人脂蛋白(a)与金黄色葡萄球菌重组α-烯醇化酶的相互作用

表面α-烯醇化酶(Eno)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)重要纤溶酶原受体(Plr),其C端Lys残基是与纤溶酶原(Plg)Kringle结构域(K或K结构域)结合位点之一。人脂蛋白(a)(Lp(a))是由一分子载脂蛋白(a)(apo(a))和一分子低密度脂蛋白(LDL)通过二硫键结合构成,apo(a)上的K结构域与Plg的K结构域具有高度同源性,都有赖氨酸结合位点(LBS)。Apo(a)的KIV_(10)是主要的LBS。因此假设,Lp(a)也可能与Eno结合,从而竞争性抑制Eno与Plg的结合。本文为研究Lp(a)与Eno的相互作用机制,在大肠杆菌中重组表达了Eno(rEno)及敲除C末端Lys残基(第434个氨基酸残基)的Eno(rEno△434)和apo(a)的KIV_(10)结构域(rKIV_(10));用酶联免疫吸附试验(ELISA)和亲和色谱层析(Pull down)对rEno、rEno△434与Plg、Lp(a)、LDL、rKIV_(10)的相互作用机制进行了研究。结果表明,rEno与Plg、Lp(a)、rKIV_(10)呈特异性结合,一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)能够抑制它们的结合,证明Lp(a)与rEno也是通过LBS结合;rEno不与LDL结合,证明Lp(a)是通过apo(a)与rEno结合;rEno△434与Plg和Lp(a)的结合有明显降低,证明rEno的C端Lys残基是与Lp(a)结合的位点之一。     

重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是A群链球菌(group A Streptococcus,GAS)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,其C末端的赖氨酸残基可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合.脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apu(a)]与Plg有很高的同源性.因此本实验室提出了Lp(a)可能与GA...     

慢性肾功能不全不同损害期患者血清脂蛋白(α)水平的检测及血液透析对其水平的影响

目的 :观察慢性肾功能不全 (CRI)不同损害期患者血清脂蛋白 (α) [L p(α) ]水平和临床意义以及血液透析 (HD)对其水平的影响。方法 :采用单克隆抗体浊度法测定了 2 2 9例 CRI患者和 96例健康人的血清 (Lp(α)水平 ;对肾功能损害不同期的 Lp(α)水平作比较 ,并与血肌酐 (Scr)水平做相关分析 ;比较非 HD组及维持 HD组的 L p(α)水平。结果 :CRI患者肾功能衰竭期、尿毒症期 L p(α)水平显著高于正常对照组 (分别为 P<0 .0 1 ,P<0 .0 0 1 ) ,血清 Lp(α)水平与 Scr呈中度正相关 (r=0 .54,P<0 .0 1 ) ,HD组较非 HD组 Lp(α)水平增高明显 ,差异有显著性 (P<0 .0 1 )。结论 :CRF患者随着肾功能损害的加重 ,血清 Lp(α)水平增高 ,HD可使其进一步增高。     

斑马鱼Tph1a蛋白表达、纯化及对脂代谢基因的影响

对斑马鱼色氨酸羟化酶1a(Tph1a)进行原核表达、纯化,探究其在斑马鱼脂代谢中的作用.根据大肠埃希菌的偏爱密码序列,优化斑马鱼tph1a编码区,插入原核表达载体pET-28a,构建融合蛋白表达质粒,并诱导表达、纯化和复性后,腹腔注射斑马鱼,检测其对脂代谢基因表达的影响.结果表明:重组蛋白Tph1a表达形式为包涵体;纯化和复性后的蛋白质具有57 ku的特异性条带;腹腔注射复性蛋白后,高脂组斑马鱼acc、pgc1a基因等表达上调,lpl基因表达下调,且pgc1a基因的表达丰度远高于其他脂代谢基因.这一研究成功构建了原核表达载体pET-28a-tph1a,获得体外高效表达;该蛋白质不仅诱导肥胖斑马鱼的长链脂肪酸合成阻滞,更促进脂肪酸氧化与分解,为探究Tph1a在鱼类脂代谢调控中的功能奠定了基础.     

体外单层肿瘤细胞生长数学模型整体解的存在性

研究一个描述肿瘤生长的自由边界问题,它来源于Helen-Byrne描述的体外模拟单层肿瘤细胞连续性生长的数学模型.该模型主要研究肿瘤生长过程中细胞间的相互作用(张力和斥力)引起的内部变化.作者运用椭圆型偏微分方程的逼近方法、Lp理论和Schauder不动点理论证明了这个问题整体解的存在性.     

羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及反应原性分析

【目的】克隆和表达羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因,进而纯化并分析其反应原性.【方法】根据GenBank已发表的ORFV(GQ328006)的B2L基因序列设计一对特异引物,以提取阳性临床样品的总DNA为模板,通过PCR方法获得ORFV的B2L基因,将该基因片段连接至原核表达载体pET-30a(+)上,获得重组质粒pET-30a(+)-B2L.将此重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,挑取单克隆进行扩大培养,经IPTG诱导获得重组融合蛋白.用SDS-PAGE和Western-blotting对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-30a(+)-B2L,读码框正确.获得了43ku的表达产物,与预期目的蛋白大小相符;纯化后的目的蛋白能与ORFV阳性血清发生特异反应.【结论】成功对ORFV-B2L蛋白进行了原核表达,且纯化后蛋白具有良好的反应原性.     

真鲷虹彩病毒辽宁株跨膜蛋白(ORF049L)基因的克隆及表达

克隆了真鲷虹彩病毒辽宁株(RSlV-LN09)跨膜蛋白(ORF049L)基因,利用生物信息学方法,对该基因编码蛋白的跨膜区及B细胞抗原位点等特征进行了分析.随后将该序列连接至pET-28a表达载体中,成功构建了pET-28a-ORFF049L原核表达质粒.将表达质粒转化至BL21 (DE3)菌株后,经IPTG诱导获得大量携带组氨酸标签的融合蛋白.该融合蛋白经变性后采用镍层析柱进行亲和纯化,纯化蛋白再经SDS-PAGE和Western blot分析,确认获得了相对分子质量约为17 000的高纯度重组蛋白His-049L.本研究结果为病毒跨膜蛋白单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础.     

Bacillus mycoides磷脂酶C纯化制备研究

通过离子交换吸附(pH7.2)、超滤、离子交换层析(pH8.5)、疏水层析及凝胶层析等多步纯化过程对Bacillus mycoides 970 发酵所产胞外磷脂酶C的分离纯化进行了研究.纯化倍率为40.8倍,纯化酶活收率为25%.纯化样品比活力达到15370 U/mg.样品纯度经过SDS-PAGE检测达到电泳纯.     

牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达与纯化

[目的]建立牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ(Vaccinia topoisomerase Ⅰ)的原核表达体系及纯化方法,以获得高活性、高纯度的牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ.[方法]优化并人工合成牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的全基因序列,构建牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达载体(pET28a/TOPO)并转化E.coli BL21 Star(DE3...     

单一和复合菌剂发酵豆腐渣的营养价值评定

[目的]豆腐渣来源广,营养价值高,但由于缺乏经济易行的加工方法,限制了其作为畜禽饲料的开发与应用。选择枯草芽孢杆菌(Bs)、植物乳杆菌(Lp)和酿酒酵母菌(Sc)对新鲜豆腐渣进行单一菌及等比例两两复合和三者复合发酵,通过感官评价和常规养分含量测定,对其发酵效果进行营养价值评价,并筛选适宜的发酵菌剂及复合类型。[方法]试验共设8组,其中7组为加菌发酵组(Bs、Lp、Sc、Bs+Lp、Bs+Sc、Lp+Sc和Bs+Lp+Sc组),另设1个不加菌的对照组,每组设3个重复,发酵5 d,每隔24 h采集豆腐渣样品。[结果]随着发酵时间延长,豆腐渣颜色逐渐变黄,并具酸香味且逐渐变浓,3种菌复合发酵后的豆腐渣感官评分显著高于其它组(P<0.01)。各组干物质(DM)、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、钙(Ca)和磷(P)等养分含量也随发酵时间的延长表现为上升趋势(P<0.05),发酵5 d后其含量最高分别达17.75%、16.00%、5.62%、0.82%和0.75%,加菌发酵的各组养分含量均显著高于对照组(P<0.01);两两复合和3种菌复合组的CP含量均显著高于其它组(P<0.01),发酵3～5 d CP含量呈显著增加趋势(P<0.05);Bs+Lp+Sc组的EE、Ca和P含量于发酵2～5 d显著高于其它组(P<0.05)。另外,Bs+Lp+Sc组的中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量分别于发酵2～5 d和3～5 d表现出显著降低(P<0.05),此外,各组间Ash含量未表现出显著性差异(P>0.05)。从发酵前后的养分含量分析,各组发酵后各养分含量显著高于发酵前(P<0.01),尤其是Bs+Lp+Sc组,较发酵前提高了0.49%(DM)、1.85%(CP)、4.92%(EE)、0.38%(Ca)和8.04%(P),NDF和ADF则表现为发酵后显著下降(P<0.01),分别降低16.43%和5.79%。[结论]Bs、Lp和Sc菌联合发酵豆腐渣可获得较好的营养价值。     

