从胚乳培养再生三倍体柑桔植株

为了研究用胚乳培养获得无核水果和通过培养杂种胚乳探索作物育种新领域,我们研究了柑桔胚乳培养的条件。研究结果指出:(1)在MT培养基+2,4—D(2ppm)+BA(5ppm)+CH(1000ppm)上,可将发育到细胞时期的幼胚乳诱导成愈伤组织;(2)在2MT培养基+GA(2—15ppm)上,胚乳愈伤组织分化出各种发育阶段的胚状体,这些胚状体并能形成根、茎、叶和完整的小植株;(3)根尖染色体计数初步说明胚乳分化的根是三倍体(3n=27)。     

朱顶红‘Red Lion’胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以‘Red Lion’朱顶红(Hippeastrum vittatum)的鳞片为外植体进行体细胞胚诱导和形态学与组织学的胚性鉴定。结果表明,鳞片在MS+2 mg·L~(-1) BA+1 mg·L~(-1) NAA+2 mg·L~(-1) TDZ+30 g·L~(-1)蔗糖培养基上胚性愈伤组织诱导率可达90.63%,而不添加TDZ的培养基上胚性愈伤组织诱导率为0。胚性愈伤组织可呈白色松散、透明膨松、透明致密、微棕色松脆和翠绿色松脆等类型;非胚性愈伤组织呈微棕色致密状。胚性愈伤组织中可明显观察到球形胚、心形胚和棒状胚3个发育时期。体细胞胚在不添加植物生长调节剂的MS培养基上可发育形成芽和根,长成完整小植株。     

猕猴桃体细胞胚状体的诱导及植株再生

叶片及叶柄在NM+2,4—D_(0.5-2.0)+ZT_(0.2-2.0)+3％蔗糖及PH5.8的培养基上诱导产生胚性愈伤组织,并获得了分化胚状体及幼株的能力。胚性愈伤组织在NM+ZT_(0.5-2.0)+3％蔗糖培养基中分化胚状体,胚状体进一步发育并萌发成幼株。NM基本培养基适合壮苗培养。     

利用未成熟种子建立野生阿宽蕉胚性细胞悬浮系和植株再生的研究

以纵切的野生阿宽蕉60d龄未成熟种子为外植体,在MI1愈伤组织诱导培养基(MS大量和微量元素及铁盐+MorelandWetmore维生素+0.1mmol/LKH2PO4+87mmol/L蔗糖+4.5μmol/L2,4-D+1g/LGelrite)中培养60d后开始出现浅黄色松散的胚性愈伤组织,150d后愈伤组织诱导率为(15.11±1.95)%。该类愈伤组织被转移到含18μmol/L2,4-D的MI2培养基中继代60d后,可获得状态均一的理想的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织悬浮培养后,通过2个月的筛选和继代培养,可得到均质的胚性细胞悬浮系。理想的胚性愈伤组织在体细胞胚诱导培养基中培养10d后可见到白色半透明体细胞胚的发生,体细胞胚诱导率为7.70×105个/gFW。成熟体细胞胚的萌发率为(33.33±3.37)%,植株再生率为(20.83±1.68)%。     

黄皮胚培养研究

对黄皮[Clausenalansium(Lour.)Skeels.]3个品种(郁南无核黄皮、鸡心黄皮和甜黄皮)开花后10～60d的幼胚进行了离体培养。结果表明,在WPM+CH0.50g/L+PVP1g/L(或AC0.3%)+AgNO310mg/L+GA30.25mg/L+BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L上,花后10～23d的幼胚只形成愈伤组织,但以花后20d的幼胚愈伤组织形成率最高、褐化率低、生长较旺盛;花后30d的幼胚有11%～26%已能发育成苗,此后幼胚的成苗率随胚龄增加而升高,花后60d幼胚的成苗率在50%～73%。鸡心黄皮的愈伤组织诱导率最高,其次是甜黄皮,无核黄皮最低;无核黄皮愈伤组织褐化率最高,其次是鸡心黄皮,而甜黄皮的最低。在适宜的培养基(WPM+CH0.50g/L+AC0.3%+AgNO310mg/L+GA30.25mg/L+BA1.5mg/L+NAA或IBA1mg/L)上,黄皮愈伤组织能正常继代和增殖,生长调节剂是促进增殖的主要因素,但褐化、生长缓慢、很难分化仍是黄皮组织培养的主要难题。     

