异宗配合疫霉同宗配合形成卵孢子的诱导

菌株存放６～２４个月、菌丝损伤、土壤浸出液和绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）可诱导槐生疫霉（Ｐｈｙｌｏｐｈｔｈｏｒａｒｏｂｉｎｉｃｏｌａ）、掘氏疫霉（Ｐ．ｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ）和烟草疫霉（Ｐ．ｎｉｃｏｌｉａｎａｅ）部分Ａ＿２交配型菌株产生卵孢子，表现同宗配合特性，而Ａ＿１交配型菌株一般较稳定。樟疫霉（Ｐ．ｃｉｎｎａｍｏｍｉ）仅在土壤浸出液和绿色木霉的刺激下，部分Ａ＿２交配型菌株才形成卵孢子。但是，根据Ｚｅｎｔｍｙｅｒ方法制备的刺槐和雪松的根浸液对上述４种疫霉的卵孢子产生均无诱导作用。     

麻疫霉异宗配合变异株交配型的遗传

以化学农药氯唑灵诱变苎麻疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｂｏｅｈｍｅｒｉａｅＳａｗａｄａ）的野生型菌株Ｅｃ－８获得异宗配合变异株,氯唑灵的有效诱变浓度为１０～３０μｇ／ｍＬ,以２０μｇ／ｍＬ处理３～８周效果最好。异宗配合变异株的交配型在单游动孢子或单菌丝片段后代均发生分离,出现了疫霉菌已知的全部５种交配型的个体。各交配型在单游动孢子无性系后代持续分离：Ａ１交配型菌株后代出现了Ａ１、Ａ２、Ａ０和Ａ１,Ａ２交配型,Ａ２交配型菌株后代出现了Ａ１、Ａ２、Ａ１Ａ２和Ａ０交配型,Ａ１,Ａ２交配型菌株后代出现了Ａ１、Ａ２、Ａ１Ａ２、Ａ０和Ａ１,Ａ２交配型,Ａ０交配型菌株后代出现了Ａ１、Ａ１Ａ２、Ａ０和Ａ１,Ａ２交配型,而部分回复为Ａ１Ａ２交配型的菌株后代也出现了Ａ１、Ａ２、Ａ１Ａ２、Ａ０和Ａ１,Ａ２５种交配型。８０％以上的变异株在１２°Ｃ、黑暗中贮存２个月后仍可保持其原有交配型,部分变异株在菌丝块移植继代培养７代后仍然保持异宗配合特性。对部分Ａ１交配型单孢株激素产生与接受类型的测定结果表明,Ａ１交配型变异株至少包括Ｓ１和Ｓ２两种性征类型。上述结果提示,疫霉属卵菌性别的产生可能是由同宗配合演化为异宗配合,并可能同时分化产生不     

苎麻疫霉异宗配合变异株交配型的遗传

以化学农药氯唑灵诱变苎麻疫霉的野生型菌株Ｅｃ－８获得异宗配合变异株,氯唑灵的有效诱变浓度为１０－３０μｇ／ｎｌ,以２０μｇ／ｍＬ处理３－８周效果最好,异宗配合变异株的交配型在单游动孢子或单菌丝片段后代均发生分离,出现了疫雾已知的全部５种交配型的个体。     

营养条件对同宗配合疫霉菌卵孢子产生量的影响

以Ｖ６Ｃ培养基中分别加入β－谷甾醇、卵磷脂、天冬氨酸均可刺激恶疫霉抗甲霜灵突变株产生较多的卵孢子。基于上述结果确定的ＳＬＡ培养基，可以极显著的提高所测定的恶疫霉、大雄疫霉、橡胶疫霉野生型菌株和恶疫霉抗甲霜灵突变株的卵孢子产量，ＳＬＡ培养基配方为：β－谷甾醇２ｍｇ，卵磷脂５０ｍｇ，天冬氨酸１ｍｇ，Ｖ６Ｃ培养基１００ｍｌ。     

