鸡马立克氏病二价苗对超强毒攻击的保护试验

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清Ⅱ型Ｚ_４毒株５００个空斑形成单位（ＰＦＵ）与ＭＤＶ血清Ⅲ型ＦＣ_（１２６）毒株１０００ＰＦＵ组成鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，免疫对ＭＤ高度易感的Ｐ系ＳＰＦ白来航鸡，设３０１Ｂ／１＋ＦＣ＿（１２６）二价疫苗，Ｚ＿４，３０１Ｂ／１和ＦＣ_（１２６）３种单价疫苗免疫组做对照，以ＭＤＶ超强毒Ｍｄ＿５毒株（ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ_５）攻击。结果表明：Ｚ_４＋ＦＣ_（１２６）和３０１Ｂ／１＋ＦＣ_（１２６）２种二价疫苗均能给免疫鸡提供较强的免疫效力，而３种单价疫苗则不能给免疫鸡提供对ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ＿５毒株攻击的有效保护力。     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

马立克氏病毒Z_4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ＿４毒株第１０代（Ｚ＿４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代全第３０代（Ｚ＿４－３０），Ｚ＿４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化。分别以Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０，Ｚ＿４－２５和Ｚ＿４－３０细胞结合毒作单价疫苗，将Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０和Ｚ＿４－３０细胞结合毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒ＧＡ株攻击，进行免疫效力试验。结果表明，Ｚ＿４毒株４个代次单价苗之间以及３个代次毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）毒株组成的二价疫苗之间免疫效力无显著差异。表明Ｚ＿４毒株在ＣＥＦ单层上从第１０代连续传至第３０代，仍然保持其原有的培养特性和免疫原性。     

基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究

选用马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中ＬＤＮＡ片段，制成ＤＩＧ－标记的ＭＤＶ核酸探针，分别对Ｉ型ＭＤＶ强毒株（ＢＪ－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５ｃ株）感染材料的核酸进行ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交检测，结果显示均有阳性呈色反应；而对ＭＤＶ血清２型（ＳＢ－１株）、３型（Ｆｃ１２６株）及禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和淋巴细胞性白血病病毒（ＬＬＶ）感染细胞的核酸，作上述同样检测，则均未见     

表达MDV gB的重组FPV疫苗的免疫保护试验

表达ＭＤＶｇＢ的重组ＦＰＶ疫苗的免疫保护试验刘秀梵，王志亮，彭大新，张如宽（江苏农学院动物医学系，扬州２２５００９）通过多步基因操作将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ｇＢ基因克隆进本室构建的中国鸡痘病毒（ＦＤＶ）疫苗株插入载体，其转染后筛选到高效表达ｇＢ的重...     

鸡马立克氏病毒Ⅰ型毒株的分离和鉴定

从鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫的发病鸡群中采集肝、脾、血液等病料，经鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）培养盲传数代，分离到１株（ＭＤＶ）暂定名为沪Ｘ株。该病毒在ＤＥＦ培养上出现典型的ＭＤＶ细胞病变。电镜下病毒大小为１００ｎｍ左右，呈椭圆半开圆形，位于细胞核内。细胞培养物经饱和硫酸铵浓缩后，与标准的马立克氏阳性血清出现琼扩沉淀线。病毒按种ＳＰＦ鸡后，鸡群主要表现内脏肿瘤，并回收到ＭＤＶ，表明分离的沪Ｘ株具有致病性，属于马立克氏疱疹病毒Ⅰ型     

鸡马立克氏病毒疫苗的种类和应用

鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）疫苗目前分为如下５类：血清Ｉ型马立克氏病毒疫苗,血清Ⅱ型马立克氏病毒疫苗,血清Ⅲ型马立克氏病毒疫苗,马立克氏病毒多价苗,马立克氏病毒基因工程苗。马立克氏病毒疫苗的应用,应结合鸡马立克氏病（ＭＤ）的流行病学特点和马立克氏病毒疫苗的特性进行合理选择应用。     

鸡马立克氏病毒I型毒株的分离和鉴定

从鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫的发病鸡群中采集肝，脾，血液等病科，经鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）培育盲传数代，分离到１株（ＭＤＶ）暂定名为沪Ｘ株，该病毒在ＤＥＦ培养上出现典型的ＭＤＶ细胞病变，电镜下病毒大小为１００ｎｍ左右，呈椭圆半开圆形，位于细胞核内。细胞培养物经饱和硫酸铵浓缩后，与标准的马立克氏阳性血清出现琼扩沉淀线，病毒按种ＳＰＦ鸡后，鸡群主要表现内脏肿瘤，并回收到ＭＤＶ，表明分离的沪Ｘ株具有致     