从山金柑试管实生苗直接诱导胚性愈伤组织的研究

山金柑(Forrunella hindisti Swingle)种子在MT培养基上培养50天,可从幼苗子叶下0.1—2.0厘米处产生胚性愈伤组织,并能在无激素的基本培养基中继代保存,仍有胚性再生能力。取自田间植株的种子,其试管苗产生胚性愈伤组织的频率为16.7％,显著地低于温室盆栽树种子试管苗愈伤组织的发生频率37.1％,不同年份之间这种频率没有显著差异。产生愈伤组织的实生苗高度只有未产生愈伤组织苗高的66.4％,叶片数也只有后者的1/3,将子叶以下0.5厘米的茎段在基本培养基上进行离体培养,38.5％的外植体产生了胚性愈伤组织。     

柑桔胚培养技术的研究Ⅰ,成熟种子胚的分离培养

为了排除柑桔多胚性对杂交育种的干扰,提高育种效率,进行了成熟种子胚的分离培养研究。证明:一、二级大胚采用普通砂培法,成苗率可达90%以上;在含有GA_3(1ppm)的MS培养基上,三、四级小胚成苗率为80%以上,五、六级小胚也有52.1%发育成苗,为提高杂种实生苗的获得率提供了有效途径。 进一步探讨了各种培养基添加物的生理效应,提出以IAA(1ppm)+CH(400ppm)替代GA_3(1ppm)具有更好的效果,培养的小苗生育健壮,根系发达,为入土成活打下了良好的基础。     

番木瓜体胚发生及植株再生研究

研究了外植体类型及培养基的不同激素配比等因素对番木瓜愈伤组织诱导和体胚发生的影响。结果表明,番木瓜的子叶和幼胚两种不同的外植体均能诱导愈伤组织、体胚发生和实现植株再生,但在愈伤组织诱导上存在差异,在MS+2,4-D1.00mg/L+BA0.30mg/L+NAA0.05mg/L培养基上诱导的愈伤组织较好。添加一定浓度的硫酸腺嘌呤(ADS)、水解酪蛋白(CH)可以促进番木瓜体胚发生,在生根培养基上生根后,可移栽成活。     

芹菜胚性愈伤的诱导及高频植株再生体系的建立

通过对芹菜离体培养过程中激素配比、基因型、不定芽产生等条件的研究,建立了芹菜高频植株再生体系。研究表明,芹菜苗期的下胚轴最适于诱导愈伤组织,其愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基是MS+2,4-D1.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1和MS+2,4-D0.5mg·L-1+BA0.2mg·L-1+CH500mg·L-1+4%甘露醇;基因型对愈伤组织和胚状体的诱导影响很大;60%以上的愈伤组织在继代培养基上可以从非胚性状态向半胚性和胚性状态转化。愈伤组织在1/2MS+1.5%蔗糖+CH500mg·L-1+KT0.25mg·L-1上获得不定芽或小试管苗;在无激素的MS或1/2MS固体培养基上继续培养不定芽或小试管苗,即可生根或长大,获得芹菜的完整再生植株。     

白檀未成熟胚的器官发生和植株再生（英文）

以白檀未成熟胚为试材,以改良MS为培养基,研究了白檀未成熟胚的器官发生和植株再生。结果表明:改良MS(mMS)能够很好的诱导愈伤组织,在添加了0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的培养基中,诱导率高达92.5%;胚性愈伤组织分化最佳培养基为mMS+0.25mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA,分化率为72.4%;分化出的胚性愈伤组织在空白mMS培养基上继代培养15d,76.6%的组织分化出芽,再转入1/2mMS+1.5%蔗糖培养基上培养20d,芽长至1.5cm。     

栽培番茄与秘鲁番茄种间杂种回交栽培番茄的研究

在广州地区,以‘粤农二号×Lycopersicon peruvianum,F_1’为父本与12个栽培番茄品种、品系及品种间杂种进行有性杂交,获得了大量杂交果。但果内种子大部份中空,仅有少量的种子含有发育不正常的胚,表现出高度的杂交不亲和性。通过采用胚培养方法及胚愈伤组织培养方法,获得了杂种后代植株。胚培养是采用修改的White培养基,得到2株生长较正常的试管苗。胚愈伤组织培养基是采用 MS(′62)基本培养基,附加不同剂量的 KT,BA和IAA。其中以MS+KT(2mg/L)+IAA(1～2mg/L)培养基对胚愈伤组织诱导效果明显。将培养在修改的White培养基上的萌动杂种胚取出切段,再接种在MS+KT(4 mg/L)+IAA(4 mg/L)培养基上,能诱导形成愈伤组织,并分化出不定芽和小苗。将小苗再接种在MS+NAA(0.2mg/L)培养基上,7天后即可出根。小苗移出试管后,栽培成活率可达85％。 用上述方法所得到的华南农大0719-1×(粤农二号×Lycopersicon peru-vianum,F_1)植株,自交可育,种子发育正常。以其与栽培番茄华南农大0718-3、0719-1、0720-1及0769-1再次回交,其杂交的亲和性比栽培番茄与(粤农二号×Lycopericon peruvianum,F_1)杂交的亲和性明显提高。     

