INHβB、FSHR和LHR在牦牛不同生殖生理阶段卵巢组织中的表达及差异性分析

为了从受体角度研究抑制素(INH)、促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)对牦牛不同生殖生理阶段卵巢发挥的功能,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白印迹技术(Western blot)和免疫组织化学技术(IHC)检测抑制素受体(INHβB)、促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在牦牛发情期、间情期和妊娠期卵巢组织中的表达和定位。结果显示,INHβB在妊娠期牦牛卵巢组织中的表达量显著高于发情期和间情期(P<0.05),而FSHR在发情期的表达量显著高于间情期和妊娠期(P<0.05),LHR则在间情期的表达量显著高于发情期和妊娠期(P<0.05);这3个受体主要分布在卵泡颗粒细胞、卵丘细胞、黄体细胞和卵泡膜上。结果表明,INHβB、FSHR和LHR在牦牛发情期、间情期、妊娠期卵巢组织中均有表达,但其表达量存在一定差异,提示INH、FSH和LH在牦牛不同阶段对卵泡生长发育、卵泡成熟、排卵及黄体的形成发挥着不同的作用,该结果为进一步研究牦牛生殖活动中INH与FSH、LH的互作机制提供参考。     

FSHR、PGR在建昌黑山羊睾丸和附睾中的分布与发育性表达研究

采用免疫组化技术检测55、104、300和1140日龄建昌黑山羊睾丸、附睾头和附睾尾中促卵泡素受体(FSHR)和孕酮受体(PGR)分布和表达水平。结果表明:FSHR和PGR在建昌黑山羊的睾丸和附睾中均有表达,而且在睾丸和附睾的表达水平与发育日龄有关。     

促卵泡素受体和促黄体素受体在乏情期和怀孕期牦牛卵巢中的表达

应用免疫组织化学技术和图象分析方法对乏情期、怀孕期牦牛卵巢的促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)的表达特点进行了研究。结果表明,牦牛卵巢的皮质、髓质、颗粒层和膜内层、黄体中都分布有FSHR和LHR。且牦牛卵巢皮质、髓质中的FSHR光密度值在乏情期显著大于怀孕期(P0.05);怀孕期无黄体侧卵巢颗粒层和膜内层中FSHR光密度值均大于乏情期和怀孕期有黄体侧(P0.05)。怀孕期有黄体侧卵巢皮质处LHR光密度值最大,乏情期次之,怀孕期无黄体侧最小,各组间差异显著(P0.05);在怀孕期无黄体侧卵巢髓质处LHR光密度值显著小于怀孕期有黄体侧和乏情期(P0.05);在乏情期、怀孕期无黄体侧和怀孕期有黄体卵巢颗粒层和膜内层处LHR光密度值之间差异均不显著(P0.05)。表明牦牛卵巢中FSHR和LHR随着生殖阶段的不同而变化。     

性腺外FSH受体和LH受体表达研究进展

雌性动物的性腺是卵巢,性腺外的生殖组织器官主要包括:输卵管、子宫颈、子宫肌层等,其中子宫是内分泌器官,除有局部内分泌功能外,还可能对下丘脑-垂体-卵巢轴有调节作用.促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的生理功能是通过其FSHR、LHR来介导的,其受体在性腺和性腺外均有表达.本文主要对雌性性腺外生殖组织器官上两种受体的表达加以综述.     

不同超数排卵方法对天祝白牦牛超排效果的影响

为探索天祝白牦牛超数排卵的有效方法,选择54头纯种天祝白牦牛,利用国产促卵泡素(FSH)和进口FSH分别等量法和减量法进行超数排卵处理,比较其超数排卵效果。结果显示,应用等量法注射国产FSH超排的有效率为40%,减量注射法超数排卵的总有效率为50%;等量法和减量法注射进口FSH的超排有效率均为50%;使用大剂量FSH进行超排处理的有效率为50%;而应用FSH重复进行超数排卵处理的有效率为67%。结果表明,国产FSH与进口FSH在处理供体白牦牛进行超数排卵时,其效果差异不显著(P＞0.05),等量注射法和减量注射法对超排效果也无显著影响(P＞0.05)。在同等条件下,使用大剂量的FSH对供体进行超数排卵,其有效率与使用正常剂量FSH处理的有效率没有显著差异(P＞0.05),但重复超数排卵处理的效果显著高于一次处理的效果(P＜0.05),平均每头牛的排卵数也明显高于其他试验组。     

