噬菌蛭弧菌、噬菌体和细菌素（一）

秦生巨老师1979年开始研究以“噬菌蛭弧菌、弧菌噬菌体为主的微生物生态制剂”至今已经30多年,是我国噬菌蛭弧菌、弧茵噬菌体及其微生物生态制剂研究的创始人。     

噬菌蛭弧菌的研究及应用⑧噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研制、应用及生态效应

1 噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研究历程 1979年,我国首次开展对噬菌蛭弧菌(以下简称蛭弧菌)的研究.     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(四):噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在虾蟹养殖中的应用

在我国,虾蟹养殖用药品的生产和使用极不规范,养殖者盲目使用抗菌药物和消毒剂,造成虾蟹产品中药物残留严重超标,使得我国虾蟹产品的出口在国际市场屡受挫折。因此,要彻底解决抗生素及其他化学药物残留对人体的危害,扩大虾蟹产品在国际市场上的出口规模,一是必须规范我国水生动     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(六)噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在海水水生动物养殖中的应用

海水养殖是海洋渔业中的重要产业之一，海水养殖的水生动物的种类主要包括贝类、虾类、蟹类和鱼类。贝类主要为牡蛎、贻贝、扇贝、泥蚶、蛤、缢蛏、鲍、珍珠贝类等；虾类主要为对虾、罗氏沼虾、日本龙虾等；鱼类主要为鲻鱼、梭鱼、罗非鱼、鲷鱼和石斑鱼等。     

噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的作用机制及生态效应

1989年美国批准噬菌蛭弧菌（简称蛭弧菌）微生物生态制剂在养殖业上使用，1994年我国批准在动物上使用该制剂。蛭弧菌是一类细菌寄生菌，具有独特的寄生和溶解宿主细胞的生物学特征，自20世纪60年代首次发现以来，国内外至今已发表论文800余篇，但对蛭弧菌微生物生态制剂的作用机制及其生态效应的研究还不够系统。     

噬菌蛭弧菌的研究及应用(五):噬菌蛭弧菌微生物生态制剂在淡水水生动物养殖中的应用

淡水水生动物是指能生活在含盐量低于3‰的水体中，系统发生过程中未曾脱离水体生活的一级水生动物。我国的淡水水生动物资源非常丰富，加上人工养殖的水产品，市场供应充足。特别是淡水鱼类，世界上现有约10000种，我国就有1000种左右。     

噬菌蛭弧菌的生物学特性研究

噬菌蛭弧菌（以下简称蛭弧菌）是一类专门以捕食细菌为生的寄生性细菌。广泛存在于自然水体，污水及土壤中，并能从动物或人体粪便中检出。它比通常的细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，但它不是病毒，它具有细菌的一切形态特征。1962年首次发现于菜豆枯萎病假单胞菌体中，命名为Bdellovibriobacteriovorus，由于它们具有特殊捕食生活方式以及有可能充当决定自然界中微生物种群变动的角色，因而引起了许多科学工作者的兴趣。我们利用分离到的一株具有控制鱼类暴发性出血病病原的蛭弧菌BdNA1和由淡水渔业研究中心分离并保存的嗜…     

噬菌蛭弧菌防治鱼类细菌性疾病的应用研究

噬菌蛭弧菌防治鱼类细菌性疾病的应用研究何义进邢华（中国水产科学研究院淡水渔业研究所，无锡２１４０８１）黄珏（江苏省农林厅畜牧兽医局，南京２１００２４）噬菌蛭弧菌Ｂｄｅｌｏｖｉｂｒｉｏｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ（以下简称蛭弧菌），是一类专门以捕食细菌为...     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（四）

2.3蛭弧菌对伤寒沙门菌的裂解作用蛭弧菌Bd81、Bd98对206株（江苏省地方菌201株,标准菌5株）伤寒沙门菌有显著的裂解作用,在自来水双层琼脂平板上,大多数可以形成清晰透明的噬菌斑,裂解强度不完全一致。Bd81裂解率为96.6%,Bd98裂解率为99.02%。     

噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂在水生动物养殖上的应用——噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂在水生动物养殖上的应用

