冷休克法诱导乌蒙山金线鲃三倍体及其生长分析

为了研究冷休克法诱导乌蒙山金线鲃(Sinocyclocheilus wumengshanensis)三倍体的方法,试验分析了不同参数的诱导效果及三倍体生长特征。结果显示：冷休克2～3℃、受精后5 min开始诱导、诱导25 min可获得受精率64.55%、孵化率60.61%、畸形率26.54%,三倍体率100%。诱导组平均孵化时间为4 d 14 h～6 d 19 h,低于对照组7 d 2 h。诱导组初孵仔鱼畸形率为17.19%～71.25%。受精后3 min与5 min开始诱导、持续诱导30 min,仔鱼死亡率最大分别为24.70%与39.38%。3～60日龄三倍体与二倍体的体重、体长均无显著性差异,180日龄三倍体的体长与体重分别为(74.00±1.58) mm、(4.46±0.30) g,分别是二倍体的1.09倍与1.27倍,体重显著大于二倍体。     

饥饿对泥鳅某些血液指标的影响

对体长9·7~12·0cm、平均体重8·3g的泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)在正常摄食和饥饿4~16d状态下的血液指标进行了测定。结果表明:随着饥饿时间的延长,红细胞数量呈下降趋势,在饥饿的第4d、8d、12d和16d,红细胞数量分别是正常摄食时数量的67·5%,63·0%、61·3%和60·5%,差异极显著(P<0·01);红细胞的体积变大,饥饿到第16d时,红细胞的长径和短径分别比正常摄食时增加了2·8%和13·0%;白细胞数量呈上升趋势,在饥饿的第4d、8d、12d和16d,白细胞数量分别是正常摄食时数量的114·3%、121·7%、137·1%和139·4%;白细胞的体积逐渐变小,饥饿到第16d时,其长径和短径分别是正常摄食时的88·2%和89·4%,差异显著(P<0·05);血红蛋白含量在前8d的饥饿中是下降的,之后出现上升;红细胞的脆性在饥饿前期有所下降,后期则维持在一定水平;红细胞的沉降率随着饥饿时间的延长而有所加快,差异不显著。     

冷休克法和静水压法人工诱导大黄鱼三倍体

同时采用冷休克法和静水压法进行大黄鱼（Pseudosciaena crocea Richardson）倍体诱导条件研究，同时比较适合条件下两种方法诱导效果差异以及大批量诱导组不同生长阶段三倍体榆出率的差别。结果表明：（1）冷休克法和静水压法都可成功诱导出大黄鱼二倍体。冷休克法适宜诱导条件为20℃培育水温下授精后3min，在3～4℃海水中处理8～10min；静水压法适宜诱导条件为同样培育水温下授精后3min，在静水压450kg／cm^2下处理3min。三倍体诱导率受处理时刻、处理时间和处理温度（或压力）3因素的影响。（2）综合三倍体诱导率、处理后受精卵原肠期存活率和仔鱼孵化率，静水压法诱导效果要明显优于冷休克法。（3）采用冷休克法进行大黄鱼三倍体大批量诱导，早期胚胎、初孵仔鱼和4月龄幼鱼三倍体检出率分别为34．03％、29．54％和14.81％。表明随生长发育诱导组三倍体检出率有下降趋势。     

冷、热休克法诱导黄颡鱼三倍体的比较研究

分别采用冷、热休克抑制第二极体释放的方法诱导黄颡鱼三倍体。结果表明,在卵受精后2min,5℃处理20min,胚胎时期的三倍体率达70%左右,孵化率50%左右,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为25%,此条件为冷休克处理的优化参数;在卵受精后2min,40℃处理2min,胚胎时期的三倍体诱导率达58%,孵化率为39%,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为40%,此条件为热休克处理的优化参数。正交分析得出,冷休克条件下起始休克时间是原肠期三倍化率和孵化率的重要影响因子,温度对畸形个体的产生有重要影响;热休克条件下,参考三倍体率、畸形率、孵化期相对存活率三者而言,休克温度均是重要因素。比较观察到冷休克处理组的胚胎受损情况严重,后期的成活率较热休克处理组要低,总体诱导效果逊于热休克处理组。     

冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体

为探索诱导鱼类雄核发育单倍体的新方法及形成机制,以大鳞副泥鳅为研究对象,无须卵子失活,仅用冷休克诱导雄核发育单倍体,并对其后代的早期胚胎发育、染色体数目、分裂胚细胞学观察等进行了系统分析。早期胚胎发育结果显示,0℃与3℃处理组的孵化率分别为0.83%和57.42%,二者之间孵化率差异显著(P0.05),0℃和3℃处理组均表现出单倍体综合征。染色体倍性鉴定结果显示,0℃处理组染色体分布为18~27,单倍体率为81.40%,3℃处理组染色体分布为20~30,单倍体率为68.97%。分裂胚细胞学观察结果显示,3℃处理组受精后60 min,卵核和第二极体位于胚表面,有一同释放迹象。结果表明,对大鳞副泥鳅受精卵进行3℃冷休克处理60 min,可以成功诱导雄核发育单倍体,研究推测冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育的细胞学机制是雌核和第二极体一同释放。     

