规模猪场伪狂犬弱毒疫苗滴鼻免疫的效果

伪狂犬病毒(PRV)在我国猪群中流行广、危害大,伪狂犬病的净化势在必行。对浙江省3家猪场的仔猪进行伪狂犬弱毒疫苗滴鼻免疫试验,并根据gB和gE抗体检测结果调整其免疫程序。结果表明,阳性猪场滴鼻加肌注程序免疫后,在90,120,175日龄gE阳性率分别由69.57%,0%,100.00%降低至41.70%,29.20%和20.80%;阴性和弱阳性猪场2种免疫程序的抗体阳性率变化不显著。研究结果说明滴鼻加肌注的免疫策略优于单独的肌注免疫,在PRV阳性猪场采用滴鼻免疫能阻断PRV的早期感染,保护仔猪不受PRV野毒侵害。     

三肽囊素(Bursin)模拟肽阳性噬菌体对新城疫疫苗免疫效果的影响

研究了两个噬菌体展示三肽囊素模拟肽阳性噬菌体的活性。将100羽1日龄罗曼鸡随机分成5组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),每组20羽,在2日龄时,Ⅰ组注射4号阳性噬菌体(滴度为211),Ⅱ组注射6号阳性噬菌体(滴度为211),Ⅲ组注射6号阳性噬菌体(滴度为29),Ⅳ组注射一定剂量的Bursin,Ⅴ组为TBS对照组,在8日龄时接种新城疫(ND)Ⅳ系苗,以后每隔1周采用微量血凝抑制试验和MTT法测定各组的免疫效应。结果表明:阳性克隆(4号和6号)与Bursin在动物试验上具有相似的免疫增强作用,能提高体液免疫水平,对细胞免疫也有提高,且这种促进作用的大小与所用噬菌体滴度有关。     

囊素三肽研究进展

三肽是指由 3个氨基酸组成肽类物质 ,尤其以谷胱甘肽为代表 ,已受到医学界的高度重视。研究表明三肽在增强机体免疫功能、提高免疫力方面具有显著的作用。现有研究表明 ,有些三肽能杀灭某些肿瘤细胞和某些病原微生物如ＡＩＤＳＶ ,促进单核巨噬细胞系统的吞噬作用 ,可用于免疫治疗。囊素三肽 (ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅｏｆｂｕｒｓｉｎ)是存在于禽法氏囊中的一种生物活性物质 ,具有独特组成结构 ,现已基本证实其与免疫功能有密切的关系 ,引起国内外学者的关注。1　囊素三肽的发现自 162 1年ＨｉｅｒｏｎｙｍｕｓＦａｂｒｉｃｉｕｓ发现法氏囊(…     

三肽囊素免疫组化在鸭免疫器官中定位的发育学观察

以抗Bursin单抗(2F9—4／HU2)，用免疫组化法，检测Bursin在鸭NH及1—12周龄不同免疫器官中定位分布，结果表明：NH期BF、Th、Sp及LN弱阳性，HG为阴性。1～12周龄内，各免疫器官阳性结果，变化不星同步关系，其中BF以4周龄为典型，髓质内周缘阳性细胞层、FAE及FAESE为阳性、髓质中央阳性细胞稀少及IFSE中团簇状阳性细胞散在性分布，其余周龄期虽有相似情况，但相对阳性强度较弱。另外，12周龄时IFSE中仍有多量团簇状较强阳性细胞分布。Th以6、10、11周龄表现为强阳性细胞相对集中于髓质中类似于Hassall小体的区域，1周龄时阳性细胞较高密度弥散于髓质中，其余周龄阳性分布不典型。Sp以6、10、11周龄表现为强阳性细胞相对集中于髓质中类似于Hassall小体的区域，8周龄时阳性细胞较高密度弥散于髓质中，其余周龄阳性分布不典型。Sp以7～11周龄阳性细胞弥散分布于GC中，1～6周龄阳性细胞无特征性散在分布，12周龄时阳性细胞有呈团块状倾向。HG则1周龄为阴性，2—5周龄阳性细胞呈团块状散在于腺泡、腺管基底膜中，6—12周龄阳性细胞则无呈团块状表现。LN则1—2周龄弱阳性，3—12周龄强阳性细胞密布于淋巴小结中，除淋巴小结外，有的阳性细胞散在淋巴细胞聚集区或淋巴组织索中。     

