一株溶磷抑病细菌的筛选及其溶磷特性

【目的】筛选一株兼具高效利用Ca3(PO4)2、磷矿粉和卵磷脂等难溶性磷源和抑制土传病害功能的菌株。【方法】液体培养条件下测定所筛菌株对Ca3(PO4)2、磷矿粉和卵磷脂的溶磷效果,平板对峙试验研究对土传病害的拮抗作用。【结果】通过室内平板和摇瓶试验,从江苏和安徽的5种石灰性土壤中分离、筛选获得的6株溶磷菌,均能溶解Ca3(PO4)2、磷矿粉和卵磷脂。其中,菌株P1溶解Ca3(PO4)2和卵磷脂的效果最好,培养7d后水溶性磷浓度分别达到674.5和33.0μg·mL-1,其对磷矿粉的溶磷量也达132.3μg·mL-1。经过16SrDNA基因序列分析和生理生化鉴定,菌株P1为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌。对峙试验结果表明,其对辣椒疫霉、大丽轮枝菌、烟草疫霉烟草变种和立枯丝核菌都有一定的拮抗作用。【结论】菌株P1不仅对Ca3(PO4)2、磷矿粉和卵磷脂有较好的溶解效果,对一些土传病害病原菌也有抑制作用。     

一株高效溶磷细菌的筛选鉴定及溶磷效果的研究

从石灰性土壤中分离筛选出一株高效溶磷细菌W05,通过形态观察和生理生化以及16sRNA对其进行了鉴定,确定此菌株属于假单胞菌属,将它培养7 d后,磷酸三钙、磷矿粉、磷酸铁和磷酸铝培养液中的磷含量分别为563.5、21.27、149.54、88.06 mg·L-1。将W05与鸡粪混合制成溶磷菌肥,盆栽油菜试验结果表明:溶磷菌肥显著提高土壤有效磷含量、磷酸酶活性、油菜产量与吸磷量;同时施用磷矿粉,各项指标均显著提高,比起单施菌肥处理,磷矿粉施入量为1 g·盆-1时,土壤有效磷含量、磷酸酶活性、油菜鲜重、干重、吸磷量分别增加了46.4%、7.1%、9.6%、9.7%、3.1%;磷矿粉施入量为2 g·盆-1与1 g·盆-1处理相比,上述指标分别增加了14.8%、2.5%、1.4%、22.0%、5.9%;但是,磷矿粉施入量为3 g·盆-1与2 g·盆-1的各项指标差异不显著。可见,将一定浓度磷矿粉与溶磷菌混合使用,可以提高磷矿粉有效性,增加土壤有效磷含量。     

两株溶磷黑曲霉的生长特性及对不同难溶性磷酸盐的溶解作用

通过发酵培养实验对ML2、ML4两株溶磷黑曲霉的生长特性及对不同难溶性磷酸盐底物的溶解作用进行了研究。绘制了溶磷曲线,产酸、残糖变化曲线,菌体生长曲线,同时,结果表明：两株曲霉对Ca,（PO4）2、CaHPO4、FePO4、ALPO4,均有较好的溶解作用,说明它们可以适用于不同的土壤。     

1株溶磷细菌的筛选及其溶磷物质分析

为了获得高效溶磷菌并了解其溶磷机制,从生活垃圾堆积地采集土样,筛选出10株对卵磷脂和磷酸钙均有溶解能力的菌株,通过液体摇瓶复筛,得到1株高效兼溶磷酸钙和卵磷脂的溶磷菌LY8,培养6d后2种难溶磷发酵液中水溶性磷质量浓度分别达到647.8 mg/L和26.6 mg/L.结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定其为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).在不同难溶性磷源条件下LY8分泌的主要溶磷物质不同,对于无机难溶磷磷酸钙,LY8菌株分泌的主要溶磷物质是有机酸,其次是磷酸酶;而对于有机难溶磷卵磷脂,LY8菌株分泌的主要溶磷物质是磷酸酶,且其分泌的有机酸、蛋白质和多糖可能也具有一定的溶磷效果.     