牦牛睾丸发育过程中前动力蛋白2(PK2)的动态变化

采集幼年期(1～2岁)、性成熟初期(2～3岁)、性成熟后期(3～7岁)和老年期(7～9岁)雄性牦牛的睾丸组织,通过IHC技术检测前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)在睾丸组织中的表达部位,通过qRT-PCR和Western blot技术检测PK2 mRNA及蛋白在牦牛睾丸组织中的表达水平。结果显示,不同年龄的牦牛睾丸中PK2均有表达,幼年期主要表达在精子细胞及精子中;在性成熟初期、性成熟后期及老年期的牦牛睾丸中,在初级精母细胞及次级精母细胞中也有表达;PK2在幼年期及性成熟初期mRNA相对表达量最低且显著低于性成熟后期及老年期(P<0.05),性成熟后期与老年期2组mRNA的相对表达量无显著性差异(P>0.05);PK2蛋白在牦牛各发育阶段的睾丸组织中均有表达,在幼年期蛋白表达量最低(P<0.05),而在性成熟初期、性成熟后期及老年期3组牦牛睾丸中的蛋白表达量无显著性差异(P>0.05)。结果表明,PK2在各发育阶段的牦牛睾丸组织中均有表达,且在幼年期牦牛睾丸中主要分布在精子细胞,在性成熟初期、性成熟后期及老年期牦牛睾丸的初级精母细胞、次级精母细...     

去甲基化酶KDM4B在牦牛卵泡发育过程中的表达

采集牦牛卵巢组织,利用免疫组织化学法分析KDM4B在不同发育阶段牦牛卵泡中的表达与定位;根据牦牛卵泡直径大小,将卵泡分为大卵泡(≥7 mm)、中卵泡(3.0～6.9 mm)和小卵泡(≤2.9 mm)组,采用注射器抽取的方法分别收集各组别卵泡中卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)及...     

牦牛卵泡发育过程中MST1和YAP1的表达特征研究

哺乳动物STE20样激酶1(Mammalian Sterile 20-like Kinase 1,MST1)和Yes相关蛋白1(Yes AssociatedProtein1,YAP1)作为Hippo信号通路的主要成员,在哺乳动物胚胎发育、细胞增殖与凋亡、调节器官体积以及维持内环境的稳态等过程中发挥生理学效应。为探讨MST1和YAP1对牦牛卵泡发育产生的影响,本实验采集健康牦牛的卵巢,按照卵泡直径大小将其分为小卵泡（2～4 mm）、中卵泡（4～6 mm）、大卵泡（6～8 mm）和超大卵泡（>8 mm）,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western Blotting、免疫组织化学技术,对不同大小卵泡中MST1基因和YAP1基因及其蛋白表达情况进行分析研究。结果显示,MST1和YAP1基因及其蛋白在牦牛各个发育阶段卵泡中均有表达,其表达量在不同大小卵泡中存在一定差异。尤其处于优势化选择阶段时中卵泡的表达量显著高于其他3个期。YAP1在牦牛各发育阶段卵泡中的表达变化与MST1基本一致。从表达部位来看,MST1和YAP1蛋白主要分布于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中。结果表明,MST...     

成年公猪睾丸及附睾中促黄体素受体mRNA表达的研究

试验采用FQ-PCR技术进行了成年公猪睾丸及附睾中促黄体素受体mRNA表达的研究,结果表明:促黄体素受体mRNA不仅在睾丸内表达,在附睾中也有表达;睾丸、附睾中促黄体素受体mRNA的表达量分别为(1.42±0.08)×109 copies/mL和(6.54±0.21)×109copies/mL,睾丸两组织间促黄体素受体mRNA表达量无明显差异(P>0.05).     