猪不同口蹄疫疫苗免疫效果观察

目的:评价市场上4家企业生产的猪用口蹄疫O型油佐剂灭活苗的免疫效果。方法:选择40～45日龄苗猪80头用于试验(公母各40头),45日龄进行首免,1mL/头;间隔25～30d进行二免,1mL/头。首免后25d、二免后45d和二免后90d采血分离血清,采用正向间接血凝实验检测O型口蹄疫抗体水平。结果:首免后25d,ZJ组、NY组、TD组抗体水平均显著高于免疫前(P<0.05),并达到峰值,其中TD组抗体水平最高,HC组抗体水平最低且显著低于免疫前(P<0.05);二免后45d,TD组、NY组、HC组抗体水平与首免后25d相比均有显著提高(P<0.05),TD组抗体水平仍然最,最低的仍为HC组。二免后90d,各组口蹄疫抗体水平均有下降,与二免后45d的抗体水平相比差异极显著(P<0.01)。除HC组外,TD组、ZJ组、HY组抗体水平仍高于免疫前,差异不显著(P>0.05)。结论:TD抗体水平最好,持续时间最长,其免疫效果最好;ZJ和HY效果较好,达到国家标准;HC抗体水平低,未达标。     

法氏囊提取物中囊素三肽含量的测定

囊素三肽(Bursin,BS)是法氏囊组织提取物(相对分子量为1000以下)中重要的生物活性物质,能促进禽类和哺乳动物B细胞的分化发育及免疫器官的成熟,天然和人工合成的囊素三肽均可诱导哺乳动物淋巴细胞分化,且细胞内cAMP和cGMP能伴随诱导过程的发生而升高。高奋     

3种免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免疫效果评价

【目的】评价盐酸左旋咪唑(LH)、刀豆素(ConA)和胞壁酰二肽(MDP)3种免疫增强剂对猪伪狂犬病毒(PRV)灭活疫苗的免疫增强作用。【方法】将免疫增强剂混入灭活的PRV水相,和油相乳化后制成相应含有免疫增强剂的灭活疫苗,使各免疫增强剂终剂量为:LH 7.5 mg·mL~(–1)、ConA 25.0 mg·mL~(–1)、MDP 150.0 mg·mL~(–1)。首次免疫后14 d进行二次免疫,首次免疫后14 d、二次免疫后7和14 d采取小鼠血清,检测相关的细胞因子和特异性抗体水平,并在二次免疫后14 d攻毒,计算最终的攻毒保护率。【结果】相对于白油组,ConA组和MDP组在二次免疫后14 d对小鼠白介素2(IL-2)含量提升效果极显著;LH组在首次免疫后14 d、MDP组在二次免疫后14 d对白介素4(IL-4)含量提升效果显著;3种免疫增强剂分别在二次免疫后14和7 d对干扰素(IFN-γ)和特异性抗体含量提升效果极显著,并提高了攻毒保护率,LH组和ConA组存活率为20%,MDP组存活率为60%。【结论】3种免疫增强剂使用试验剂量均能不同程度地提升猪伪狂犬灭活疫苗的免疫效果,具有较好的应用前景。本研究结果为后续复合免疫增强剂筛选打下了基础。     

国产与法国产两种狂犬疫苗免疫效果的比较

国产与法国产两种狂犬疫苗免疫效果的比较林树明，麦适丰（广东省湛江市卫生防疫站，湛江５２４０３７）八十年代初，我国成功研制原代地鼠肾细胞制备的狂犬疫苗（ＰＨＫＶ）以来，疫苗的抗原量低［１］，免疫效果差。近年国内生产了浓缩的狂犬疫苗，为检测其免疫效果，我...     

