根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究

经过转化材料的筛选、KM筛选浓度、Cef抗菌浓度以及延迟筛选时间的测定,以根癌农杆菌（Agrobactriumtumefaciens）LBA4404菌株介导FPF1基因转化菊花,对转化材料进行连续KM筛选,获得105株抗性苗,部分植株经PCR检测呈阳性.田间观察部分抗性株与对照相比在株型、叶色及花期上表现出差异.     

根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究

经过转化材料的筛选、KM筛选浓度、Cef抗菌浓度以及延迟筛选时间的测定,以根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)LBA4404菌株介导FPF1基因转化菊花,对转化材料进行连续KM筛选,获得105株抗性苗,部分植株经PCR检测呈阳性.田间观察部分抗性株与对照相比在株型、叶色及花期上表现出差异.     

根癌农杆菌介导转化籼稻影响因素的研究

选用我国籼型杂交稻中的几个重要亲本，以携带有双元载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌EHA105为载体，以GUS基因的瞬间表达为依据，研究癌农杆菌介导转化籼稻的影响因素，确立对转化频率有重要影响的几个条件。结果表明：经短期预培养（4－5d）的幼胚是较为理想的转化受体材料；在共培养其中添加较高浓度的乙酰丁香酮（300－400μmol/L）可提高GUS基因的瞬间表达频率；以CC培养基作为共培养后抗性愈伤筛选的基本培养基有利于抗性愈伤组织的筛选培养，按此确立的条件，在特青、龙特甫（B）、珍汕97（B）、盐恢559等籼稻品种或新本中的GUS瞬间表达率高达80％，抗性愈伤组织转化率高达70％。     

香蕉农杆菌介导高效转化体系

以香蕉（Musa spp.)的横切薄层切片（tTCL)外植体作为转化受体，研究影响根癌农杆菌转化香蕉的因素。研究表明，菌液的预处理和重悬液的pH值是影响香蕉转化的主要因子，而乙酰丁香酮（AS）是香蕉遗传转化中必需的酚类物质，80μmol/L是较理想的浓度；感染时间以8－15min，共培养的时间和温度分别以4－5d及26℃为最佳的条件。     

乙酰丁香酮在农杆菌介导的遗传转化中的作用机制及应用

乙酰丁香酮（AS）是一种酚类化合物,可诱发农杆菌内Ti或Ri质粒DNA上Vir区基因的活化和高效表达,现已被广泛应用于农杆菌介导的遗传转化中。从AS在遗传转化中的作用机理、应用历史和其影响因素等方面进行了综述,并提出今后的研究方向,以期为AS在遗传转化中的应用提供理论依据。     

根癌农杆菌介导油菜CBF1基因转化拟南芥

[目的]为油菜CBF1基因应用于作物抗逆遗传改良提供理论依据。[方法]采用根癌农杆菌介导法将油菜CBF1基因转入拟南芥,筛选抗性转基因拟南芥植株,进行PCR检测和GUS染色。[结果]与不抗潮霉素的野生型拟南芥幼苗相比,对潮霉素具有抗性的转基因拟南芥幼苗的叶片比较大,根特别长。PCR检测表明38株抗性拟南芥植株中有29株能扩增出与目的基因大小一致的条带,阳性率为76.3%,而野生型拟南芥植株没有扩增出相应条带。阳性PCR扩增产物的测序结果表明油菜CBF1基因已经转入到拟南芥。GUS染色表明有22株转基因拟南芥植株呈现阳性。[结论]油菜CBF1基因可以整合到拟南芥基因组并能稳定表达。     

农杆菌介导黄瓜Tril基因转化及体系优化

采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株阳性率为0.33%;分化培养基中6-BA适宜浓度为0.5 mg/L,出芽率最高(76.33%),平均出芽天数最短(19.66 d);生根培养基中Kan浓度为60 mg/L时筛选效果最好。3种筛选方式的研究表明,仅在生根培养基中添加Kan(60 mg/L)筛选,其转化周期最短(45 d),阳性率最高(达4.0%)。     

根癌农杆菌介导的番茄遗传转化

利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA101携带LycB基因（番茄红素β-环化酶）和潮霉素抗性基因，以东农704、708、709三个番茄品种的子叶、茎段为转化受体对番茄进行遗传转化，经PCR分子检测初步证明，目的基因LyeB已整合进番茄基因组中．     

根癌农杆菌介导Ds转座因子的水稻遗传转化

以水稻品种中花１１的幼胚,成熟胚和幼惠的愈伤组织材料,经携带Ｔｉ质粒ｐＤｓ－Ｂａｒ１３００的根癌农杆菌ＥＨＡ１０５感染和共培养后,通过５０ｍｇ／Ｌ和２５ｍｇ／Ｌ潮霉素的二次筛选,结果表明：３４％经胚愈伤组织１７％成熟胚愈组织和１６．５％幼穗愈伤组织表现潮霉素抗性,这些抗性愈伤组织转入分化和再生培养基培养,获得了１４棵转基因植株,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明Ｄｓ和Ｂａｒ基因都已整合进转基因植株的     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化研究进展

系统介绍了根癌农杆菌介导水稻遗传转化的发展历史、影响遗传转化的因素、侵染愈伤组织的方式及转基因植株的后代分析等,并探讨了水稻遗传转化的应用前景及存在的问题。     

转CBF1基因提高水稻抗寒能力的初步研究

本研究利用农杆菌介导法将转录调控因子CBF1导入北方粳稻沈6014和松粳3号中,经过多轮抗性筛选,获得了抗除草剂草丁膦的材料。PCR分子检测表明,外源基因已经插入到水稻基因组中。转基因植株后代种子在含除草剂的培养基上比对照具有更高的发芽率;4℃低温试验表明,转基因植株比对照的抗寒能力提高。     

