一株约翰逊不动杆菌的分离和鉴定

在土壤中分离到一株细菌STRB，该菌可以在SFM、LB、EMB、PDA、MM、MacC等多种培养基上生长，革兰氏染色为阴性，电镜观察无鞭毛。生化指标检测显示，该菌株对多数糖类不能发酵，经bioMerieux Vitek公司的革兰氏阴性细菌检测试验卡(GNI)鉴定为醋酸钙不动杆菌。设计2对简并引物对其16S rRNA进行PCR扩增，16S rRNA序列及其进化树分析结果显示，该菌为约翰逊不动杆菌。     

一株对大豆疫霉具有抑制活性放线菌的分离与分子鉴定

大豆疫霉(Phytophthora sojae)可引起大豆疫霉根腐病,是一种分布广泛、危害较为严重的世界性土壤传播病害。为获得对大豆疫霉根腐病具有良好抑制效果的放线菌资源,采用高氏培养基从采集自内蒙古多伦县的土壤中分离对大豆疫霉具有抑制活性放线菌并进行分子鉴定。结果表明:分离到一株对大豆疫霉具有较强抑制作用的放线菌,编号为放线菌1-17,平板对峙的抑菌直径在17.81mm以上。另外该菌对尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌也具有抑制作用,抑菌直径均在10mm以上。放线菌1-17的16SrDNA序列比对结果显示其与Streptomyces humidus NBRC 12877(T)相似性达99.85%,表明其为链霉菌属菌Streptomyces humidus sp.。     

异常原料乳中一株芽胞杆菌的分离与鉴定

该试验目的在于利用16SrRNA鉴定的方法对从异常原料乳中分离提纯得到的一株细菌进行鉴定.利用基因提取试剂盒提取出菌株DNA,并利用通用引物扩增菌株的16SrRNA,测序后对序列进行比对分析.电泳结果显示16SrRNA扩增成功,条带明亮,无杂散带,条带大小约为1500bp,符合要求;在NCBI中将测序结果进行Blast...     

磷高效转基因水稻OsPT4根际高效解有机磷细菌的分离鉴定

为提升磷高效转基因水稻根际土壤的磷素利用率,采用传统微生物分离培养技术分离筛选高效解有机磷菌株,并对分离菌株进行鉴定和解磷能力的测定。以改良的蒙金娜固体有机磷培养基分离磷高效转基因水稻OsPT4根际土壤中的解有机磷菌株,检测其溶磷特性,并通过比对16S rDNA基因序列进行分类鉴定。结果表明：从磷高效转基因水稻根际土壤中分离获得15株解菌株,纯化复筛后获得6株可以产生明显溶磷圈且生长稳定的解有机磷菌株。6株解磷菌的可溶性指数在1.50~6.33之间,其中菌株Y7的可溶性指数最高;培养24 h后菌株的解磷量在10.60~87.43 mg·L^-1之间,其中菌株Y7最大。培养24 h后菌株Y7的菌液pH降低最多,碱性磷酸酶分泌量仅低于菌株Y11。除Y7外的5株菌株均为大田土壤中分离筛选的常见类群,在解磷能力、溶磷特性上与传统大田作物中筛选获得的解磷菌株无明显差异。菌株Y7的解磷能力最强,经鉴定其属于泛菌属（Pantoea sp.）,是常见的水稻种子内生菌核心类群,酸化作用和碱性磷酸酶作用是其主要的解磷机制,Y7可作为高效解磷菌资源进行进一步研究。     

绵羊肺炎支原体贵州分离株的鉴定

【目的】对贵州省疑似绵羊肺炎支原体(Mo)感染山羊病例进行病原确定性诊断。【方法】采集疑似Mo感染山羊肺脏,以支原体专用培养基从其中分离致病支原体,并通过形态学观察、生化试验、血清学试验及分子生物学方法对分离菌株进行鉴定。【结果】分离菌株菌落呈无中心脐圆形凸起,菌体呈多形性,大小在0.2～0.4μm;分离株表现出了与Mo标准株Y98相同的生化特性,在含抗Mo血清培养基中不生长;分离株16SrRNA基因序列与Mo Y98株同源性达99.55%,系统进化树分析与MoGH3-3株进化关系最近。【结论】成功分离到了Mo,为确定本地山羊支原体肺炎病原种类提供了理论依据,并为后续围绕病原进行防控工作研究奠定了基础。     