近几年，随着水产品健康养殖理念的不断深入人心，健康养殖技术的逐步推广以及政府有关部门对渔药使用监管力度的日益增大，抗生素及其它化学合成药物在水产养殖中的使用已经受到并将进一步受到严格禁止或限制。与此同时，与水域生态环境相对友好的微生物生态制剂因其具有改善养殖水体的水质和底质、提高养殖水生动物对疾病的抵抗能力、减少药物的使用量和残留等特点，在水生动物养殖中得到越来越广泛的应用。其中有一个发展迅速、异军突起的微生物生态制剂，那就是噬菌蛭弧菌微生物生态制剂。跟其它微生物生态制剂相比，噬菌蛭弧菌具有“寄生”和“溶解”细菌的特性，噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的生产工艺特殊，但它对生产的工艺技术和应用等都有较高的要求，如果生产或应用不当，效果往往会适得其反。为此，本刊特约长期从事噬菌蛭弧菌及其微生态制剂研究，原中国医学细菌保藏管理中心弧菌噬菌体专业研究室主任秦生巨研究员就噬菌蛭弧菌的基本特性、研究概况、作用机制以及生态制品的应用等内容进行系统、详尽的论述，并以连载的方式刊出。期望能对广大读者比较全面、系统地了解和正确应用噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂有所帮助。[编者按]     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（一）

细菌的寄生菌为Stolp和etzold1962年首次在德国的土壤中于一种植物假单胞菌上发现的.1 96 3年Stolp和Starr 又在美国加利福尼亚州的土壤、污水中用独特的分离技术得到了这类细菌,并命名为Bdellovibrio bacteriovorus （噬菌蛭弧菌,简称蛭弧菌）.因发现这类细菌,Stolp等曾被授予Koch奖金.由于此类菌对宿主菌的“寄生”和“裂解”的生物特性引起了人们极大的兴趣,2 0多年来,美国、苏联、日本、以色列、法国、加拿大和印度等国家的实验室都在进行对这类菌的研究.     

噬菌蛭弧菌预防对虾弧菌感染的应用研究

采用16S rDNA特异引物对63F和842R对蛭弧菌标准菌株Bdellovi briobacteriovorus 109-J和实验菌株Bd-9913进行了PCR鉴定,使用Bd-9913菌株分别对3株虾类病原菌溶藻弧菌Vibrio alginolysticus LS01、HF09,副溶血弧菌V．parahaemolyticus V28以及1株大肠埃希氏菌Escherichia coli CH-42进行裂解。结果表明,10^5PFU／ml的Bd-9913对于10^9CFU／ml的宿主菌具有较好的裂解效果。采用3．0×10^5PFu／mlBd109-J和Bd-9913分别与饲料混合（v／w）后投喂3．0g左右的凡纳滨对虾幼虾,14d内未发现对虾异常,且在对虾肠道内检测不到Bd109-J及Bd-9913,证明二者对于凡纳滨对虾幼虾是安全的。对正常养殖了50d的室外集约化虾池水体分别泼洒终浓度0．3mg／L的二氯异氰脲酸、0．3mg／L季胺盐络合碘和3．0×10^5PFU／ml蛭弧菌,后者对于抑制水体弧菌活菌浓度的效果明显优于化学消毒剂。当每隔20d左右分别进行一次上述水体处理,通过比较体内弧菌感染的对虾个体数,发现从肝胰腺分离到弧菌的对虾数量二者无显著差异,但从血淋巴分离到弧菌的对虾数量,蛭弧菌处理组显著少于化学消毒剂处理组,显示了蛭弧菌在预防对虾弧菌感染方面的优越性。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（三）

1.7蛭弧菌在死的宿主菌中的生长特性蛭弧菌Bd81、Bd98于加热及氯仿处理失活的宿主菌双层琼脂平板上,比在未经处理的活的宿主菌双层琼脂平板上更迅速形成噬菌斑,后者一般需40~48h才可出现噬菌斑。在加热及氯仿处理的宿主菌双层琼脂平板上只需14h,形成噬菌斑的数目也大大增多。例如在100℃加热致死的宿主菌中Bd81增加105倍,Bd98增加约72倍,在80℃加热致死的宿主菌中Bd81增加151倍,Bd98增加73倍。氯仿处理致死的宿主菌上Bd81增加74倍,Bd98增加67倍。     