鸡传染性囊病二价活疫苗最佳配比试验

使用ＳＰＦ雏鸡进行鸡传染性囊病二价活疫苗毒株最佳配比试验，将ＢＪ８３６毒株与ＢＫ９１２毒株按病毒含量分别配成ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ５种不同配比疫苗，免疫１４日龄ＳＰＦ雏鸡，免疫后１４天进行ＩＢＤＶＩ型强毒ＣＪ８０１和变异株强毒１０８４Ａ的攻击。结果表明：ＢＪ８３６与ＢＫ９１２为ｅ配比值疫苗对ＣＪ８０１或１０８４Ａ毒株的攻击保护率达９０％以上，表现出最好的免疫攻击保护效果。该毒株配比可作为研制该二价活疫     

鸡马立克氏病不同免疫方法的临床预防效果调查

通过用４种不同ＭＤ疫苗对鸡马立克氏病临床预防效果的调查比较,结果表明,用以色列雅贝克公司生产的ＨＶＴ＋ＣＶＩ９８８二价氮苗免疫效果最好,有产保护率可高达９９．９５％。     

马立克氏病病毒感染鸡TCR1与TCR2T细胞动态变化观察

为深入探讨鸡马立克氏病Ｔ细胞受体亚群的变化与疾病发生与发展的相互关系,本实验以马立克氏病强毒株人工感染１日龄ＳＰＦ雏鸡,在不同的感染期,以流式细胞仪分析脾脏、胸腺、外周血淋巴细胞中ＴＣＲ１＋Ｔ和ＴＣＲ２＋Ｔ细胞的动态变化。结果表明,感染鸡脾脏中ＴＣＲ１＋Ｔ细胞异常增高,而ＴＣＲ２＋Ｔ细胞在脾脏和外周血中表现为暂短的升高,其后迅速下降。ＴＣＲ１＋Ｔ细胞与ＴＣＲ２＋Ｔ细胞的这种异常变化是ｖＭＤＶ感染雏鸡后Ｔ细胞表型变化的重要特征之一     

免疫鸡群马立克氏病病毒分离物的生物学特性

本实验在对内蒙古呼和浩特和包头的７个鸡场进行ＭＤ流行情况调查的基础上，通过病毒分离实验，首次自内蒙古呼和浩特、包头地区经ＭＤ疫苗免疫过的５个发病鸡群和１个健康鸡群中分离到６株马立克氏病毒（分别命名为ＨＡ、ＨＢ、ＨＣ、ＨＥ、ＨＦ和ＢＧ），并对６株病毒在鸡胚成纤维细胞（ＥＦ）上的增殖特性、蚀斑形成、形态和毒力等生物学特性进行了鉴定。结果表明，ＭＤ在呼和浩特、包头地区鸡群中广泛流行。自然感染鸡羽囊中ＭＤＶ抗原与病毒血症呈正相关。雏鸡接种法和组织培养法用于分离ＭＤＶ时，敏感性无显著差异。应用ＣＥＦ分离ＭＤＶ是１种快速、简便、敏感、经济的方法；６株ＭＤＶ在ＣＥＦ上能良好地增殖，并引起比较规则的细胞病变，还能在ＣＥＦ上产生圆形或椭圆形的小细胞蚀斑、大小为１．０８～１．４２ｍｍ。６株ＭＤＶ对雏鸡均有致病性，其中ＨＢ、ＨＥ、ＨＦ和ＢＧ４株之间毒力差异显著，ＨＢ和ＢＧ株的毒力比京—１株ＭＤＶ强。根据以上结果判定６株ＭＤＶ均属血清Ⅰ型ＭＤＶ强毒。结合接种雏鸡的病理学检查结果确定，ＨＡ、ＨＢ、和ＨＥ为内脏型ＭＤＶ，属Ⅰ生物组；ＨＣ、ＨＦ和ＢＧ为神经型ＭＤＶ，属Ⅱ生物组。     

胸腺制剂对鸡马立克氏病疫苗免疫增强作用的研究

将一日龄ＳＰＦ来航鸡分成４组，饲养在隔离器中。第１组１日龄接种ＭＤ疫苗，同时皮下注射０．５ｍＬ胸腺制剂；第２组１日龄接种ＭＤ疫苗时不加免疫增强剂；第３组、第４组均不接种ＭＤ疫苗，也不注射免疫增强剂。第１、２、３组于１３日龄时用ＢＪＭＤＶ－１强毒株攻毒。结果显示：第１组、第２组、第３组分别于攻毒后２８、２４、１７ｄ开始出现死亡，第４组没有死亡。第１组的攻毒保护率为４０．０％，比第２组保护率１５．０％有明显提高。此外，于１１、２８、５６日龄时检测了外周血液中Ｔ淋巴细胞百分率。２８日龄和５６日龄时第１组的外周血Ｔ淋巴细胞活性高于第２组。试验结果表明胸腺制剂对鸡马立克氏病疫苗有免疫增强作用。     

