番鸭细小病毒特性的初步研究

将纯化的番鸭细小病毒（ＭＰＶ）在电镜下观察，呈球形或六角形，无囊膜，正二十面体对称，大小为２４～２５ｎｍ，壳粒呈中空管状，直径约３～４ｎｍ，壳粒数为３２。病毒无血凝性，对氯仿、乙醚、胰酶、酸和热不敏感，对紫外线敏感。ＭＰＶ在氯化铯中沉淀时具有３条区带，其密度分别为１．２８～１．３０，１．３２，１．４２ｇ／ｃｍ￣３，其中第３条带具有感染性。病毒具有４种结构多肽：ＶＰ＿１（８９ｋｄ），ＶＰ＿２（６８ｋｄ），ＶＰ＿３（５８ｋｄ）和ＶＰ＿４（４０ｋｄ），其中ＶＰ＿３为主要结构多肽。吖啶橙反应及核酸酶消化试验表明ＭＰＶ核酸为单链ＤＮＡ。     

番鸭细小病毒弱毒疫苗的研究

应用生物技术从番鸭细小病毒菁田株（ＭｕｓｏｖｙＤｕｌｋｉｌｉｎｇＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ－Ｐ）选育出对１日龄雏番鸭无致病力的弱毒疫苗株（ＭＰＶ－Ｐ１）。该弱毒株具有良好的兔原性和遗传稳定性；制备成疫苗，免疫注射１日龄雏番鸭，免疫后３ｄ部分鸭血清中出现抗体，７ｄ９８％以上的鸭血清中出现抗体；２１－３０ｄ抗体效价达高峰，有效免疫期在１９０ｄ以上；注苗后７ｄ攻毒，保护率１００％；当ＬＰＡＩ滴度在ｌｏ     

鹅细小病毒与番鸭细小病毒PCR鉴别诊断方法的建立

根据GenBank上登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)的基因序列,针对两种病毒非结构蛋白(NS)和VP1基因序列的相同区段,分别设计两对引物GPV U·L-1和MDPV U·L-1,以GPV-GZ1株的鹅胚尿囊液和MDPV的番鸭胚尿囊液提取核酸作为模板,分别建立了检测GPV和MDPV的PCR方法.特异性试验结果显示,引物GPV U·L-1仅特异性扩增出GPV-GZ1和GPV-GZ2株分子长为622 bp核酸片段,引物MDPV U·L-1仅特异性扩增出MDPV分子长为624 bp核酸片段,而对DPV、GPMV的核酸扩增结果均为阴性;敏感性试验结果显示,建立的PCR方法能检测到0.144 Pg的GPV核酸和28.8 pg的MDPV核酸.结果表明,建立的PCR方法特异性强、敏感性高,可用于GPV或MDPV临床感染病例的鉴别诊断.     

基于生物信息学预测的番鸭细小病毒和鹅细小病毒免疫交叉反应研究

通过生物信息学软件开展了基于表位预测的番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)免疫交叉反应研究.番鸭细小病毒非结构蛋白线性抗原表位预测结果表明:AA248～252、503～509和545～554可能是线性表位优势区域,与已知的鹅细小病毒非结构蛋白线性抗原表位区进行比较,可能具有交叉反应性的区段为AA503～509.番鸭细小病毒农壳蛋白线性抗原表位预测结果表明:肽段AA27～33、39～50、67～75、111～115、149～155、260～264、321～325、426～430、448～452、485～489、521～525、540～544和685～691等区域可能是线性表位优势区域,与已知的鹅细小病毒衣壳蛋白线性抗原表位区进行比较,可能具有交叉反应性的区段为AA321～325、426～430、540～544和685～691.     