乳酸杆菌和囊素三肽对肉鸡生产性能、血清生化指标及免疫功能的影响

为研究乳酸杆菌和囊素三肽对肉鸡生产性能、血清生化指标及免疫功能的影响,采用日粮中添加乳酸杆菌和肌肉注射囊素三肽的方法,将156只1日龄肉鸡随机分为4个组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为囊素三肽组,Ⅲ组为乳酸杆菌组,Ⅳ组为囊素三肽+乳酸杆菌组,试验期为42d。结果显示:1)21日龄,乳酸杆菌和囊素三肽显著增加了肉鸡平均日增重,降低了料重比(P0.05);2)42日龄,乳酸杆菌和囊素三肽显著降低了血清甘油三酯浓度(P0.05);3)42日龄,乳酸杆菌和囊素三肽显著促进外周血T淋巴细胞增值转化(P0.05),囊素三肽的注射显著提高了饲喂添加乳酸杆菌日粮的肉鸡血清总免疫球蛋白G含量(P0.05)。综上所述,日粮中添加乳酸杆菌和肌肉注射囊素三肽在一定程度上能改善肉鸡生产性能,显著提高免疫功能。     

2014-2016年河南省猪伪狂犬野毒感染和免疫情况血清学调查

调查河南省猪群伪狂犬野毒感染流行情况,为制订合理的防控与净化策略提供参考依据.于2014年1月-2016年5月,采集河南省不同地域780个猪场16 200份血清样本,使用gE-ELISA鉴别诊断方法进行血清学调查,对10个阳性稳定猪场和10个阳性发病猪场进行血清学分析,对2个后备母猪培育场(1个为阴性场,另1个为阳性场)进行生产成绩分析,同时对猪场伪狂犬gE基因缺失疫苗使用情况进行调查,并跟踪了40个猪场的疫苗免疫情况.结果显示,河南省猪场伪狂犬gE抗体阳性率90.0％,血清样本阳性率46.2％,成年种猪阳性率53.1％,后备种猪阳性率27.6％.猪群在阳性发病场的阳性率高于在阳性稳定场的阳性率,育肥猪感染带毒严重影响其生产成绩,猪场伪狂犬疫苗免疫强度呈现增加趋势.综上可知,目前河南省猪群伪狂犬野毒感染情况比较严重.     

Research and development of a novel subunit vaccine for the currently circulating pseudorabies virus variant in China

Pseudorabies (PR) is a devastating viral disease which leads to fatal encephalitis and respiratory disorders in pigs. Commercial gE-deleted live pseudorabies virus (PRV) vaccine has been widely used to control this disease in China. However, the new-emerging variants of PRV compromises the protection provided by current vaccines and lead to the outbreak of PR in vaccinated pig herds. Several killed and live vaccine candidates based on current PRV variants have been reported to be effective to control the disease. A subunit vaccine based on gB protein, one major PRV glycoprotein which elicits strong humoral and cellular immune responses, however, was never evaluated for protection against the current circulating PRV variants. In this study, full-length PRV gB protein was successfully expressed in baculovirus/insect cells in the soluble format and was tested on 3-week-old piglets as a subunit vaccine. Compared with unvaccinated pigs, the gB-vaccinated pigs developed specific antibody-mediated responses and were protected from the virulent PRV HN1201 challenge. All vaccinated pigs survived without showing any PRV-specific respiratory and neurological signs, but all unvaccinated pigs died within 7 days after HN1201 challenge. Hence, this novel gB-based vaccine could be applied as an effective subunit vaccine to control PRV variant in China.     

囊素肽对禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响

为研究囊素肽对禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响,将200只鸡分为疫苗组、疫苗+囊素组、囊素组和对照组,每组50只。从13日龄起每7 d测定其法氏囊指数、禽流感(H9)HI抗体水平。结果表明：囊素肽能提高禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫后的抗体水平,并延长高水平抗体的维持期,能显著地促进法氏囊的生长发育。     

不同剂量CpG序列对仔猪的免疫增强效果

以伪狂犬病毒为模式病毒,按照仔猪体质量分别将100、10、1μg/kg CpG序列同猪伪狂犬疫苗联合免疫接种仔猪,检测仔猪的体液及细胞免疫反应．试验结果表明：不同浓度的CpG序列均能显著提高仔猪的特异性抗体滴度、白细胞介素(IL)-2诱生活性以及淋巴细胞增殖反应,证明CpG序列能显著增强仔猪对常规疫苗的免疫应答能力。     