兔源IBD抗独特型抗体疫苗的制备及对鸡的初试

用纯化的抗ＩＢＤＶ抗体作为抗原免疫家兔,并分离制得效价较高（１：１６）的兔源ＩＢＤ抗独特型抗体,分别与氏安全和福氏不完全佐剂按１：１比例乳化制成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗,免疫接种普通迪卡公雏鸡和ＳＰＦ鸡,然后用ＩＢＤＶ强毒株攻毒,得到保护率分别为１００／１００,１００／１００,５０／５０和大群免疫接种应答为１００％的免疫保护效果。     

间接免疫荧光染色空斑计数技术的建立及应用

以免疫荧光抗体技术（ＩＦＡ）为基础，并加以改进，建立了间接免疫荧光染色空斑计数技术（ＰＣＴＩＩＦＳ），用其检测鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，可快速准确地计数疫苗不同血清型病毒各自的空斑形成单位（ＰＦＵ）及其ＰＦＵ总数。克服了常规法不能计数二价苗中两种病毒各自空斑数的缺点，敏感性显著高于常规病毒空斑计数法。     

鸡致病性MDV感染AGP法检测可靠性研究

常规琼脂扩散（ＡＧＰ）试验通过羽毛囊马立克氏病病毒（ＭＤＶ）特异抗原的检出来诊断鸡致病性ＭＤＶ的感染〔１,２,６〕,因特异性强、操作简便而广泛应用。但其检出率与感染鸡群在不同时期的检测〔３〕以及火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗免疫状态〔４〕密切相关。此现象...     

马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆

用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术,从马立克氏病病毒（ Ｍ Ｄ Ｖ） Ｃ Ｖ Ｉ９８８／ Ｃ 株感染的鸡胚成纤维细胞（ Ｃ Ｅ Ｆ）基因组 Ｄ Ｎ Ａ 中扩增出含起始密码子的 Ｍ Ｄ Ｖ ｐｐ ３８ 基因同源物编码序列。在以 Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ （ Ｄｉｇ．）标记的 ｐｐ３８ 基因作为探针,在 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增片段。将该 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增片段在 Ｂａｍ ＨⅠ和 ＰｓｔⅠ位点克隆进 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体,酶切分析筛选到含 ｐｐ３８ 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 ｐｐ ３８ 基因同源物克隆。     

马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆

用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＣＶ１９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ＭＤＶｐｐ３８基因同源物编码序列,在以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐｐ３８基因作为探针,在Ｓｏｕｌｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该ＰＣＲ扩增片段。将该ＰＣＲ扩增片段在ＢａｍＨ Ｉ和ＰｓｔＩ位点克隆进ｐＵ１８质粒载体,酶切分析筛选到含ｐｐ３８基因同源物的重组质粒并进行了全序     

间接免疫荧光染色空斑计数技术的建立及应用

以间接免疫荧光抗体技术（ＩＦＡ）为基础，并加以改进，建立了间接免疫荧光染色空斑计数技术（ＰＣＴＩＩＦＳ），用其检测鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，可快速准确地计数疫苗中不同血清型病毒各自的空斑形成单位（ＰＦＵ）及其ＰＦＵ总数。克服了常规法不能计数二价苗中两种病毒各自空斑数的缺点，敏感性显著高于常规病毒空斑计数法。     

MDV感染鸡羽毛根病毒抗原和DNA的动态检测

１０羽１４日龄鸡分别以马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＢＪ－１株接毒，采集羽毛根作为ＭＤＶ琼扩抗原和ＭＤＶＤＮＡｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交的动态检测样品。接毒后第１０ｄ至第８周的检测结果显示，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原及ＭＤＶＤＮＡ可分别在接毒后第１４ｄ（３７．５％，３／８）和第１２ｄ（３３．３％，３／９）检出；接毒后第１７ｄ至第５周，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原的阳性检出率均大于８０％；第６，７和８周时，则分别降至６６．７％（４／６），５０％（３／６）和４０％（２／５）。而ＭＤＶＤＮＡ的检测，除１只鸡直到第４周才呈阳性外，其余在接毒后第１４ｄ至第８周中均保持１００％的阳性检出率。