香榧体细胞胚发生、发育的形态与细胞学观察

将香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)的未成熟合子胚置于SH+0.1 mg·L-1 NAA+500 mg·L-1AC+3%蔗糖+0.5 g·L-1 Gln培养基上暗培养45 d,诱导产生半透明颗粒状胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转入SH+20 g·L-1 PEG+10 mg·L-1 ABA培养基中暗培养3个月诱导体细胞胚。采用碘—碘化钾染色和石蜡切片技术对体胚起源、形态发育与细胞组织学进行了观察。结果表明:胚性愈伤组织起源于合子胚胚轴表皮或皮层细胞的对称分裂。胚性愈伤组织含有两类细胞,一种是细胞质浓厚、细胞核大、体积小的圆形胚性细胞,另一种是高度液泡化拉长的细胞。胚性愈伤组织包含由这两种细胞构成的原胚团Ⅰ、原胚团Ⅱ和原胚团Ⅲ,以及一些游离细胞。原胚团Ⅲ在无植物生长调节剂的SH基本培养基上形成原胚,原胚接入成熟培养基,历经球形、棒状、心形、鱼雷形胚后发育成子叶胚。将子叶胚转入萌发培养基后胚根伸长,胚芽发育长出针叶,形成完整的再生植株。同时在离体培养中合子胚胚柄处退化的裂生多胚也能重新发育形成胚体。在初生体胚发育过程中表面常伴有次生体细胞胚的形成。     

南丰蜜桔胚性愈伤组织的诱导

以南丰蜜桔"杨小—26"花药为外植体,培养诱导胚性愈伤组织。结果表明:在不同取材时期和培养基条件下,胚性愈伤组织发生率是不同的。南丰蜜桔花药培养的取材最佳时期是单核靠边期;培养基LP+TDZ3.0mg/L+A1.03.0mg/L+NAA1.0mg/L+10mg/LAgNO3较适于胚性愈伤组织再生,再生率高达20.3%;培养基配方中AgNO3对胚性愈伤组织再生无显著影响。本研究首次报道了南丰蜜桔花药离体培养,诱导出胚性愈伤组织。     

扁桃杧(Mangifera persiciformis)体胚发生及再生体系建立

以扁桃杧(Mangifera persiciformis Wu&Ming)未成熟珠心组织为外植体,建立体胚发生及再生体系,同时对幼苗进行茎尖染色体计数和胚根组织形态学观察。结果表明,在改良的B5基本培养基+2,4-D1.0mg·L-1+Gln400mg·L-1+6%蔗糖上培养4～5周后可诱导胚性愈伤组织分化。继代培养基与成熟培养基交替培养能有效降低胚性愈伤组织的褐化并保持旺盛的分化能力。培养3～4个月后,大部分体胚均能发育成熟,26.03%的体胚畸形。体胚在改良B5培养基+Gln400mg·L-1+4%蔗糖上的萌发率较低,仅为8.39%。次级体胚以直接体胚发生方式于萌发体胚的下胚轴产生。幼苗的生根不理想,生长极为缓慢;其茎尖染色体数目为2n=2x=40;胚根形态学上端内部维管组织解体,愈伤化,结构松散。     

香榧体细胞胚发生的研究

 以香榧胚为外植体进行体细胞胚的诱导, 在SH + 6-BA 0.1 mg/ L + 2,4-D 0.5 mg/ L 的培养基上愈伤组织诱导率可达到69.8 %; 愈伤组织经过数次继代后转移至1/ 2 SH + 6-BA 0.1 mg/ L + NAA 0.1mg/ L 培养基上可诱导体细胞胚的形成, 诱导率可达70.3 % , 体细胞胚在合适的培养基上可继续生长和增殖。这是国内外首次通过组织培养成功获得香榧体细胞胚的报道。     