大豆根际溶磷菌分离鉴定及溶磷过程中有机酸的分泌

【目的】明确吉林省地区大豆Glycine max根际溶磷菌的种类及溶磷特点。【方法】利用溶磷圈法筛选溶磷菌,16S rDNA序列测定和Vitek2生理生化系统对菌株进行分析鉴定。测定菌株生长量、溶磷量、培养基pH变化与有机酸的产生。【结果】从大豆根际土壤中分离获得4株溶磷菌株WJ1、WJ3、WJ5和WJ6。4个菌株分别属于假单胞菌属Pseudomonas sp.、肠杆菌属Enterobacter sp.、苍白杆菌属Ochrobacterum sp.和克雷伯菌属Klebsiella sp.。4株溶磷菌96 h内最大溶磷量分别为558、478、596和586μg·m L-1。甲基红试验和培养物p H测定结果表明:4个菌株在溶磷过程中可使培养物的pH下降,当p H小于4时,会明显阻碍菌株的生长。p H为5时,WJ1和WJ3的生长受到轻微的影响,WJ5和WJ6能正常生长。GC-MS对菌株在溶磷过程中产生的有机化合物的分析表明,4菌株均分泌多种有机酸,其中α-酮戊二酸在WJ1、WJ3和WJ6菌株溶磷过程中大量产生。【结论】4菌株具有较好的溶磷能力,溶磷过程中分泌有机酸种类不完全相同,有机酸的分泌造成培养基的p H降低,影响菌体生长,而菌体数量决定各菌株的溶磷量。     

一株高效溶磷菌的条件优化及其促生特性研究

自湖泊沉积物中分离到1株高效溶磷细菌菌株1416X3,为提高土壤速效磷利用率及给合理开发微生物菌肥提供依据,通过菌落形态、生理生化特性及16S rRNA基因系统发育分析确定菌株分类地位,并对其溶磷条件进行优化,利用土壤溶磷试验及盆栽试验研究其在土壤中的溶磷过程及对植物的促生能力。结果表明,菌株1416X3为假单胞菌（Pseudomonas sp.）;溶磷最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为硫酸铵,最佳初始pH值为7.0,最佳接种量为1%,最佳发酵温度为28℃,溶磷量最高可达827.12 mg/L;菌株1416X3在菜地以及花圃土壤中均能有效定殖,且能明显增加土壤速效磷含量;盆栽接种菌株1416X3后,玉米株高、根长、茎粗、鲜质量、干质量、全磷分别较未接种的对照组提高了16.90%、114.02%、43.03%、80.28%、80.85%、88.99%,速效磷含量较对照提高了111.80%。综上,溶磷菌株1416X3可以有效提高土壤速效磷含量,促进玉米幼苗生长,具有较高的应用潜力。     

溶磷黑曲霉An510筛选鉴定及其溶磷机理

为了活化土壤磷库资源,解决磷肥大量使用所产生的面源污染问题,以鉴别培养基从玉米根际土壤中分离到1株溶磷真菌An510,结合形态特征和ITS序列比对的方法对其进行分类鉴定,从不同碳源和氮源的角度探究其对溶磷量和pH的影响,采用高效液相色谱法分析了其发酵液中有机酸含量的变化。结果表明:溶磷真菌An510为黑曲霉(Aspergillus niger)。优先利用葡萄糖和硫酸铵进行溶磷,最高可达1 366.50μg/mL,其发酵液中有机酸的种类和含量随培养时间的变化和营养基质的不同而不同;菌株An510可能通过产有机酸螯合发酵液中Ca²⁺,降低发酵液pH的方式溶磷。菌株An510具有较好的溶磷能力,在微生物肥料的开发方面具有潜在的应用价值。     

1株溶磷真菌的分离鉴定及溶磷特性分析

【目的】对从长春市农安县西盐碱地土壤样品中筛选出的溶磷能力强的菌株进行溶磷特性研究,为盐碱地改良提供菌种资源。【方法】以160份采自长春市农安县西的盐碱土为样品,利用NBRIP培养基对菌株进行筛选,对筛选出的菌种P1通过形态学特征、培养特征和ITSrDNA序列分析进行鉴定,分析该菌株溶解磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的能力,通过L25(54)正交试验,以溶磷量为考察指标,碳源、氮源、pH和磷酸钙为考察因素,分析该菌株培养的最优条件,最后分析了该菌株利用硝酸盐的能力。【结果】从160份供试土壤中分离出307株溶磷菌,其中菌株P1生长表现最好。经鉴定菌株P1为绳状青霉(Penicillium funiculosum),其96h能将9cm培养皿内的白色无机磷固体培养基溶解至完全透明;在NBRIP液体培养基中培养168h,溶磷量可达1 064.21μg/mL。菌株P1对磷酸铝和磷酸铁有较好的溶解能力,最高溶磷量为96.02和15.34μg/mL;在磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的培养液中,菌株P1的溶磷量与pH值呈显著负相关。以可溶性淀粉为碳源、蛋白胨为氮源、初始pH值为7、底物磷酸钙用量为10g/L时,培养菌株P1的溶磷效果最好,溶磷量达1 276.75μg/mL。此外,菌株P1对硝态氮也有一定的利用能力,在以硝酸钠、硝酸钾为唯一氮源的液体培养基中培养168h后,使硝态氮含量分别下降了92.90和196.79μg/mL。【结论】从盐碱土中筛选到1株对难溶性磷酸盐有较强溶解能力、对硝态氮有一定利用能力的绳状青霉P1菌株,其具有良好的应用前景。     