鲍氏不动杆菌MF1株的粘附特性

取从患病鳜鱼体内分离到的鲍氏不动杆菌 Ｍ Ｆ１株和３株 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ不动杆菌参考株做血凝试验（ Ｈ Ａ）,１３种不同动物的红细胞对４株不动杆菌的血凝特性分析结果表明,鲍氏不动杆菌（ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍ ａｎｎｉｉ） Ｍ Ｆ１株能凝集人 Ｏ 型血以及鸡、鼠、绵羊、鲢、黄鳝等５种动物的红细胞, 不凝集鳜、罗非鱼、鲫、团头舫、鲤、欧洲鳗、鳙的红细胞, 且该种血凝不能被甘露糖抑制; 其它３株 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ参考菌株对１３种红细胞均不能发生凝集。４株不动杆菌的粘附实验表明, Ｍ Ｆ１株可以粘附 Ｈ Ｅｐ２细胞, 每细胞粘附菌在２０个以上, 菌体粘附于细胞四周; ３株 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ不动杆菌参考株对 Ｈ Ｅｐ２细胞不具粘附特性。以上４株不动杆菌对 Ｅ Ｐ Ｃ细胞 （鲤鱼乳头状上皮瘤细胞系） 均无粘附性。     

貂链球菌和巴氏杆菌混合感染的分离与鉴定

2004年4月,黑龙江省密山某貂厂爆发急性传染病,貂厂人员将发病貂送检,综合流行病学、临床症状、病理变化、病原分离鉴定及动物试验,确诊为以前从未报道的链球菌和巴氏杆菌混合感染。利用药敏试验结果给出了有效的治疗对策。     

一株羊肺炎支原体的分离和生物学特性鉴定

支原体是一类无细胞壁的细菌,细胞柔软、高度多形,广泛分布在污水、土壤、动物和人体中,目前证实有30多种支原体对人或畜禽有致病性[1]。近年来广西山羊常见多发的山羊传染性胸膜肺炎也是由支原体感染所致,严重影响了广西山羊养殖的健康发展。     

金鱼源多重耐药不动杆菌的分离与鉴定

从养殖场金鱼肝脏分离到1株优势菌株,其形态特征和生理生化测试结果表明,该菌为革兰氏阴性杆菌,无动力,氧化酶阴性、接触酶阳性,44℃生长。结合16SrRNA基因序列和系统发育树的分析结果,确定该菌为不动杆菌Acinetobacter bereziniae。药敏试验结果显示,分离菌对新生霉素、强力霉素、亚胺培南、美满霉素、利福平中度敏感;对氨苄西林、左氟沙星、链霉素、庆大霉素、四环素、甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲基异恶唑、恩诺沙星等24种药物不敏感。     

猪肺炎支原体山西株的分离与鉴定

研究旨在获得猪肺炎支原体山西地方株,以期补充猪肺炎支原体山西地方株的菌株信息,为山西猪支原体肺炎的诊断及防治提供理论依据。将具有猪支原体肺炎典型病理特征的肺脏剪成米粒大小,放入KM2液体培养基,盲传培养后在固体培养基中纯化培养,用16S rRNA和种特异性基因P36进行PCR检测,对P36扩增结果测序与登录NCBI GenBank的猪肺炎支原体进行同源性比较,并构建系统发育树。结果显示,液体培养基变色提示培养基中含有猪肺炎支原体;菌落中间暗、边缘光滑,呈典型的煎蛋样,大小0.2μm左右,生理生化特性符合支原体特性;16S r RNA和P36基因经PCR扩增确认分离菌株为猪肺炎支原体,并命名为JZ01株。JZ01株是从山西最近发病且致病性严重的猪肺中分离而来,其不仅能成功适应人工培养基,而且传代生长良好,为潜在的疫苗菌株。     