氨基酸对荔枝愈伤组织增殖及体胚发生体系优化的研究北大核心CSCD

【目的】探究氨基酸对荔枝愈伤组织增殖及体胚诱导的影响。【方法】采用L9(34)正交设计,分别在妃子笑荔枝愈伤组织继代及体胚诱导阶段添加不同氨基酸,比较其对愈伤组织增殖及体胚诱导的影响。【结果】在愈伤组织增殖阶段培养基中添加氨基酸均显著提高愈伤组织增殖率,最优处理为基础继代培养基添加0.1 g·L^(-1)γ-氨基丁酸+0.2 g·L^(-1)谷氨酰胺,愈伤组织增殖率为初始接种量的14.04倍。与对照相比,氨基酸处理组的胚性愈伤组织淡黄,颗粒较小,细胞呈椭圆形,细胞质浓厚,多为正在分裂状态;非胚性愈伤组织浅白,水渍严重,着生于顶部或者边缘,易于剔除。在愈伤组织增殖阶段培养基中添加γ-氨基丁酸、谷氨酰胺和丙氨酸对后续的体胚发生及萌发影响极显著(p<0.01),最优配方为基础继代培养基添加0.3 g·L^(-1)γ-氨基丁酸+0.4 g·L^(-1)谷氨酰胺+0.05 g·L^(-1)丙氨酸,每克愈伤组织可获得461个体胚,77株组培苗。在体胚发生阶段培养基中添加氨基酸,获得的体胚发生及萌发最优配方为基础诱导培养基添加0.3 g·L^(-1)γ-氨基丁酸+0.4 g·L^(-1)谷氨酰胺+0.05 g·L^(-1)丙氨酸,每克愈伤组织可获得270个体胚,72株组培苗。【结论】氨基酸可调节愈伤组织胚性,提高愈伤组织增殖率,促进体胚发生及萌发。     

影响油桃叶片产生胚性愈伤组织的因素

以早熟油桃华光和曙光为试材,对影响早熟油桃叶片产生胚性愈伤的基本培养基、外源激素、碳源、环境(光照强度,温度,暗培养时间)等因素进行研究,结果表明:碳源对两种油桃叶片胚性愈伤的诱导影响不显著,其他影响因子对油桃叶片胚性愈伤的诱导均显著。其中华光和曙光在暗培养21d时,产生的有效愈伤较其他处理有极显著差异,有利于有效愈伤的产生;外源激素对诱导桃叶片产生胚性愈伤组织影响显著,NAA不是影响胚性愈伤产生的主效因子;基本培养基中,QL,1/2MS培养基有利于华光胚性愈伤的发育,QL,LP培养基有利于曙光胚性愈伤的发育;当温度在24￣27.5℃时,光照强度为2000lx,有利于胚性愈伤组织的诱导及生长;接种方式上,叶背横切,叶面贴于培养基表面的接种方法易产生胚性愈伤。实验中发现:叶背横切,叶面接于G+2.5mg/LBA+0.5mg/LIBA培养基上,暗培养21d,转入1/2MS+2.0mg/lTDZ+2.0mg/LBA+0.5mg/LNAA的培养基中,温度控制在24￣27.5℃,光照强度为2000lx时,愈伤组织发育良好,获得高频胚性愈伤,进一步分化产生8%的不定芽。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘椪柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养.其胚状体发生的百分率分别是:48.5%、21.2%、19.8%、6.4%;胚性愈伤组织则为:28.2%、13.5%、15.8%、5.8%.各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同.与品种胚数多少相一致.不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响.多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织.胚珠培养中,胚状体发生的方式,根据来源不同分为三种:第一种是由胚珠(或已黄的球形胚上)长出白色的胚性愈伤组织,继而产生胚状体:第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体;第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体.     

噻重氮苯基脲对贯叶金丝桃胚性愈伤诱导和分化的影响

系统研究了不同浓度噻重氮苯基脲(TDZ)对贯叶金丝桃胚性愈伤的诱导和植株再生的影响。结果表明:诱导胚性愈伤的最适外植体为叶柄,诱导率可达100%。在诱导胚性愈伤和分化的最适培养基MS+0.05mg/L TDZ+0.2mg/L NAA上,不定芽分化率为55%。第1代培养基上,愈伤增殖迅速,绿色的胚性细胞团数目从原来的单个生长提高为平均5.6个。经2、3代培养,愈伤停止生长,胚性细胞团数量逐渐减少。     

白檀未成熟胚的器官发生和植株再生

以白檀未成熟胚为试材,以改良MS为培养基,研究了白檀未成熟胚的器官发生和植株再生.结果表明:改良MS(mMS)能够很好的诱导愈伤组织,在添加了0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的培养基中,诱导率高达92.5％;胚性愈伤组织分化最佳培养基为mMS+0.25 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA,分化率为72.4％;分化出的胚性愈伤组织在空白mMS培养基上继代培养15 d,76.6％的组织分化出芽,再转入1/2mMS+ 1.5％蔗糖培养基上培养20 d,芽长至1.5 cm.