鸭乙型肝炎病毒的致病性和致癌性研究：启东和高邮地区鸭的肝…

探讨鸭乙型肝炎病毒与鸭肝病及肝癌的关系，取鸭肝癌高发地区启东市２年以上鸭１１４只和低发地区高邮市１．５年以上鸭９８只，分别经血清学检测鸭ＤＨＢＶ，逐个进行肝脏病理组织学检查，比较两地区带毒率和阳性鸭群与阴性鸭群的病变性质及程度，采用Ｒｉｄｉｔ非参数检验方法，进行统计推断，发现无论是高邮鸭还是启东鸭，同一地区在相同条件下饲养的鸭群，ＤＨＢＶ阳性组和阴性组之间肝病的性质和程度以及肝癌检出率无显著差异；     

鸭乙型肝炎病毒的致病性和致癌性研究──启东和高邮地区鸭的肝脏病理变化与血清中鸭乙型肝炎病毒的关系

为探讨鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）与鸭肝病及肝癌的关系，取鸭肝癌高发地区启东市２年以上鸭１１４只和低发地区高邮市１．５年以上鸭９８只，分别经血清学检测鸭ＤＨＢＶ，逐个进行肝脏病理组织学检查，比较两地区带毒率和阳性鸭群与阴性鸭群的病变性质及程度，采用Ｒｉｄｉｔ非参数检验方法，进行统计推断。发现无论是高邮鸭还是启东鸭，同一地区在相同条件下饲养的鸭群，ＤＨＢＶ阳性组和阴性组之间肝病的性质和程度以及肝癌检出率无显著差异；高邮阳性鸭群和启东阳性鸭群相比较，胆管增生、淀粉样变和细胞变性及肝癌检出卒等多项指标差异显著。进一步分析证明，造成这种差异的原因是由于病因不同所致。高邮鸭肝病发生的主要原因是东方次睾吸虫感染，而启东鸭肝病和肝癌发生的主要原因是黄曲霉毒素中毒。鸭乙型肝炎病毒的存在与否对两地区鸭群的肝病及肝癌的发生和发展，并无明显影响。     

鸭乙型肝炎病毒的致病性及致癌性研究──鸭乙型肝炎病毒表面抗原的纯化

应用氯化铭密度梯度离心技术，结合Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验、￣（３２）Ｐ标记的鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ探针进行斑点杂交试验，从ＤＨＢＶ阳性的启东鸭血清中分离得到高纯度的ＤＨＢｓＡｇ颗粒，直径范围４０～６０ｎｍ，在ＣｓＣｌ溶液中的浮密度为１．１５ｋｇ／Ｌ，大多数呈１０ｎｍ厚的空心结构，形态不规则，近似球形，部分颗粒表面有凹陷结构，少数颗粒表面出现缺刻。以纯化的ＤＨＢｓＡｓ免疫新西兰大白兔，制备了高度特异性的兔抗ＤＨＢｓ血清及其纯化的兔抗ＤＨＢｓＩｇＧ。     

鸭乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、特异的鸭乙型肝炎病毒(DHBV)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,设计一对引物扩增DHBV基因组,将其克隆到pMD-18-T载体上,然后以该重组质粒为模板,选择DHBV S基因保守序列设计一对定量PCR引物,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯在鸭体内对DHBV-DNA复制的抑制效果。结果表明:该方法能特异性检测到DHBV;相关系数为1.00,扩增效率为105%;敏感度高,最低检测限为70个拷贝。拉米夫定和阿德福韦酯对DHBV感染后鸭外周血DHBV-DNA的复制均有很好的抑制效果,但停药后会出现轻度"反跳"现象。建立的DHBV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,可用于抗HBV药物的评价。     

鸭乙型肝炎病毒C区结构模型的研究进展

回顾鸭乙型肝炎病毒C区的基本结构,重点介绍颗粒装配区(1-185aa)和核酸结合区(195-262aa)的范围,以及插入序列(75-120aa)和形态发生连接区(185-230aa)的范围,为鸭乙型肝炎病毒的深入研究提供理论基础。     

新型鸭肝炎病毒感染雏鸭组织内病毒抗原的分布

应用免疫组织化学方法,对人工感染新型鸭肝炎病毒雏鸭体内的病毒分布进行了动态观察。结果表明:接种后不同时间,在肝脏、脾脏、胰脏、胸腺和法氏囊组织中均可检测到新型鸭肝炎病毒抗原,而肾脏、心脏、脑组织中均未检测到病毒抗原。病毒抗原均位于阳性细胞的细胞质中。研究结果提示,感染雏鸭的肝脏和胰脏的组织病理变化与病毒的分布有关。     