拟南芥转录因子CBF1基因的克隆与原核表达

CBF1转录激活因子与植物的抗逆密切相关,根据GenBank中拟南芥（Arabidopsis thaliana）CBF1（C-repeat/dre binding factor 1）基因的编码区设计1对特异引物,通过RT-PCR扩增出拟南芥CBF1基因,随后亚克隆到pMD18-T载体,测序、序列分析表明与拟南芥CBF1对应区域相似性为100%。将该片段亚克隆到原核表达载体pET22b（＋）中构建原核表达质粒,转化大肠杆菌ER2566,在IPTG诱导下产生CBF1蛋白,SDS-PAGE结果表明表达的蛋白约24ku,与预期一致。     

转CBF1基因地被石竹的抗寒性评价

以4个转拟南芥CBF1基因的地被石竹株系及非转基因地被石竹为材料,通过测定相对电导率、脯氨酸含量及丙二醛含量进行抗寒性评价。研究发现不同低温处理后,转基因株系比对照植株(CK)的相对电导率和丙二醛含量低,而脯氨酸含量高,说明转入CBF1基因后,地被石竹的抗寒性增强了。转基因各株系之间有差异,其中株系27的抗寒性最强。     

CBF转录因子在提高植物抗逆性中的作用

CBF转录因子在植物胁迫应答途径中发挥十分重要的作用,对CBF转录因子的结构特点、表达调控及其在提高植物抗寒性、抗旱性及抗盐性中的作用的研究进展进行了综述。     

农杆菌介导CBF1基因转化安祖花的研究

[目的]为获得耐低温安祖花奠定基础。[方法]利用农杆菌介导CBF1基因侵染安祖花,并研究不同浓度乙酰丁香酮(AS)和侵染时间对转化后安祖花抗性愈伤组织的存活率和抗性芽分化率的影响。[结果]以重组质粒pBI121-CBF1为模板,利用CBF1cDNA全长的引物序列进行PCR扩增,获得约650bp的片段,表明重组质粒构建成功。在抗性培养基上筛选12周后,部分愈伤组织褐化死亡。用100μmol/LAS作为诱导物质时,抗性愈伤组织存活率和抗性芽的分化率较高。农杆菌侵染时间对转化后愈伤组织存活率和抗性芽分化率有一定影响。[结论]当AS浓度为100μmol/L、侵染时间为10min时,抗性愈伤组织的存活率及分化率最高,分别为48.6%和11.46%。     

CBF转录因子及其在植物抗寒性中的作用

CBF转录因子在抗寒性方面起重要作用,低温可诱导CBF转录因子的表达。CBF转录因子能够特异结合启动子中的CRT/DRE元件,激活COR等基因的表达,从而增强植株抗寒能力。目前已有许多成功将CBF基因导入植株的报道,为植物抗寒育种提供了一条新途径。     

植物CBF转录因子抗寒作用机制研究进展

综述了抗寒转录因子CBF(C-repeat binding factor)的分离鉴定、结构特征、表达特性、在植物抗寒过程中的作用机理及其与其他分子元件的相互作用等信息,系统阐述了CBF的最新研究进展,为其在植物抗寒方面的研究与应用提供理论依据。     

高灌蓝莓CBF基因的单核苷酸多态性分析

本研究以21个高灌蓝莓品种为试材,克隆VcCBF基因,测序后分析其单核苷酸多态性(SNP),共克隆到123个非重复序列,发现120个SNP位点,单核苷酸多态性发生频率为1/695bp,核苷酸多态性值(Pi)为0.01251。在120个SNP位点中,单态突变位点62个;简约信息位点58个,其中双突变55个,三突变3个。对其碱基替换方式进行分析发现,转换91个,颠换26个,转换与颠换的发生比率为3.5∶1。通过单倍型分析发现,21个蓝莓品种的VcCBF基因存在5种单倍型。     

山葡萄转录因子CBF1基因的克隆及其遗传转化体系

根据山葡萄的CBF1基因序列设计一对特异引物,克隆出山葡萄(Vitis amurensis)栽培品种‘双优’的抗寒转录因子CBF1基因,并将其构建到pBI121表达载体中,获得山葡萄转录因子CBF1基因的植物表达载体,命名为pBI121-ViCBF1,利用农杆菌介导叶盘转化‘巨峰’葡萄以研究高效的‘巨峰’葡萄转化体系。结果表明,以农杆菌LBA4404为介导菌株,以‘巨峰’葡萄叶片为外植体、3 d为预培养时间和4~5 d共培养时间、400 mg·L-1羧苄青霉素,50 mg·L-1卡那霉素筛选浓度转化效果较好,并已筛选到6株转基因植株,PCR检测均为阳性,为提高‘巨峰’葡萄的抗寒性建立了初步的技术基础。     

油菜抗逆基因CBF1植物表达载体的构建及对拟南芥的转化

通过RT-PCR技术从油菜中克隆到抗逆相关基因CBF1,将其成功构建到植物表达载体pCAMBIA1304,并通过农杆菌采用Floral dip法将重组表达载体转入拟南芥。经潮霉素抗性筛选和PCR检测,初步证明,油菜CBF1基因已经转入到拟南芥中。