黄壤伯克氏溶磷细菌的筛选鉴定及溶磷特性

[目的]提高黄壤区土壤磷素有效性。[方法]通过PVK平板法从贵州黄壤分离出多株溶磷细菌。[结果]多次纯化得到14株溶磷能力大于395 mg·L~(-1)的菌株,其中菌株W4的溶磷能力为564.07 mg·L~(-1),显著高于其它菌株(P<0.05)。因此,选择W4作为试验菌株进行下一步黄壤溶磷细菌溶磷特性的研究。通过16S rRNA序列分析,确定W4为伯克氏菌属(Burkholderia sp);通过测定培养基成分含量对溶磷作用的影响,发现当培养液中葡萄糖浓度低于10 g·L~(-1)时,其含量显著影响W4的溶磷能力(P<0.05),当葡萄糖浓度大于10 g·L~(-1)时,其含量对W4的溶磷能力影响较小,培养液中葡萄糖浓度大于15 g·L~(-1)时,微生物活动产生的葡萄糖酸会增加进而对菌体有抑制作用;随着培养液中硫酸铵浓度的增加,W4的溶磷能力逐渐下降,而菌体生长则显著增加(P<0.05);W4以葡萄糖为碳源和硝酸钾为氮源溶磷能力最强,为640.10 mg·L~(-1);外加磷源对W4溶磷能力有一定的抑制作用。[结论]通过以上研究,有助于了解黄壤溶磷细菌的特性并为进一步应用提供理论基础。     

一株硝基还原假单胞菌的溶磷特性及对碳循环相关基因的影响

为提高黔中黄壤区农田土壤磷素的有效性,以从该地区筛选的1株具有溶磷能力的硝基还原假单胞菌(QHR-9)为试验菌株,通过室内摇瓶培养试验研究菌株的溶磷特性。设置对照、QHR-9、QHR-9+葡萄糖、QHR-9+组合糖类等4个处理,通过室外土壤培养试验研究菌株在土壤中的作用及对碳循环相关基因的影响。室内摇瓶培养试验结果表明,培养第7 d, QHR-9对磷酸三钙、磷酸铝、磷矿粉的溶解能力分别为645.82 mg/L、269.17 mg/L、272.45 mg/L; QHR-9在10种不同碳源条件下溶磷能力为28.06～645.82 mg/L,在10种组合碳源条件下的溶磷能力为92.31 mg/L。室外土壤培养试验结果表明,QHR-9可以显著增加土壤有效磷含量、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性、硝基还原假单胞菌丰度等,QHR-9+葡萄糖与QHR-9+组合糖类处理上述4项指标均高于QHR-9处理;土壤pH以QHR-9+葡萄糖处理最低,与QHR-9、QHR-9+组合糖类处理差异不显著;QHR-9处理微生物碳循环糖基转移酶(GT)和辅助活性酶(AA)基因相对丰度与对照相比降低,糖苷水解酶(GH)基因相对丰...     

耐盐溶磷菌PSB7的鉴定及其溶磷效果研究

通过形态特征、生理生化特征和16S r DNA序列分析对一株分离自黄河三角洲地区沾化冬枣根际土壤的菌株PSB7进行鉴定,并对其耐盐特性和溶磷效果进行测定,为其在提高盐碱化土壤磷素利用率方面的应用提供理论依据。结果表明,菌株PSB7为土壤杆菌(Agrobacterium sp.),在5~35 g/L的Na Cl液体培养基中生长良好。PSB7具有较强的溶磷能力,在改良蒙金娜无机磷液体培养基中培养7 d后,有效磷含量达72.26 mg/L,是无菌株对照的14.54倍。在含盐量0.45%的盐碱化土壤中添加PSB7,培养40 d,土壤中的有效磷含量由68.75 mg/L增加至96.60 mg/L,比未接菌对照增加了40.5%。菌株PSB7兼具耐盐和溶磷特性,在改善盐碱化土壤肥力方面具有很好的应用前景。     