影响大豆疫霉根腐病菌卵孢子生活力的因素

在某些大豆生产区,由大豆疫霉(Phytophthorasojae)引起的大豆根茎腐烂病是一种普遍流行的、极具破坏性的病害,病原真菌以卵孢子在土壤中越冬,在条件适宜时导致下一年大豆发生根茎腐烂。病原菌卵孢子也可以存在于患病种皮内,但其在病害循环中的作用还不清楚。卵孢子通常休眠一段时间后才萌发,这阻碍了大豆疫霉有性生殖后代毒性的遗传和变异研究。而研究的目的是寻找一种能够促进卵孢子在短时间内大量萌发的方法。在研究过程中采用MTT染色法检测处理后的卵孢子的生活力。结果表明,卵孢子龄期、预处理温度、化学物质在某种程度上均影响大豆疫霉卵孢子的生活力。用0.4%的KMnO4处理45d龄期的卵孢子,或35℃下处理5d有利于卵孢子的萌动,H2O2、大豆根汁液和大豆根际土壤浸出液对卵孢子生活力没有影响。     

烟草疫霉两个变种的划分及疫霉属几个生物学性状的研究

本文基于对福建、浙江、江苏、上海等地9个种、51个疫霉菌株的分类研究结果,着重探讨疲霉属中烟草疫霉(phytophthora nicotianae)种内两个变种的划分,温度反应、脱落孢子囊孢囊柄长度等性状在种的鉴定中的作用,以及配对试验中交配菌株种的配对组合与藏卵器大小的关系。指出:单纯根据形态特征无法区分烟草疫霉的两个变种,因而不宜再使用P.nicotianae var.nicotianae和P.nicotianae var.parasitica这二个变种的名称;温度反应是一个不稳定性状,在种的鉴定中只能作为参考依据,菌丝最适、最低生长温度对种的鉴定作用不大;孢囊柄长度性状是稳定的,在种的鉴定中应受到重视。     

恶疫霉生长速率与同宗配合性状的遗传与变异

在实验室条件下，对不同地区和不同寄主来源的恶疫霉菌株的线性生长速率和同宗配合性状的遗传进行了研究。结果指出：恶疫霉菌株同宗配合性状在无性和有性后代均可稳定遗传，表明在供试恶疫霉菌株中上述性状的控制因子是纯合的。从试菌株生长速率的遗传情况十分复杂，至少存在3种类型：1．在单孢无性后代和自交后代均可稳定遗传；2．在单游动孢子后代稳定遗传而在自交后代发变异；3．在无性后代和有性后代均发生变异。表明该性状可能由细胞核纯合基因、也可能由细胞核杂合基因、还可能由细胞质因子调控。     

苎麻疫霉生长速率落形态同宗配合性状的遗传研究

测定了引起中国棉花疫病病菌－“苎麻疫霉（同宗配合种）菌株ＥＣＳＺＩ－８的生长速率，菌落形态、同宗配合等生物学性状在游动孢子和卵孢子后代的遗传。结果表明上述性状在无性和有性后代均可稳定地遗传，认为苎麻疫霉ＥＣＳＺＩ－８菌株控制上述生物学性状的遗传因子是纯合的。     

苎麻疫霉生长速率菌落形态同宗配合性状的遗传研究

测定了引起中国棉花疫病病菌──苎麻疫霉（同宗配合种）菌株ＥＣＳＺＩ－８的生长速率、菌落形态、同宗配合等生物学性状在游动孢子和卵孢子后代的遗传。结果表明上述性状在无性和有性后代均可稳定地遗传，认为苎麻疫霉ＥＣＳＺＩ－８菌株控制上述生物学性状的遗传因子是纯合的。     

大孢指疫霉三个新变种的研究

 本文报道大孢指疫霉Sclerophthora macrospora可区分为3个变种,即大孢指疫霉水稻变种S.macrospora var.oryzae var.nov.,大孢指疫霉小麦变种S.macrospora var.triticina var.nov.和大孢指疫霉玉蜀黍变种S.macrospora var.maydis var.nov.,新变种有汉文和拉丁文描述及形态图,地理分布。     