鸭肝炎病毒单克隆抗体的研究

[目的]研制鸭肝炎病毒的单克隆抗体。[方法]将DHV-W株的鸭胚尿囊液经冻融、氯仿处理和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,探讨DHV特异性强、敏感性高、简便快速的DHV抗原诊断方法。[结果]经间接ELISA筛选获得1株能稳定分泌DHV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5G8。特性鉴定结果表明该株单抗ELISA效价较高且特异性好,中和特性稍差。杂交瘤细胞冻存6个月和12个月后复苏能稳定分泌特异性抗体。[结论]HDV的McAb成功制备为DHV的快速诊断、筛选特定基因探针等技术奠定了基础。     

鸭致病性大肠杆菌的分离及人工感染鸭的组织病理学研究

经过菌落形态、染色形态、生化试验,从来自湖北某鸭场的30份病料中,分离到20株鸭大肠杆菌。以3.0×108CFU/mL剂量感染健康昆明鼠和健康樱桃谷鸭,鼠和鸭分别在感染后8 h和12 h出现症状,12h和18 h后开始出现死亡,而对照组则未出现任何症状,表明该菌株为致病性菌株。药物敏感试验结果显示该鸭场分离菌株对某些药物已经产生很强的耐药性。人工感染鸭的组织病理学结果表明其肝脏、心脏有广泛的纤维素渗出物且发生严重的变性、坏死。     

新型鸭呼肠孤病毒分离株的致病性研究

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的致病性。【方法】以NDRV分离株NP01、NP03、NPM为供试病毒,分析其对禽胚(番鸭胚、鸡胚)、部分禽类(雏番鸭、雏半番鸭、雏鸡、雏鹅)及细胞的致病性。【结果】NDRV分离株经尿囊腔接种能100%致死12日龄番鸭胚和9日龄鸡胚。2日龄雏番鸭、雏半番鸭经腿肌、口鼻、爪垫等途径人工感染NDRV分离株后,出现了与自然病例相同的病症,NDRV分离株对雏番鸭和雏半番鸭的致死率分别为20%~53%和13%~33%,同时能从病死鸭肝脾中回收到该病毒,耐过鸭大多成为僵鸭;15日龄雏鸡和2日龄雏鹅人工感染NDRV分离株后观察20 d,均未表现出NDRV致病的临床症状。NDRV分离株具有较广的细胞亲嗜性,能在MDEF、CEF、AD293、Marc145、Vero、ST、MDCK等细胞中增殖并产生细胞病变,病变细胞呈现巨融合状;但NDRV分离株在PK细胞中盲传3代均未出现病变。【结论】NDRV在致病特性方面明显不同于禽呼肠孤病毒和番鸭呼肠孤病毒。     

鸭病毒性肝炎的研究进展

综述了鸭病毒性肝炎的病原特征、流行病学、致病机理、诊断等方面的研究进展。     

鸭肝炎病毒的分子生物学研究进展

鸭病毒性肝炎（duck viral hepatitis,DVH）是由鸭肝炎病毒（duck hepatitis virus,DHV）引起雏鸭的一种高度致死性、传播迅速的传染病,是危害养鸭业的主要疫病之一。该病虽然已出现和流行半个多世纪,但直到2006年才测定出该病病原的全基因组序列,而且关于该病原的蛋白功能、病毒与宿主之间的相互作用、分子致病机理和新型疫苗的研发等方面研究非常少。因此,研究该病毒的分子生物学具有重要意义。文章对Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV-1）和新型DHV的基因组结构及其功能、遗传进化和分子诊断技术等方面的研究进展进行综述,旨在为从事该领域的科研工作者提供参考信息。     

一株江苏新型鸭肝炎病毒的鉴定

对江苏地区分离到的1株疑似鸭肝炎病毒毒株（JS株）进行传代繁殖、雏鸭回归试验和理化性能测定,结果表明,该毒株能在鸭胚上进行传代繁殖,E1～E6代鸭胚毒的ELD50为10438·02 mL－1 ～10617·02 mL－1;攻毒的雏鸭可产生与I型鸭肝炎病毒相同的症状和病变;3,7,14日龄易感雏鸭的LD50分别为1055·02 mL－1,10517·02 mL－1,10383·02 mL－1;病毒对氯仿、乙醚和胰酶不敏感,对酸（pH 30）稳定,对热不稳定。进一步进行交叉中和试验、交叉被动保护试验和VP1基因序列分析,结果显示,该毒株的抗原性与经典1型DHV差异显著;VP1序列与多株1型DHV的同源性在693%～933%;从进化关系来看,与韩国株的亲缘性最近。JS株属于我国流行的新型鸭肝炎病毒（命名为N\|DHV\|JS株）。     