噬菌蛭弧菌对乌鳢养殖水质的影响

为了探讨噬菌蛭弧菌制剂净化水质和病害防治的效果,试验以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度为1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,观察7 d内养殖池的pH、DO、NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数等主要水质指标以及乌鳢死亡数目的变化。向乌鳢养殖池加入噬菌蛭弧菌后,试验组与对照组相比,NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数明显减少(p<0.05),DO明显增大(p<0.05),但pH变化不明显(p>0.05);乌鳢死亡率也明显减少(p<0.05)。试验结果表明,以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,有利于提高DO含量及乌鳢存活率,降低NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（五）

4.3蛭弧菌在自然水（或土壤）中的分布及数量调查我们自1979年以来先后7次在江苏、山东、北京和安徽等31个市、县258处共采水（泥）样325份,以El Tor霍乱弧菌、福氏志贺菌、副溶血弧菌、大肠杆菌为宿主菌进行检查,在任一宿主菌上出现噬菌斑者为阳性结果,共检出阳性254份（78.15%）。如样品中加宿主菌培养增殖后再以自来水宿主双层平板检查,则阳性率均有明显提高。     

噬菌蛭弧菌对草鱼池水质及细菌群落的影响

研究了噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)对草鱼池水质及细菌群落的影响.结果表明,噬菌蛭弧菌对养殖环境的主要水化指标具有明显的改善作用,试验组的平均COD、NH3-N、硫化物显著低于对照组(P<0.05),试验组的DO显著高于对照组(P<0.05),而试验组与对照组的pH值差异不显著(JP>0.05);池水细菌总数及致病菌的数量也随着噬菌蛭弧菌浓度的增加而发生儿何级数减少.     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（六）

5.1 蛭弧菌在灭菌湖水中对宿主菌的净化作用 蛭弧菌Bd81、Bd98在PH7．4～7．6的灭菌湖水中,对宿主福氏志贺菌有显著的清除作用,     

红假单胞菌培养噬菌蛭弧菌的研究

为探索环保型的噬菌蛭弧菌宿主菌菌种,本文用红假单胞菌作为宿主菌进行了培养噬菌蛭弧菌的研究,系统地探索了pH值、缓冲系及温度等环境因子对培养效果的影响。实验表明用红假单胞菌培养噬菌蛭弧菌,其环境影响因子、出斑时间、出斑数量、培养收获浓度等方面均与大肠杆菌无差异,最佳培养条件为25℃～30℃、pH值7．0～8．0、PBS缓冲系、并添加一定量的钙、镁离子,光合细菌中红假单胞菌可完全取代污染菌大肠杆菌培养噬菌蛭弧菌,生产环保型的蛭弧菌制剂,并简化了生产程序。并建立了蛭弧菌的培养采收标准,同时初步提出了一种简易的蛭弧菌浓度的计算方法——裂解系数计算法。     

3株噬菌蛭弧菌裂解特性及在水体中的应用研究

对从海水中分离的3株噬菌蛭弧菌Blb-1、Blb-2、Blb-3在不同条件下的裂解特性进行了初步研究,并进行了Blb-2裂解水体哈维氏弧菌的应用试验。结果表明,3株菌在盐度为0~30时均能良好生长,具有广盐性;3株菌对灭活后的宿主菌具有更强的裂解作用,形成噬菌斑的时间普遍提前,且噬菌斑较大;3株蛭弧菌的裂菌谱试验以及不同蛭弧菌菌龄的裂解效果试验表明,3株菌对气单胞菌属和弧菌属细菌均有很好的裂解能力,而对水产益生菌芽孢杆菌、乳酸菌等裂解能力很弱;应用试验表明,噬菌蛭弧菌对水体中的哈维氏弧菌具有较强的的清除能力。     

噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂在水生动物养殖上的应用(二)

2噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研究 2.1噬菌蛭弧菌微生物生态制剂 2.1．1蛭弧菌微生物生态制剂的研究概况严格地说，“微生态制剂”应叫“微生物生态制剂”。噬菌蛭弧菌微生物生态制剂符合国际通用的4大标准，即：（1）菌种标准：微生物生态制剂的生产菌种必须是正常微生物群的成员或其生长促进菌种；对这些菌种必须进行严格的分类、鉴定；这些菌种在自然生态环境中必须无毒、无害，原则上这些菌种来源于自然生态环境再回归于自然环境。（2）活菌数：微生物生态制剂的有效成分主要是活菌，而活菌的数目是质量控制的重要指标之一。（3）安全性：对宿主或动物模型原定位系统无毒无害，安全有效。（4）生态效应：具有某些特定的生态效应，如：生物拮抗效应、生长促进效应和防病治病效应。