检疫性柑橘冬生疫霉和丁香疫霉的三重 PCR 同步检测

全世界危害柑橘的疫霉有14种,其中冬生疫霉Phytophthora hibernalis和丁香疫霉Phytophthora syringae为我国规定禁止进境的两种检疫性柑橘真菌病害,目前尚未见有此两种病原菌的同步分子检测报道.该研究根据14种柑橘疫霉的18SrRNA,ITS,heat shock protein 90(HSP 90)等基因分别设计了疫霉属的通用引物和此两种检疫性疫霉的特异引物,通过进行反应体系优化,建立了同时检测柑橘上两种检疫性疫霉的特异三重PCR检测方法,并进行了灵敏度试验.用15个柑橘疫霉菌株与甜橙的混合DNA做模板进行模拟带菌试验,结果表明该三重PCR分子检测能实现两种检疫性疫霉菌的同步特异检测,这两种检疫性柑橘疫霉提供了特异、可靠、便捷、适于口岸应用的检测方法,可有效促进柑橘类水果的快速通关.     

壳聚糖诱导大豆抗疫霉根腐病的作用研究

为了探索防治大豆疫霉根腐病的有效途径,测定了不同浓度的壳聚糖对大豆疫霉根腐病的室内抑菌效果和对大豆植株的诱抗作用及最佳诱导间隔期和持续期.结果表明,壳聚糖对大豆疫霉菌菌丝生长和孢子萌发均无直接的抑制作用.壳聚糖诱导大豆抗疫霉根腐病试验表明,喷施壳聚糖可诱导大豆对疫霉根腐病产生抗病性,当壳聚糖浓度为1.0mL·L-1时,防治效果最好达51.6%.壳聚糖最佳诱导间隔期为5d,持续期可达15d以上.壳聚糖处理后死苗率的下降是由于壳聚糖处理提高了大豆的抗病性,并且这种抗病性是系统抗病性.     

几种杀菌剂抑制辣椒疫霉孢子囊形成的室内测定结果

在室内测定了甲霜灵等１０种杀菌剂对辣椒疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃｉ）孢子囊形成的抑制作用,测定结果表明,甲霜灵,甲霜锰锌,磷酸乙酯,乙磷铝对辣椒疫霉孢子囊的形成具有很强的抑制作用,但该菌对这几种杀菌剂的适应浓度范围较宽,硫酸铜,霜疫必克,克抗灵,冠菌铜在较高浓度下对才能在辣椒疫霉孢子囊的形成有抑制效果,该菌以壕几种杀菌的适应浓度范围要对较窄。     

大豆疫霉效应因子PsCRN115诱导烟草抗性的机制分析

CRN(crinkling and necrosis induced protein)蛋白是卵菌所特有的一类效应因子,在已经测序的疫霉种中,每个基因组中预测都含有上百个CRN基因,关于其功能和分子机制目前研究不多。前期研究发现,大豆疫霉效应因子PsCRN115是大豆疫霉的致病性必需因子且能抑制植物的细胞死亡。为了进一步研究PsCRN115的功能,本研究采用农杆菌渗入法介导的基因瞬时转化技术在烟草上过表达该基因,发现PsCRN115可显著提高烟草对烟草疫霉的抗性。随后采用荧光定量PCR研究了其作用机制,发现PsCRN115可诱导水杨酸(SA)通路防卫反应基因的高表达,但对乙烯(ET)和茉莉酸(JA)通路防卫反应基因的表达影响不显著。表明:大豆疫霉效应因子PsCRN115是致病必需的因子,能被植物所识别,并诱导植物的防卫反应。     

利用mRNA差异显示技术克隆恶疫霉侵染诱导表达的草莓基因

为了解草莓与恶疫霉互作的分子机制,以接种后3、5和7 d的感病草莓品种‘FDP821’的冠部为材料,利用mRNA差异显示技术研究‘FDP821’与恶疫霉亲和互作前后基因表达的差异,获得78条差异表达的cDNA片段,通过分析从中分离出恶疫霉侵染诱导表达的10个草莓基因cDNA片段。BLASTX在线分析表明,这些草莓基因的功能涉及呼吸作用、衰老和核苷运输与代谢等。为阐明草莓与恶疫霉互作的分子机制提供了重要的线索。     