雏鸭感染鸭肝炎病毒后血清生化指标的动态变化

用I型鸭肝炎病毒标准毒株R85952 人工感染 3日龄雏鸭 ,于感染后 6、12、16、2 0、2 4、2 8、3 2和 3 6h分别采集感染组和对照组雏鸭的血液分离血清进行生化指标测定。结果 :血清中Na+ 、K+ 、Ca2 + 、Mg2 + 、Cl- 、P5+ 等无机盐离子浓度和BUN含量变化不明显 ,OSM的变化也不明显 ;ALT、AST和GGT均较对照组有极显著升高 (P <0 .0 1) ;GLU浓度在攻毒后 2 4～ 3 6h极显著下降 (P <0 .0 1) ;TG、CHOL和VLDL呈极显著升高 (P <0 .0 1) ,表明血糖下降和血脂升高。TBIL和DBIL分别从攻毒后 2 0和 12h开始较对照组有显著的升高 (P <0 .0 5 )。上述的试验结果提示 :雏鸭感染鸭肝炎病毒后肝脏受损最明显 ,呈现急性、坏死性肝炎的病理过程     

检测雏鸭肝炎病毒的单克隆抗体—抗原斑点试验的建立

以微孔滤膜为抗原栽体,用酶标记的单克隆抗体直接检测病死雏鸭组织和鸭胚(或鸡胚)尿囊液中的雏鸭肝炎病毒(DHV-1)。建立了抗原斑点试验(AST)。试验的最佳工作条件:以50％脱脂牛奶,37℃1小时封闭;酶标单抗浓度为1:1600;底物缓冲液为0.05mol/LpH7.6Tris-HCl。用该法检测了175份病料,并进行阻断试验、交叉试验、平行试验及重复性试验。结果证明,这是诊断雏鸭肝炎病毒的一种微量、简便、特异性强的方法。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒MY株的培育及实验研究

将I型鸭肝炎分离株XC-1适应鸡胚,培育成1株毒力弱而稳定、免疫原性良好的鸭肝炎鸡胚化MY弱毒株.该毒株毒力为1011.40ELD50/0.1mL,1013.62TCID50/0.1mL;对雏鸭无致病性;在雏鸭体内连续盲传5代未见毒力返强;1日龄雏鸭用8,000 ELD)50/0.1mL的MY株致弱毒腿部肌注0.2ml免疫后3d强毒原液0.5mL/只攻击,可产生2/5的保护,第6d-21d产生完全保护,免疫后第3d、5d、6d、7d、9d、14d、21d抗DHV I的中和抗体滴度分别为10-1.38、10-1.55、10-1.64、10-1.65、10-1.68、10-1.8、10-1.89,表明MY是1株理想的鸡胚弱毒疫苗后备株;通过MY株的鸡胚的繁殖规律观察,确定该病毒的最佳收毒时间为接胚后的72h～84h,为疫苗生产条件的建立提供了依据.     

鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究

【目的】探讨鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法（IFA）对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数（WBC）、红细胞总数（RBC）、血小板总数（PLT）和总蛋白（TP）、血红蛋白（HGB）含量及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。     

用PCR和ELISA方法分析奶牛血清和奶中类乙型肝炎病毒

用人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）ＥＬＩＳＡ试剂盒检测８５份奶牛血清和９３份奶样。结果测出３３份血清为ＨＢｓＡｇ阳性，其中４价亦为ＨＢｅＡｇ阳性；２２份奶样为ＨＢｓＡｇ阳性，其中１１份亦为ＨＢｓＡｇ阳性。７个双阳性的样本，用针对ＨＢＶ表面抗原基因不同部位的两对引物作ＰＣＲ分析，结果未能扩增出特异片段，排除了奶牛ＨＢＶ血清学阳性是由人ＨＢＶ感染所致。     

乙型肝炎病毒基因组前C区突变的研究现状

乙型肝炎病毒基因组前Ｃ区突变的研究现状刘华瑞（综述），唐红，雷秉钧（审校）广东医学院附属医院传染科湛江５２４００１，华西医科大学附属一院传染科肝炎研究室乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的临床表现复杂多样。如病程长短、病情轻重及预后等均差异很大。以往人们一直...     

鸭病毒性肝炎病毒细胞培养技术的研究

采用“带毒一同步培养”新技术和特殊培养条件，延长病毒吸附时间，提高犊牛血清灭能温度，降低犊牛血清用量，在维持液中添加１００ｍＭ，ＮａＣｌ等，成功地将鸭病毒性肝炎标准Ⅰ型病毒ＡＴＣＣ株适应鸡胚成纤维细胞。连续传代至第６代时出现ＣＰＥ，第９代时，ＣＰＥ呈出规律性，接毒后４６小时ＣＰＥ达９０％，其特征是细胞变圆凝固性坏死，脱落。