高效溶磷菌株Bmp5筛选及活力和培养条件的研究

从不同地区的土壤样品中分离出11株微生物菌株，其中菌株Bmp5表现出较高的溶磷活力．对比研究发现，Bmp5对磷酸钙、磷酸铁、卵磷脂的溶解能力明显高于荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens As1．867，对磷酸氢钙的溶磷量是巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium As1．223的2．17倍．培养条件优化试验表明，Bmp5的适宜pH范围为5．5～8．0，最适碳源为草酸铵、甘油，最适氮源为草酸铵，最佳培养温度为35℃．金属离子Fe^3＋、Ca^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋对Bmp5解磷能力有一定的促进作用，而Cu^2＋、Ni^2＋则抑制其解磷．经鉴定，Bmp5为蜡状芽孢杆菌B．cereus．     

棉花根际硅酸盐细菌解钾机理的初步研究

对盐碱地棉花根际硅酸盐细菌进行了分离、纯化,从中筛选出5株菌株,在液体培养条件下测定了硅酸盐细菌的解钾能力,培养液中速效钾质量浓度在3.61～5.3 mg/L之间,其中K1菌株的速效钾质量浓度最高;测定培养液中有机酸,菌株均可分泌草酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸,草酸质量浓度最高达到41.01 μg/mL,酒石酸的质量浓度最高达到19.04 μg/mL,乙酸质量浓度最高达到17.91 μg/mL,柠檬酸质量浓度最高达到16.69 μg/mL.测定了培养液多糖的质量浓度在1.15～2.27 g/L,上清液中钾的质量浓度与多糖的质量浓度呈负相关;通过对5株硅酸盐细菌的氨基酸分析,分泌氨基酸的质量浓度在4.3～130.8 μg/L;菌株解钾特性与酸的产生有一定的相关性,培养液pH值下降到6.12～6.46,pH与培养液中速效钾含量表现出负相关.     

固态发酵中碳氮源对黑曲霉解磷效果的影响

为探讨固态发酵中不同碳氮源对黑曲霉解磷效果的影响,采用碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法,以磷酸三钙为磷源,葡萄糖、纤维素和淀粉为外加碳源,硫酸铵、尿素和硝酸钠为外加氮源,取试验筛选的1株黑曲霉为菌种进行试验。结果表明,在麸皮发酵中,加淀粉、纤维素的培养基发酵液中的有效磷含量相对无外加碳源的对照培养基有效磷含量可分别增加0.77、0.51g/kg。在稻壳发酵中,加淀粉、葡萄糖的发酵液中有效磷含量可分别增加26.32、15.23g/kg,分别增加了4.3、2.5倍;加硫酸铵、尿素的发酵液中有效磷含量略有减少,加硝酸钠的发酵液中有效磷含量可增加4.60g/kg。在玉米芯发酵中,加淀粉、葡萄糖的发酵液中有效磷含量分别可增加8.20、12.23g/kg;外加的氮源各组有效磷含量均有减少,其中加尿素可使有效磷含量减少10.70g/kg。     

一株曲霉Aspergillus 2TCiF2溶解磷矿粉的动态

研究了在液体纯培养条件下 ,磷矿粉用量对一株曲霉Aspergillus 2TCiF2菌株溶磷活性的影响及其动态变化。结果表明 ,磷矿粉的用量超过 2 0g·L-1时 ,溶磷量显著降低 (P <0 0 5 ) ,溶磷率由低于 2g·L-1时的 10 0 %降至5 0g·L-1时的 7%。磷矿粉的用量为 10g·L-1时 ,在培养初期菌体生长缓慢 ,第 3天才迅速生长 ,溶磷活性也急剧提高 ,第 14天后几乎没有溶磷活性 ,培养液的pH在第 3天开始下降 ,第 5天降至最低并维持在pH 4左右。培养过程中有机酸分泌也发生变化 ,前期主要分泌柠檬酸和乙酸 ,后期主要为乙酸和苹果酸     

脂肪酶产生菌黑曲霉ZW-1复合诱变育种研究

[目的]对脂肪酶产生菌黑曲霉ZW-1进行复合诱变育种研究。[方法]以脂肪酶产生菌黑曲霉ZW-1为出发菌株,通过紫外线、微波及硫酸二乙酯进行复合诱变得到变异株,对筛选出的变异株产生的脂肪酶活力进行测定。[结果]试验选育到1株脂肪酶产量较高的变异株8632;在适宜条件下,该菌株产生的脂肪酶活力达104.62 IU/ml,比出发菌株提高了125.86%;遗传稳定性试验表明该突变株具有良好的传代稳定性。[结论]该研究为满足脂肪酶在工业生产中的需求提供了科技支持。     

