与安氏隐孢子虫AB513856.1株亲缘关系最近。本研究为揭示河北省奶牛隐孢子虫病的流行特征,实施有效防制措施提供了科学依据。     

河南省奶牛安氏隐孢子虫感染的流行病学调查

为了解河南省奶牛安氏隐孢子虫病流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省12个规模化奶牛场和7个奶牛养殖小区共计2 268份粪便样本进行检查,发现109份为阳性粪便样本,感染率为4.8%。卵囊呈长椭圆形,平均大小为7.8μm×6.4μm,卵囊指数为1.22;12个养殖场中10个为阳性场,7个养殖小区中4个为阳性小区,不同地区奶牛安氏隐孢子虫感染率统计学差异显著(P0.05);不同年龄段奶牛安氏隐孢子虫感染率统计学差异极显著(P0.01);不同养殖方式奶牛隐孢子虫感染率统计学差异不显著(P0.05)。结果表明:奶牛隐孢子虫感染流行范围较广,存在一定人兽共患风险。     

双抗夹心—ELISA诊断牛隐孢子虫病

为了建立双抗体夹心—ＥＬＩＳＡ检测牛粪便中隐孢子虫卵囊抗原的方法。采用抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁单克隆抗体,经对６０头份牛粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心—ＥＬＩＳＡ检测,结果抗酸染色法检出１２头份有隐孢子虫卵囊,而ＥＬＩＳＡ除对抗酸染色阳性的１２份粪样判为阳性外,还对抗酸染色阴性的４份粪样判为阳性,且不与牛球虫、牛结肠小袋纤毛虫发生类属反应。此外,本试验在稀释液中加入ＥＤＴＡ,并增加了反应温度,使得试验在抗体包被板并封闭后３０ｍｉｎ结束整个检测过程。结果表明,双抗体夹心—ＥＬＩＳＡ是敏感性高、特异性强的诊断牛隐孢子虫病的方法。     

贵州山羊隐孢子虫病的病原诊断及分析

在息锋、修文、龙里、罗甸采集羔羊粪样 2 2 2份 ,进行隐孢子虫病感染调查 ,每份粪样涂片分别采用改良抗酸染色法和沙黄 -美蓝染色法染色镜检查到卵囊 ,结果阳性 12 4份 ,阴性 98份 ,感染率为 5 5 .86 % ;采用蔗糖梯度离心法 ,检测每克粪便中含卵囊为 1.5 42× 10 5个 ,在 40× 12 .5倍光镜下测量卵囊的大小值为 (3.333× 3.6 6 6 ) μm～ (6 .6 6 6× 6 .9993) μm ,平均值为 (4 .317× 4.75 2 8) μm ,根据染色形态、大小等特征 ,初步诊断为小隐孢子虫 (C .Panvum)。     

双抗夹心——ELISA诊断兔隐孢子虫病初步研究

本文报道了应用双抗夹心－ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立，试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经过２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心－ＥＬＩＳＡ试验，结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性，并不与兔球虫粪便发生类属反应，此外，本试验还在     

河南省山羊隐孢子虫流行病学调查

对河南省4个山羊场进行了隐孢子虫病流行病学调查.采集山羊粪样1 017份,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查,结果共检出隐孢子虫卵囊阳性山羊粪样28份,平均感染率为2.75%;有2个山羊场检出隐孢子虫卵囊,场感染率为50%;中牟某羊场阳性率最高,达4.95%;在各年龄段中,2～4月龄山羊隐孢子虫感染率最高,达5.43%;山羊隐孢子虫感染可能与季节有关;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学观察,初步鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum).     