鲍曼不动杆菌斑点叉尾鮰株的分离与鉴定

从湖北省宜昌市清江水库网箱养殖发病的斑点叉尾鮰肝脏分离到1株细菌CH016,该菌可在淡水琼脂平板上生长,单菌落圆形白色,表面圆滑,边缘整齐。经腹腔注射回归感染试验,复制出与自然发病相同的病症,且从人工感染病鱼体内再次分离到与自然发病相同的细菌,表明该菌对斑点叉尾鮰具有致病性。经生理生化鉴定、16S rRNA基因序列及其系统发育分析,结果均显示该菌为鲍曼不动杆菌。     

一株产紫红色色素的沙雷氏菌的分离与鉴定

[目的]为有效预防和控制由沙雷氏菌引起的多种疾病提供依据。[方法]以华蓥山香菇作为研究材料,从其表面中分离出了1株产紫红色色素的细菌,采用形态学、生理生化方法对其进行初步鉴定;提取基因组DNA,采用16S rRNA的通用引物,PCR扩增16S rDNA基因片段,克隆入pMD-18T载体,转化E.coliDH5α,筛选阳性重组质粒鉴定后测序;通过多序列比对和同源性分析,构建系统发育树。[结果]该菌株革兰氏染色阴性,与沙雷氏菌属菌的同源性最高,命名为Serratiasp.JG05。扩增得到序列大小为1 506 bp,系统发育树表明JG05与Serratiasp.BBTR23的亲缘关系最近,核苷酸水平有99.20%的相似性。[结论]该研究为进一步研究这种附生菌与香菇的共生关系,以及它们之间的作用机制奠定了基础。     

一株益生芽孢杆菌的分离与鉴定

[目的]为优良益生菌的开发提供理论依据。[方法]以采自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所鸡舍附近的土壤样品为材料,采用稀释平板法对其中的菌株进行分离与纯化培养,并对分离菌株的生理生化特性和淀粉酶活性进行测定。[结果]从土壤样品中分离到一株芽孢杆菌（编号为P-31）,结合16S rDNA测序、系统发育树分析和生理生化鉴定结果,确定该菌株为巨大芽孢杆菌,其16S rDNA GeneBank登录号为GU271136;水解酶活性测定结果显示,该菌株具有产蛋白酶和淀粉酶的活性。[结论]该研究所分离的菌株P-31具有良好的益生菌开发前景。     

乳酸粪肠球菌的分离鉴定与系统进化分析

分离鉴定一株疑似乳酸粪肠球菌.通过对表型特性包括培养特性、形态学观察、生化试验等鉴定,同时结合16S rDNA系统进化分析;结果该株革兰氏阳性菌能在10℃和45℃生长.接触酶阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,可生长于6.5%NaCl和pH9.6的环境等,16S rDNA系统进化分析与粪肠球菌有最高同源性.结论表明分离株为乳酸粪肠球菌.     

微囊藻毒素降解菌EMB分离鉴定及其降解特性

以藻毒素提取液作为唯一碳源和氮源,从太湖蓝藻堆积点底泥中分离筛选高效微囊藻毒素降解菌。结果表明:经过驯化筛选得到1株高效降解菌EMB。在培养温度30℃、pH值为7时其降解毒素效率最高,培养21h内可将初始浓度为2.99 mg/L和2.15 mg/L的MC-RR和MC-LR完全降解,此外菌株EMB可以将太湖水华样品中的MC-RR和MC-LR在2周内降解到安全饮用水标准范围内。形态、生理特性和16 S rDNA序列分析表明,菌株EMB属于芽孢杆菌属(Bacillus.sp.),与已报道的B.subtilisB-FS06在进化树上距离最近。     