5种洗发剂对泥鳅红细胞微核的影响

为探究低浓度污染物对环境和人类健康的危害,采用红细胞微核和核异常测试法研究了五种不同品牌、不同体积分数的洗发剂对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)红细胞微核的影响。结果显示,洗发剂所诱导的泥鳅红细胞微核率在品牌与体积分数上均存在极显著差异(P<0.01),而且与两者之间的交互作用有关(P<0.01)。试验表明目前常用的洗发剂大多具有致突变活性,尤其飘柔、舒蕾两种洗发剂致突变活性更强。     

泥鳅仔稚鱼发育期间消化酶及碱性磷酸酶比活力的变化

研究了泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)从孵化至30 DAH(日龄,Days after hatching)几种消化酶及碱性磷酸酶比活力的变化情况。胃蛋白酶直至30 DAH仍未检出活性。而胰蛋白酶表现出较高的比活力,其比活力在初次摄食之后显著上升,6 DAH达到最大值之后开始显著降低(P<0.05)。脂肪酶与淀粉酶的变化模式相似,在内源性营养向外源性营养转变及仔鱼向稚鱼转变这两个时间段出现两个高峰值。碱性磷酸酶比活力在2-6 DAH显著上升(P<0.05),之后开始下降并趋于平稳。研究表明,泥鳅在仔稚鱼阶段只具有结构性的胃而缺乏分泌细胞的分化。2-6 DAH是泥鳅仔鱼肠道功能迅速发育的阶段,也是向成鱼消化模式转变的一个重要过程。脂肪酶和淀粉酶比活力的持续性表明了泥鳅仔鱼对糖类和脂肪有较好的利用能力。     

热休克诱导全雌虹鳟三倍体

以虹鳟二倍体的伪雄鱼为父本（遗传型为xx），探讨了采用热休克方法阻止第二极体排放诱导全雌虹鳟三倍体的适宜条件。结果表明：虹鳟三倍体诱导率明显受处理温度、起始时间以及持续时间等因子的影响。在孵化水温为6．5℃，卵子受精后20min经26℃热处理20min，孵化率为64．62％，三倍体诱导率为86．67％；卵子受精后lOmin经26℃热处理20min，三倍体诱导率为100％，但孵化率仅为3．87％。受精卵经26℃处理的诱导效果好于24℃和28℃的（P〈0．01）。     

热休克诱导马苏大麻哈鱼三倍体的初步研究

为探索马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)三倍体育种技术方法,更好地解决其个体小、生长慢和性成熟后死亡率高等问题,采用热休克法进行三倍体诱导实验,设4个诱导温度(24、26、28、30℃),2个起始诱导时间(15 min、20 min)和2个持续诱导时间(15 min、20 min)共分13个实验组和1个对照组。结果显示,13个实验组均能诱导出三倍体个体,而不同温度组的诱导率差异显著,分别为13.3%、31.65%、52.28%和78.81%(P<0.0.5)。随着温度的上升,孵化率呈显著降低的趋势。结果表明,温度是影响诱导成功的关键因素,利用热休克诱导受精卵制备陆封型马苏大麻哈鱼三倍体苗种的方法是可行的,三倍体诱导的最佳条件是:水温28℃,卵子受精后15 min持续处理20 min,发眼率(72.57±0.26)%,孵化率(60.92±0.31)%,三倍体率53.1%,综合诱导效果最佳。     

乙草胺对泥鳅肝脏乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽硫转移酶的影响

用急性染毒法研究了5种不同浓度、不同处理时间的乙草胺对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)肝脏乙酰胆碱酯酶(AChE)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性的影响。结果表明,不同浓度的乙草胺处理对泥鳅肝脏中AChE均起抑制作用。低浓度的乙草胺处理对泥鳅肝脏中GST活性起诱导作用,而高浓度则起抑制作用。     

Accelerated Growth, Gigantism and Likely Sterility in Autotransgenic Triploid Mud Loach Misgurnus mizolepis

Triploidy was induced in two selected lines of autotransgenic mud Ioach Misgurnus mizolepis containing no heterospecific genetic material. Cytological evaluations, including cellular DNA content, chromosome count, and erythrocyte measurement, proved the successful induction of triploidy. Patterns of Southern blot hybridization and tissue distribution of GH mRNA in autotransgenic triploids were similar to those of diploid autotransgenics. The autotransgenic triploids also displayed growth acceleration 22–25 times that of nontransgenic diploids, although the acceleration was relatively modest when compared to their diploid transgenic counterparts (more than a 30-fold increase). Significantly improved feed conversion was observed in both autotransgenic diploids and triploids, ranging from 1.8 to 2.0 times that in nontransgenics. Autotransgenic triploids were sterile at gonadal level, evidenced by significantly retarded and abnormal gametogenesis. With the persistence of accelerated growth and enhanced feed conversion efficiency, the autotransgenic triploid mud loach may offer economic benefits to aquaculture. Total absence of heterospecific genetic material and sterility may also allay public concern regarding food safety and environmental risk of crossbreeding between transgenics and conspecific populations.     