一株黑曲霉产纤维素酶的性质研究

[目的]为黑曲霉的实际应用提供依据。[方法]摇瓶培养黑曲霉得到纤维素酶粗酶液,测定C1酶、Cx酶、BG酶的活力,研究温度、pH值、底物浓度、金属离子对不同酶组分活力的影响。[结果]黑曲霉分泌的纤维素酶较全,但不同酶组分的分泌高峰并不一致。C1酶、BG酶的最适温度为60℃,Cx酶的最适温度为70℃。Cx酶、BG酶最适pH值4～5,C1酶最适pH值在4左右。C1酶、BG酶随底物浓度升高,活力升高,底物浓度为1.000%时活力最高。Cx酶在底物浓度为0.500%～0.625%时活力最高。Ca2+、Fe2+对酶有强烈的抑制作用,Ba2+、Mn2+对酶有一定的激活作用,Zn2+、Cu2+对Cx酶、C1酶活力有抑制作用,对BG酶有激活作用。[结论]不同反应条件对不同酶组分的活力影响各异。黑曲霉纤维素酶系在60～70℃、pH值4～5时最稳定。     

黑曲霉菌株TLSF2对水中Cu、Cd的吸附机理探讨

黑曲霉(Aspergillus niger)菌株TLSF2是1株新发现的耐重金属真菌,为深入了解该菌株对水中Cu、Cd的吸附机理,借助原子分光光度法,通过吸附试验探讨了菌体对Cu、Cd的吸附能力,用化学试剂逐步提取法分析了Cu、Cd在黑曲霉菌体中的化学形态及其Cu、Cd含量,采用差速离心法分离黑曲霉菌体的亚细胞结构并测定其各组分Cu、Cd含量,并对Cu、Cd处理后的黑曲霉菌株TLSF2的细胞壁进行了红外光谱分析。结果表明,Cd浓度保持50 mg/L条件下,Cu浓度为200 mg/L时,菌株TLSF2对Cu的吸附量最大,达到17.76 mg/g;Cu浓度保持200 mg/L条件下,Cd浓度为50 mg/L时,菌株TLSF2对Cd的吸附量最大,达5.19 mg/g,表明该菌株对Cu、Cd有很强的耐受性和富集能力。并且证实细胞壁是菌株TLSF2富集Cu、Cd的主要部位,Cu、Cd的化学形态均以氯化钠提取态为主。菌株TLSF2吸附Cu的化学基团主要涉及羧基、氨基和羟基等,吸附Cd的化学基团主要包括酰胺基、氨基、羧基、羟基以及磷酸基等。     

高效产果胶酶的黑曲霉菌种的诱变及筛选（摘要）

[目的]以原有保藏菌株经诱变并筛选出高产果胶酶的黑曲霉菌种。[方法]涂布平板法选取透明圈和菌落直径较大者作为出发菌株。采用紫外线进行菌种诱变,选择致死率在70%～80%范围内的诱变后菌株进行初筛和复筛。经透明圈检测和摇瓶发酵酶活检测确定其最高酶活和培养时间。[结果]D1-4菌种在适宜培养基中培养96h酶活性最高,达141.13U/ml,比出发菌株酶活提高了1倍。[结论]诱变菌株D1-4有较强分泌果胶酶的能力。     

一株解磷青霉菌在土壤中的定殖动态和解磷效果分析

【目的】以解磷菌Penicillium brocae为对象,研究其在土壤中的定殖动态和解磷效果,为菌剂的开发和应用提供参考。【方法】利用携带多种筛选标记的P.brocae转化子Z3开展土壤培育试验,结合筛选标记,通过平板计数法统计该菌在土壤中存活数量随时间的变化,同时分析土壤有效磷随时间的变化。【结果】绿色荧光(gfp)、潮霉素抗性(hph)及β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因在转化子Z3中均可正常表达,且转化子Z3和野生型菌株的生长曲线和解磷能力无显著差异。转化子Z3以1×10⁶ CFU/g接种土壤后,在定殖数量上随时间呈下降、上升和下降的总体趋势。接种后3周,转化子Z3的数量达到峰值4.3×10⁶ CFU/g,后期逐步下降并在接种后10周达到1.4×10³ CFU/g。土壤有效磷含量呈先升后降趋势,接种后6周达到峰值14.7 mg/L,较初始增加41.3%。接种7周后有效磷含量逐步下降,接种后10周降至12.7 mg/L,较初始值仍高出22.1%。对转化子Z3定殖数量和土壤有效磷数据的分析发现,有效磷含量上升期转化子Z3...