猪O型口蹄疫病毒抗原表位/VP1蛋白的融合表达及免疫原性研究

目的 获得可稳定表达猪O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)抗原表位融合结构蛋白VP1的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO-K1),制备亚单位疫苗。方法 设计合成含FMDV抗原表位与VP1基因序列的重组基因RP1,将其克隆到表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro中,将构建的重组质粒与辅助质粒PLP1、PLP2和PLP3共转染HEK-293T细胞,获得重组慢病毒HIV-RP1;将收获的病毒液感染CHO-K1细胞,经筛选获得单克隆细胞株,通过间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定,获得可表达RP1的阳性细胞株,命名为CHO-K1-RP1;将CHO-K1-RP1连续传30代,每隔5代收获相同数量的细胞样品进行Western blot鉴定。结果 IFA结果显示,表达RP1的细胞发出绿色荧光,而空白对照无绿色荧光;Western blot结果显示,在约55 kU处能观察到清晰的条带;表明成功获得了融合蛋白。将获得的融合蛋白与佐剂等体积混合制备成亚单位疫苗免疫BALB/c雌鼠,抗体检测结果显示,二次免疫后,该亚单位疫苗组与口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)商品化灭活疫苗组小鼠之间抗体水平无显著差异,两者抗体水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论 本研究构建的亚单位疫苗能有效刺激小鼠机体产生免疫应答反应,为猪口蹄疫新型疫苗的研制提供了参考。     

猪口蹄疫病毒对三种动物细胞嗜性的研究

将猪FMDV毒株(O/GD/MSH/86)分别适应牛肾细胞(Bovinekidney,MD-BK)、幼仓鼠肾细胞(Babyhamsterkidney,BHK-21)和猪肾细胞(Porcinekidney,PK-15),研究了FMDV在宿主细胞上的嗜性。结果发现,该毒株在MD-BK细胞上不产生细胞病变(CPE),从细胞液中也未检测到病毒,而在BHK-21和PK-15细胞上能够稳定产生CPE。可见,猪FMDVO/GD/MSH/86毒株不能在MD-BK细胞上增殖,而在BHK-21和PK-15细胞上则增殖较好。     

液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的部分阴性血清进行了验证试验.结果显示:利用Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法筛选的阴性动物,在免疫和攻毒后,血清抗体水平显著升高,表明该法可完全用于口蹄疫阴性动物筛选及口蹄疫病毒抗体水平的检测.     

三肽囊素Bursin对鸭疫里氏杆菌病灭活苗免疫效果的影响

选择240枚静脉清晰的13日龄樱桃谷鸭胚,随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ共4组,每组60枚,第Ⅰ组为生理盐水对照组,第Ⅱ组为低浓度(10^-6μg／mL)Bursin组,;第三组为中浓度(10^-3μg／mL)组,第四组为高浓度(10^-2μg／mL)组,皆于13日胚龄时分别静注生理盐水和不同浓度Bursin各0．1mL／胚。以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组鸭出壳后0、14、21、30、36、42日龄时的鸭疫里氏杆菌抗体效价。结果表明,低浓度Bursin对鸭疫里氏杆菌抗体的产生有较强的促进作用,而中、高剂量Bursin反而有一定的阻抑效应。     

猪圆环病毒2型减少猪肺泡巨噬细胞中伪狂犬病疫苗载量和CD80-CD86基因转录

[目的]探明猪圆环病毒2型(PCV2)干扰伪狂犬病疫苗(PRV)免疫效果的可能机制.[方法]用PCV2与PRV在体外分别单接种和共接种仔猪肺泡巨噬细胞(AM),在接种后不同时间用荧光定量PCR技术检测PRV载量与共刺激分子CD80-CD86 mRNA水平的动态变化.[结果]PRV组上清中PRV载量在接种后都显著(P＜0.05)高于PCV2+ PRV组.与对照组相比,在接种后48 h内,PRV组CD80 mRNA水平在接种后增加并在48 h时达到显著水平,而PCV2组与PCV2+ PRV组的CD80 mRNA水平都显著减少;在接种后48 h内,CD86 mRNA水平在PRV组都显著增加,在PCV2+ PRV组则都显著减少,但在PCV2组仅在接种后48 h显著减少.[结论]PCV2能够减少猪AM中PRV载量与CD80-CD86基因转录,这可能是PCV2抑制PRV免疫效果的机制之一.