河南省鸵鸟隐孢子虫流行病学调查

为了系统掌握河南地区鸵鸟隐孢子虫流行状况,于2006年8月～2007年8月对河南地区6个养殖场共829份样品应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行感染情况调查,结果显示隐孢子虫总感染率为1.7%(14/829),其中,郑州某驼鸟场的感染率2.8%(14/506),其他养殖场未发现隐孢子虫感染.所查到的14份隐孢子虫阳性样品来自20～40日龄鸵鸟,表明幼龄鸵鸟更容易感染隐孢子虫.鸵鸟隐孢子虫卵囊大小为4.2～6.0 μm×4.5～5.0 μm,平均5.56 μm×4.48 μm,卵囊形状指数(L/W )为1.24(n=100),根据卵囊形态结构特征初步鉴定为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi).     

双抗夹心─ELISA诊断兔隐孢子虫病初步研究

本文报道了应用双抗夹心─ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立。试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经对２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心─ＥＬＩＳＡ试验．结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性；并不与兔球虫粪便发生类属反应。此外，本试验还在稀释液中加入ＥＤＴＡ，并增加了反应温度，使得试验在抗体包被反应板并封闭完成后３０分钟结束整个检测过程。     

云南省蛋鸡源隐孢子虫鉴定及18S rRNA生物信息学分析

为了了解云南省规模化蛋鸡场腹泻病鸡隐孢子虫的感染情况,试验采用卢戈氏碘液和改良抗酸染色镜检、巢式PCR扩增隐孢子虫18S rRNA基因、BLAST程序测序及遗传进化分析等方法对2020年12月份从云南省多个规模化蛋鸡场采集的71份腹泻蛋鸡的粪便样品进行研究。结果表明：经卢戈氏碘液染色后可见呈棕色近似香蕉形的子孢子,经改良抗酸染色后可见呈红色近似球形的卵囊和近似香蕉形的子孢子。巢氏PCR扩增得到大小为821 bp的目的片段,将获得的虫株命名为YX202106虫株。YX202106虫株与GenBank中已公布的火鸡隐孢子虫的同源性最高,为99.14%～99.51%,且在进化树上处于同一个分支,该虫株还与能引起人畜共患的五种主要隐孢子虫——人隐孢子虫、微小隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、猫隐孢子虫、犬隐孢子虫在进化树上构成一个大分支,具有重要的公共卫生学意义。说明云南地区蛋鸡群中存在火鸡隐孢子虫感染,应加强蛋鸡隐孢子虫病的防治。     

隐孢子虫病两种诊断方法的应用比较

目的对目前常用的两种检测隐孢子虫感染方法进行估价。方法取上海某牧场随机采集的20头奶牛粪便用改良抗酸染色法和巢式PCR(Nested PCR)法检测。结果两种方法均能检测出粪便中的隐孢子虫卵囊,改良抗酸染色法阳性检测率55%,Nested PCR法阳性检测率70%。结论:两种方法均能从感染隐孢子虫的奶牛粪便中捡出隐孢子虫卵囊,可根据需要选择。     

奶牛隐孢子虫病流行病学调查及初生犊牛感染试验

应用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查郑州、商丘和洛阳3个地区的5个奶牛场、2个专业村的582份粪样，查出阳性样品64份，隐孢子虫总阳性率11％（64／582），发现两种不同形态的卵囊，根据其形态结构等特点鉴定为小球隐孢子虫（C．parvum）和安氏隐孢子虫（C．andersoni）。其中2个场奶牛感染安氏隐孢子虫，有1个场的奶牛感染小球隐孢子虫，且感染强度较小。犊牛感染率较育成牛、成年牛高。并进行小球隐孢子虫分离株对初生犊牛的致病性试验，其结果为潜隐期7天，排卵囊高峰出现在感染后第16天，高峰期5天。剖检后消化道黏膜经抗酸染色鉴定，仅在回肠中段发现卵囊。     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查，并按大致10％的采样率采集了1087头乳牛的新鲜粪便，以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊，其中检出卵囊的阳性牛92头，阳性率为8．46％；有7个场检出隐孢子虫卵囊，场阳性率为70％。这7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是10．00％、7．19％、6．67％、9．80％、6．72％、12．76％和6．72％。调查发现，乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系，而且可能与气候有关；所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫(Crptosporidium muris)。