转hrpZpsta和chi双价广谱抗病基因大豆对疫霉根腐病的抗性分析

疫霉根腐病能使大豆感病品种减产5%～10%,并造成品质降低。利用转基因技术培育抗病品种是解决该问题的有效途径之一。对转hrpZ_(psta)和chi双价广谱抗病基因株系T2003-23-11、T2004-28-321和T2004-30-384进行分子检测并鉴定其抗疫霉根腐病能力。Southern Blot结果表明,hrpZ_(psta)和chi双价基因已整合在株系的核基因组中而且稳定遗传到T_4代;qRT-PCR结果表明,hrpZ_(psta)和chi双价基因在株系的不同组织中的相对表达量均高于非转基因对照。利用下胚轴侵染法对3个株系进行抗疫霉根腐病鉴定结果表明,3个株系抗病级别均为高抗,非转基因对照的抗病级别为中抗,表明转基因株系的抗病能力得到提高。     

苹果属3种检疫性疫霉的四重PCR分子检测

为建立苹果属冬生疫霉Phytophthora hibernali、丁香疫霉P.syringae和栗黑水疫霉P.cambivora 3种检疫性疫霉的同步分子检测方法,根据疫霉属18S rRNA,ITS,HSP90和Ypt1基因分别设计通用引物,冬生疫霉、丁香疫霉及栗黑水疫霉特异引物,建立了四重PCR检测方法,并进行了灵敏度和模拟带菌测试.建立了可同时检测苹果属上冬生疫霉、丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异四重PCR检测体系:在20μL反应体系中,最佳引物浓度组合为10μmol/L的18SUF/18SUR,PHSF/PHSR,PCSF/PCSR和PSSF/PSSR分别为0.2,0.6,0.8,1.0μL;最佳退火温度和退火时间分别为63℃和20s.该体系扩增冬生疫霉出现884bp的18S rRNA条带和232bp的ITS基因特异带,丁香疫霉出现884bp的18S rRNA条带和683bp的HSP90基因特异带,扩增栗黑水疫霉出现884bp的18S rRNA条带和314bp的Ypt1基因特异带,对照菌只出现18S rRNA条带;四重PCR反应体系检测灵敏度低于单重PCR;模拟带菌试验可同时扩增出4个片段.表明该四重PCR检测方法能实现冬生疫霉、丁香疫霉和栗黑水疫霉的同步特异检测,实现苹果属类水果及种苗检疫性疫霉的快速检测.     

烟草黑胫病菌培养性状的研究

【目的】对烟草黑胫病菌的若干培养性状进行研究，进一步了解烟草黑胫病菌的培养特性的稳定性，为烟草黑胫病的相关研究和综合治理提供试验依据。【方法】从安徽10个主要生产烟草的市（县）多点采集发生烟草黑胫病的烟株，采用组织分离法进行病原菌分离，经纯化后获得69个烟草黑胫病菌（Phytophthora nicotianae Breda de Haan var. nicotianae Waterh.）菌株，对其进行游动孢子囊的诱导、配对培养、生长特性测定等进行研究。【结果】烟草黑胫病菌的主要培养性状为：异宗配合，与标准相对交配型菌株配对培养可以产生有性器官；卵孢子球形，满器或不满器，雄器围生，藏卵器小；孢子囊多近球形，乳突明显，有双乳突现象，孢子囊具脱落性，且孢子囊柄短，不对称孢子囊较常见，孢子囊外着生有长短不一的附属丝；菌丝最适生长温度为20～30℃，最高生长温度大于35℃，小于40℃，最低生长温度大于8℃，小于10℃。【结论】供试烟草黑胫病菌的培养性状与前人的研究结论基本一致，初步认为10多年来生态环境和农业措施的变化没有导致烟草黑胫病菌的生长性状发生较大的改变，表明烟草黑胫病菌的培养性状是较为稳定的。