脂肪酶菌种的筛选及分子鉴定

通过固体平板法,从温泉水样中筛选出1株耐热脂肪酶产生菌X-33。对该菌株进行了产酶条件的初步探索,得出其摇瓶发酵条件为：2%可溶性淀粉,3%酵母膏,MgSO4·7ddH2O 0.1%,K2HPO40.1%,三丁酸甘油酯乳化液0.1%,起始pH值7.5,通气量50 mL/250 mL摇瓶,250 r/min,发酵温度37℃,发酵周期24 h。该酶在60℃条件下温浴30 min,可保留部分活性。为鉴定该菌株,克隆并测序了其16S rDNA基因序列,NCBI上比对分析表明,该菌株与sphingomonas yabuuchiae（鞘氨醇单胞菌）有最紧密的亲缘关系。     

一株亚硝酸盐降解菌的分离鉴定

为寻找对亚硝酸盐具有高效降解能力、稳定和安全的优良菌株,采用亚硝酸盐氧化细菌(Nitrite-oxidizing bacteria, NOB)富集、分离技术从湖州某水域淤泥中分离得到一株纯培养菌株N3。提取细菌的总DNA,利用细菌16S rDNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析,用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank等数据库中进行同源性检索。结果表明,N3的DNA扩增产物片断大小为1441 bp,测序结果经检索证实N3与标准菌株Cellulosimicrobium cellulans (AY665978.1) 16S rDNA保守性片段有100%的同源性,可以判定所分离得到的N3菌株为纤维单胞菌属的纤维化纤维单胞菌(Cellulosimicrobium cellulans)。     

一株产多不饱和脂肪酸海洋细菌的筛选及鉴定

[目的]对一株产多不饱和脂肪酸(PUFA)的海洋细菌进行筛选及鉴定。[方法]以东海海域采集的鲭鱼、鮟鱇鱼、小黄鱼和虾的肠道为样品,从中筛选产PUFA的海洋细菌,并对其进行生理生化试验和16S rDNA序列分析。[结果]试验共筛选出8株菌株,其中P4菌株的PUFA产率较高。常规生理生化试验和16S rDNA序列分析结果显示,P4菌株是芽孢杆菌属的一个种。[结论]P4菌株具有高产PUFA性质,可用于脂肪酸的提取和开发利用。     

1株脱毛蛋白酶生产菌株的选育和鉴定

[目的]筛选鉴定脱毛蛋白酶生产菌株。[方法]通过菌株分离、筛选与鉴定试验筛选并鉴定出了1株脱毛蛋白酶生产菌株,命名为Bacillus cereus SZ-4。[结果]经初筛得到11株脱毛蛋白酶生产菌株,经复筛得到菌株SZ-4。SEM观察结果表明,蜡状芽孢杆菌1.230与待鉴定菌株的细胞形态非常相似。菌株SZ-4的菌体细胞革兰氏染色呈阳性;荚膜染色呈阴性;芽孢呈椭圆形,中生或次端生。生理试验结果表明,葡萄糖、L-鼠李糖、肌醇、甘露醇及蔗糖均可用作菌株SZ-4的碳源;以葡萄糖为碳源时,菌株的生长状况最佳。该菌株是1株嗜盐菌。DNA序列分析表明,蜡状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌同处于一个最小的分支,与已知菌株Bacillus cereus strain CCM2010的遗传距离最近,同源性达到99.8%。确定该菌株为蜡状芽孢杆菌,将其命名为Bacillus cereus SZ-4。[结论]该试验从盐腌原料皮中分离得到1株脱毛蛋白酶生产菌株SZ-4。     

一株亚硝酸盐降解菌的分离鉴定

为寻找对亚硝酸盐具有高效降解能力、稳定和安全的优良菌株,采用亚硝酸盐氧化细菌(Nitrite-oxidizing bacteria,NOB)富集、分离技术从湖州某水域淤泥中分离得到一株纯培养菌株N3。提取细菌的总DNA,利用细菌16S rDNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析,用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank等数据库中进行同源性检索。结果表明,N3的DNA扩增产物片断大小为1441bp,测序结果经检索证实N3与标准菌株Cellulosimicrobium cellulans(AY665978.1)16S rDNA保守性片段有100%的同源性,可以判定所分离得到的N3菌株为纤维单胞菌属的纤维化纤维单胞菌(Cellulosimicrobium cellulans)。