补饲对牦牛生长和睾丸发育的影响研究

为了杜绝牦牛因营养不良引起睾丸发育受阻,使其不能种用而造成损失,本试验探索通过补饲的方式来提高牦牛的营养水平,使其生长发育不受到影响.结果显示:补饲后试验组牦牛的体重增长比较明显,且睾丸发育较好,而各项体尺指标与对照组差异不显著.本研究为牦牛种牛的选育提供了技术参考.     

日粮能量对育成柴鸡卵巢促卵泡素受体、促黄体素受体表达的影响

本研究旨在探究日粮能量对育成柴鸡卵巢促性腺激素受体的影响及其机理。选用育成柴鸡14周龄36只采用单因素方差随机试验,随机分成3个处理,每个处理3个重复,每个重复4只鸡,分别饲喂低能、高能、对照的日粮,试验时间为28d,采用荧光定量反转录-聚合酶链反应,研究日粮能量水平对柴鸡性成熟过程中卵巢促卵泡受体和促黄体受体mRNA表达的影响。结果显示:育成柴鸡FSHR、LHR的表达低能组与对照组差异不显著,但是与高能组差异极显著。结果说明,日粮能量通过下丘脑-垂体-性腺轴影响育成柴鸡生殖机能。     

牛FSHR基因第4外显子多态性检测及序列分析

以西门塔尔和夏洛莱种公牛为对象,采用PCR-SSCP技术检测了促卵泡素受体(FSHR)基因第4外显子在西门塔尔、夏洛莱种公牛45个个体中的遗传多态性,结果发现多态性,旨在为研究该基因多态性与西门塔尔和夏洛莱种公牛繁殖性状的相关性提供理论依据,为筛选繁殖性状分子标记奠定基础.结果表明,牛FSHR基因第4外显子存在2个等位基因A和B,3种基因型分别为AA型、AB型和BB型.对多态片段的测序分析表明,FSHR基因第4外显子第38位碱基处发生碱基C→G的颠换,使得FSHR基因编码的受体胞外域部分出现一个脯氨酸到丙氨酸的变化,结合FSHR蛋白空间结构分析发现该氨基酸变化不直接影响FSHR与FSH的结合及FSHR转导信号能力.此外,据牛、绵羊、猪、马、人和大鼠FSHR基因第4外显子序列同源性比较表明:牛与绵羊该部分序列的同源最高为100%,与大鼠同源性最低为83%.     

雌激素β受体在大鼠睾丸中的表达与发育研究

为了研究雌激素β受体(ER-β)在不同年龄大鼠睾丸中的表达,试验采用免疫组织化学SP法对雌激素β受体在4,23,50周龄大鼠睾丸组织中的表达进行了研究.结果表明:4周龄大鼠睾丸雌激素β受体免疫反应产物表现出强阳性,主要分布在间质细胞和肌样细胞中;23周龄雌激素β受体免疫反应产物表现出中等阳性,主要出现在少量的间质细胞和大量的肌样细胞中;50周龄大鼠睾丸仅见极少数区域个别的阳性间质细胞与肌样细胞,免疫反应产物表现出弱阳性;随着大鼠年龄的增长,大鼠睾丸中的雌激素β受体的表达量呈下降趋势.     

牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中CYP19A1表达差异分析

旨在探索CYP19A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达水平.采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测CYP19A1在牦牛不同级别卵泡(≤3 mm、3～5 mm、5～8 mm及≥8 mm)和卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte com...     