鱼种池套养泥鳅试验

选择0．48hm^2的1号塘为试验池塘，0．53hm^2的2号塘为对照塘，进行鱼种池套养泥鳅养殖试验。养殖9～10个月，1号塘总产2795kg，其中泥鳅770kg，总收入21942元。折合45712元／hm^2，纯收人15962元，折合33255元／hm^2；2号塘总产2424kg，总收入16713元，折合31348元／hm^2，纯收人10606元。折合19875元／hm^2。池塘常规养殖套养泥鳅可增加渔业产量，提高经济效益。     

对苯二胺对泥鳅酯酶同工酶谱的影响

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,在水温23～25℃条件下,研究了对苯二胺对泥鳅(体质量25.20～28.06g)4种组织及血清中酯酶同工酶表达的影响。试验结果表明,4种组织及血清酯酶同工酶的表达差异性明显,活性强弱依次为:肝胰脏﹥脾脏﹥血清﹥心脏﹥鳃。经不同剂量对苯二胺处理后,未发现剂量梯度与酯酶同工酶表达的正相关变化。在不同时间处理条件下,组织及血清酯酶表达先强后弱,72h达到最弱,96h略有增强,表现了明显的差异性和应激性。     

泥鳅食性的初步研究

研究结果表明,泥鳅是偏动物食性的杂食性鱼,生活环境中食物易得性和喜好性是影响其食物组成的重要因素。泥鳅对环境有极强的适应能力。     

泥鳅不同组织同工酶的特异性表达分析

应用垂直平板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究了泥鳅成体的心脏、肝胰脏、肾脏、鳃、肌肉5种组织中酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶同工酶的表达情况。试验结果表明,泥鳅3种同工酶在肝胰脏中表达活性较高。酯酶同工酶在5种组织中均大量存在,且条带较多;过氧化物酶在肾脏中表达较强,肌肉中表达最弱;过氧化氢酶在鳃、肌肉组织中表达不强,且条带较少,不利于分析,但其表达差异性明显。     

4月龄泥鳅形态性状对体重的影响分析

随机选取305尾不同家系的4月龄泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus),测量其体重、全长、体长、头长、体高、尾柄高、尾柄长和体厚共8个性状指标。采用相关分析和通径分析方法,分别计算泥鳅各形态性状对体重的相关系数、通径系数和决定系数,揭示影响4月龄泥鳅体重的主要形态性状。结果表明,各形态性状与体重的相关系数均达到极显著水平(P<0.01)。全长、体高、头长是直接影响体重的重要指标;其中,全长对体重的直接影响最大(0.548),对体重的决定程度最高(0.3003),其他性状对体重的直接作用较小,主要通过全长间接地影响体重。通过逐步多元回归分析,经偏回归系数显著性检验,以全长(X1)、头长(X2)、体高(X3)、尾柄高(X4)和尾柄长(X5)建立最优多元回归方程为Y=-4.515+0.255X1+1.744X2+1.966X3+1.422X4+0.511X5。在泥鳅选育实际操作中,可以通过该方程对泥鳅体重进行预测和控制,主要用泥鳅全长指标进行选择,以达到间接选育体重、优化其生长性能的目的。     

泥鳅养殖水体中一株芽孢杆菌的筛选及其净水效果研究

从泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）养殖池塘水体中分离到4株芽孢杆菌,筛选后获得1株优势目的菌株NQ1;根据形态学特征和生理生化特性结果,将其鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。安全性试验证实,试验浓度（最高为1×107 cfu/mL）的枯草芽孢杆菌NQ1对泥鳅是安全的。水质净化试验结果显示,在泥鳅养殖水体中加入1×107 cfu/mL浓度的NQ1,14天后氨氮和亚硝酸盐含量较对照组分别降低34.97%和89.46%,表明该菌的净水效果明显,具有作为水质改良微生态制剂开发应用的潜力。     

泥鳅规模人工繁殖试验

2000年6月19日25日对泥鳅的繁殖季节、雌雄配比、注射方法、催产激素剂量、人工鱼巢的设置、苗种培育进行了研究，人工繁殖试验共催产亲鱼5批299组，产卵20万粒，出苗14万尾左右。