鹅细小病毒与番鸭细小病毒差异分析及鉴别诊断方法研究进展

鹅细小病毒和番鸭细小病毒在大小、形态、理化特性、核酸类型、基因组结构等方面非常相似,而且两种疫病的流行病学、临床症状、病理变化也非常相似;两者的抗体也有一定的交叉保护性,用常规的血清学检测方法很难将这两种病毒区分。本文对鹅细小病毒和番鸭细小病毒的基因组结构和病毒编码的蛋白进行了比较分析,概述了两种病毒在基因组结构和抗原性上存在的差异,以及已经建立的鉴别诊断方法。     

雏番鸭细小病毒病病毒分离鉴定

采集以腹泻、呼吸困难及主要症状的雏番鸭肝、脾病科，接种14d龄非免疫番鸭胚，80%胚在3～7d死亡，胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物，以番鸭细小病毒（Muscovy duckling parvovirus,MDPV)阳性血清进行聚苯乙烯乳胶凝集，病料培养物均呈阳性反应，提取病料接种的尿囊液及细胞基因组DNA，用自行设计引物PCR扩增到与设计相符的600bp片段，经酶切鉴定，结果表明克隆到的片段为雏番鸭细小病毒特异性片段，从而初步证明分离到的病毒为雏番鸭细小病毒。     

番鸭源小鹅瘟病毒和番鸭细小病毒的结构蛋白及其抗原性

应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP1、VP2和VP3三种结构蛋白均可被同源抗血清识别,而异源抗血清均不能识别VP1蛋白;免疫番鸭血清和感染耐过番鸭血清识别的条带无明显区别.可见,MDGPV和MDPV的抗原性差异主要体现在VP1蛋白上.     

抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备

[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。     

鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT PCR检测方法的建立

为建立可同时鉴别检测鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒的基因序列,分别设计3对特异性引物,通过三重RT-PCR扩增条件优化、敏感性和特异性试验,建立了鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR方法。使用该方法对同一样品中的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒模板进行扩增,结果均得到与试验设计相符的202bp(鸭Ⅰ型肝炎病毒),351bp(鸭圆环病毒)和474bp(番鸭细小病毒)的特异性扩增条带,对小鸭温病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性。敏感性试验结果表明,该方法最低能检测到1pg的鸭Ⅰ型肝炎病毒RNA、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA。建立的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒感染的检测。     

新型番鸭细小病毒的发现及其感染的临床表现

2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭"三周病",除出现死亡外,幸存鸭的番鸭翅脚易断、上喙变短,83%感染鸭成为僵鸭,对我国养鸭业造成了较大的直接经济损失。经病原学检测、病毒分离鉴定和实验室感染试验,发现其病原为与原经典的雏番鸭细小病毒(MDPV)在基因组上、感染宿主范围和致病性存在较大差异的番鸭细小病毒,鉴于此,将之暂定名为新型番鸭细小病毒(NMDPV)。     

鹅细小病毒于番鸭成纤维细胞上的适应性研究

为进一步了解鹅细小病毒（GPV）在番鸭成纤维细胞（MDEF）上的适应性及病毒增殖情况,将GPV在MDEF上连续传12代培养,通过PCR、免疫荧光、流式细胞等方法分析其生物学特性。PCR检测结果显示,扩增到大小为734bp的非结构蛋白基因片段,将10倍梯度稀释的病毒悬液接种细胞培养65h后,10-6倍接种的细胞仍能检测到病毒核酸。免疫荧光检测显示,兔抗GPV阳性血清能对染毒的病灶产生特异性荧光染色。流式细胞试验结果进一步证实,GPV在MDEF上增殖速度比较慢,病毒的感染会造成MDEF的早期凋亡。说明该GPV株感染MDEF后虽未产生细胞病变,但病毒能在MDEF中增殖,为GPV开展细胞依赖性相关研究奠定基础。     

鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用

本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肠炎病毒(DEV)和番鸭细小病毒(MDPV)的TaqMan三重实时荧光定量PCR(q-PCR)的诊断方法并应用于临床疑似样品检测。根据DTMUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保守区域,分别设计合成了3对特异性引物和探针,在建立单重q-PCR方法的基础上建立了三重q-PCR方法。运用三重q-PCR方法对198份来自江苏和安徽的鸭组织疑似病料进行检测,结果表明,建立的TaqMan三重q-PCR可同时检测这3种病毒,检测灵敏度至少达100个拷贝,相关系数(R~2)均在0.99以上,扩增效率为90%～110%。同时,该方法对H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、鸭甲肝病毒Ⅰ型(DHAV-1)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、新城疫病毒(NDV)、鹅细小病毒(GPV)的检测均为阴性,表明该方法具备特异性强、灵敏度高、重复性好和快速等优点。与常规PCR检测方法相比,三重q-PCR方法灵敏度大约高100倍。临床疑似样品检测结果表明DTMUV的检出率最高,3种病毒混合感染亦常见。建立的TaqMan三重q-PCR检测方法为DTMUV、DEV和MDPV的临床样品检测提供了快速、有效、特异和灵敏的工具,也为临床分子流行病学调查及定量分析奠定了基础。     