FSH对仔猪睾丸支持细胞增殖和GDNF表达的调节

以原代培养的仔猪睾丸支持细胞（SC）为试验模型，研究了FSH对SC胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达及其增殖的影响。结果显示，外源性添加FSH可促进GDNF蛋白表达，而且这种促进作用具有浓度和时间依赖关系，GDNF蛋白水平随着FSH浓度的增加而升高，FSH浓度为50ng／mL时，GDNF水平达到最高，然后逐渐降低；FSH（50ng／mL）作用30min，可显著促进GDNF蛋白的表达（P〈0．05），当FSH作用1h时，GDNF蛋白水平达到最高，随后逐渐降低。FSH可以时间-剂量依赖性促进SC增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，FSH（50ng／mL）作用30min时，PCNA的表达显著增加（P〈0．05），作用1h达极显著水平（P〈0．01），至2h时，PCNA蛋白的表达水平达到最高，随后逐渐降低。提示，FSH可在体外条件下通过刺激SC表达GDNF进而促进其增殖。     

文昌鸡促卵泡素受体(FSHR)基因外显子区域SNPs分析

寻找与鸡繁殖性能相关的遗传标记,为高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据.本研究以促卵泡素受体(FSHR)基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术结合测序对FSHR基因部分包括所有外显子区域进行单核苷酸多态性检测和分析.结果发现,在区域2、区域4、区域6、区域9共4个区域存在SNPs位点.exon4编码区43 bp处T→C突变,但没有导致翻译后氨基酸序列的改变,在exon2中编码区5'端-49 bp处的C→T突变;exon6编码区3'端+12 bp处的A→G突变;exon8编码区3'端+38 bp处的G→T突变.促卵泡素受体(FSHR)是促卵泡素(FSH)的特异性受体,这些位点的单核苷酸多态性为下一步研究探讨FSHR基因对文昌鸡繁殖性能的遗传效应奠定了基础.     

GSTM3基因在牦牛和犏牛睾丸及附睾组织中的表达研究

谷胱甘肽S-转移酶Mu 3(GSTM3）是一种必需的抗氧化酶,其在精子中的存在与精子的耐冷性、质量和生育能力有关。为研究GSTM3的表达与雄性牦牛繁殖功能的关系,本研究对牦牛附睾GSTM3基因进行克隆、生物信息学分析,并应用实时荧光定量PCR分析GSTM3基因在牦牛和犏牛附睾以及睾丸组织中的表达情况。结果表明,牦牛GSTM3基因CDS区序列长度为678 bp,编码225个氨基酸;GSTM3基因编码蛋白为弱酸性且不具有跨膜结构,分子式为C1204H1857N319O340S19,分子量和等电点分别为26.85 ku和7.29;牦牛GSTM3核苷酸序列与普通牛和瘤牛有较高的种间同源性,分别为99.26%和98.53%;GSTM3基因在牦牛和犏牛附睾以及睾丸组织中均有不同程度的表达,牦牛附睾和睾丸的GSTM3表达量显著高于犏牛。     

卡拉库尔羊卵巢中促性腺激素受体蛋白的分布

在自然发情情况下,取10只卡拉库尔羊卵巢,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)方法观察卡拉库尔羊卵巢中促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)分布情况。分别选取连续的5张阳性切片,图像分析。结果显示:FSHR、LHR阳性细胞主要分布于卵泡颗粒细胞、膜细胞和卵母细胞。卡拉库尔羊原始卵泡卵母细胞中便有2种受体阳性细胞分布,在各级卵泡中2种受体阳性细胞数量随卵泡发育水平呈正向增加趋势。     

GnRH脉冲对体外原代培养大鼠GTH细胞中FSHβ mRNA表达水平的影响

为了从分子水平阐述不同脉冲频率促性腺激素释放激素(GnRH)对促性腺激素(GTH)分泌促卵泡素(FSH)的影响,采用细胞体外培养技术结合荧光定量PCR技术,研究体外培养大鼠原代垂体细胞在不同脉冲频率GnRH刺激下,细胞FSHβ mRNA的变化.在相同振幅条件下,低频刺激(120 min间隔)时,FSHβ mRNA表达水...     

日粮中添加二氢吡啶对雄性小鼠生殖激素的影响

80只6周龄的健康雄性昆明小白鼠,随机分成4组,其中对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加200mg／kg,400mg／kg,800mg／kg的二氢吡啶,以探讨二氢吡啶对雄性小鼠内分泌机能的影响。结果表明,试验组小鼠血清中的FSH、LH和T均高于对照组,并随饲喂时间的增加,与对照组的差异越明显。