细小病毒MPV—Q株理化特性及其致病性的研究

细小病毒ＭＰＶ－Ｑ株是从患病雏番鸭体内分离的一种致病性病毒，电镜及理化特性检查表明该株病毒属细小病毒，圆形无囊膜，直径在２２－２４ｎｍ，对乙醚、胰蛋白酶、酸不敏感，对红细胞无凝集现象，对鸡、丽佳鸡、北京鸭、鹅无致病性，该病毒可引起雏番鸭发生以出血性肠炎为特征的急性败血性传染病。     

番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及鉴定

[目的]使番鸭细小病毒(DPV)VP3在原核表达系统中正确表达.[方法]根据番鸭细小病毒VP3基因序列,设计一对特异性引物,利用PCR技术扩增出VP3基因;将其克隆至原核表达载体p ET-32a,获得重组表达载体p ET-32a-VP3.将重组质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白.[结果]成功表达出与预期大小相符的重组蛋白,约89 k Da;且当IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导时间为6 h时蛋白表达量最大.[结论]该研究通过原核表达系统成功表达了DPV、VP3蛋白,并摸索了蛋白最佳表达条件.     

番鸭细小病毒病与番鸭常见病的区别诊断

总结了番鸭细小病毒病与小鹅瘟、雏鸭肝炎、新鸭疫病、鸭瘟、鸭传染性浆膜炎、鸭巴氏杆菌病、鸭副伤寒以及鸭白肌病等番鸭常见病的区别,以供番鸭细小病毒病的鉴别诊断参考。     

基于PCR技术的番鸭细小病毒和沙门氏菌混合感染诊断

2010年9月贵州省某养鸭场送检病鸭5例,为确诊病因,同时为其及时防治提供科学依据,对病例进行了流行病学调查、实验室剖检病变观察、细菌学、PCR检测。结果表明:该病例为番鸭细小病毒和沙门氏菌混合感染,分离的沙门氏菌具有高致病性,仅对氧氟沙星敏感,对多种常用药物产生耐药。     

番鸭细小病毒病的诊治

2019年9月桐城市青草镇某养殖户饲养的一批900只番鸭暴发细小病毒病。本文介绍了发病情况,并通过临床诊断、病理剖检诊断、鉴别诊断等对该病例进行了初步诊断,并提出治疗和预防措施,以期有助于该病的防治。     

一起番鸭细小病毒病的诊治

从发病情况、临床症状、病理变化、鉴别诊断等方面初步诊断了一起番鸭细小病毒病例,并提防治措施等,以期有助于该病的防治。     

基于番鸭细小病毒VP3蛋白的间接ELISA方法建立

本试验采用经原核表达并纯化的番鸭细小病毒VP3蛋白作为包被抗原,辛酸-硫酸铵沉淀法提取纯化制备的兔抗番鸭IgG酶标抗体作为二抗,经一系列试验,确定了间接ELISA检测番鸭细小病毒抗体的最佳抗原浓度为5 μg·mL^-1,血清的最佳稀释度为1∶100,血清样品稀释液为含10% FBS和10%脱脂奶粉的PBST,兔抗番鸭酶标抗体最适稀释度为1∶2 500。将建立的方法进行了特异性、敏感性、重复性与中和试验的符合性等试验。试验结果表明,阳性血清样品作1 600倍稀释还能检测到抗体;与其他常见鸭传染病的阳性血清无交叉反应;批内、批间重复性试验的变异系数小于8.7%;100份番鸭血清样品用ELISA方法与中和试验的总符合率达90%以上。说明本试验建立的检测方法敏感性高、特异性强、重复性与稳定性好,可用于番鸭细小病毒流行病学调查及鸭群免疫番鸭细小病毒疫苗后抗体监测。