野莴苣及其近似种间亲缘关系研究

利用PCR方法对野莴苣及其11种近似种DNA进行扩增,获得ITS、matK和rbcL序列,分析遗传相似系数和聚类分析图谱,探讨野莴苣及其近似种的亲缘关系。通过野莴苣及其近似种ITS序列分析发现:野莴苣和生菜、莴苣、毒莴苣的相似性分别为93.6%、93.1%、92.6%,野莴苣与乳苣的相似性仅为87.8%;matK序列研究发现:野莴苣和生菜、莴苣、毒莴苣的相似性分别为99.2%、99.0%、99.1%,而野莴苣与乳苣的相似性仅为98.3%,结果表明,野莴苣与莴苣属的生菜、莴苣、毒莴苣的亲缘关系更近,与乳苣属的乳苣亲缘关系次之。通过对比rbcL序列发现:野莴苣和生菜相似度达100%,与莴苣、翅果菊、毒莴苣、刺毛莴苣、宿根莴苣的相似度均达99.7%,而野莴苣与乳苣的相似度却为99.4%,将野莴苣归为莴苣属更加合理。     

水分胁迫下磷营养对玉米苗期根系导水率的影响

采用室内水培试验法 ,选择高水肥型玉米品种 ,以 PEG6 0 0 0模拟干旱胁迫 ,Hoagland全营养液和无磷营养液控制磷素水平 ,用压力室法测定了三叶期的玉米根系导水率 (L pr)的变化规律。结果表明 :缺磷植株根系的导水率显著降低 ,但在复磷后 4～ 2 4 h内导水率能恢复到与供磷对照植株接近的数值 ;干旱胁迫可导致玉米根系导水率急剧降低 ,但供磷处理的导水率仍然大于无磷处理 ;复水后 ,供磷植株 Lpr 恢复能力较无磷植株强 ,表明磷处理植株对干旱有较强的忍受能力和恢复能力。 Hg Cl2 处理表明磷营养可通过影响水通道蛋白的活性或表达量来调节根系导水率。     

多年生黑麦草根际溶磷菌的筛选(英文)

从多年生黑麦草根际不同部位分离具有溶磷能力的溶磷菌菌株,采用溶磷圈法筛选出7株溶磷能力较强的菌株开展溶磷潜力实验。结果表明,各菌株的磷源溶解量差异较大(135.27～187.87μg/ml),各菌株分泌IAA量为3.47～24.27μg/ml,其中以Lp59最大;综合菌株的溶磷量、分泌IAA量,认为Lp59、Lp61、Lp65、Lp69、Lp70和Lp72等6个菌株有较大的开发潜力。     

The mysteries of lipoprotein(a)

Lipoprotein(a) [Lp(a)] is a macromolecular complex found in human plasma that combines structural elements from the lipoprotein and blood clotting systems and that is associated with premature coronary heart disease and stroke. It is assembled from low-density lipoprotein (LDL) and a large hydrophilic glycoprotein called apolipoprotein(a) [apo(a)], which is homologous to the protease zymogen plasminogen. Plasma Lp(a) concentrations vary 1000-fold between individuals and represent a continuous quantitative genetic trait with a skewed distribution in Caucasian populations. Variation in the hypervariable apo(a) gene on chromosome 6q2.6-q2.7 and interaction of apo(a) alleles with defective LDL-receptor genes explain a large fraction of the variability of plasma Lp(a) concentrations. Though of high theoretical and practical interest, many aspects of the metabolism, function, evolution, and regulation of plasma concentrations of Lp(a) are presently unknown, controversial, or mysterious.     

咪鲜胺及其制剂对三叶浮萍生长的影响

为了全面正确地评价咪鲜胺的生态环境效应与生物毒性,采用室内恒温光照试验研究了咪鲜胺及其制剂施保克对三叶浮萍生长的影响．结果表明：低质量浓度的咪鲜胺（低于1．56mg／L）和施保克（小于0．63mg／L）能促进三叶浮萍的生长,表现为刺激作用,而高质量浓度的咪鲜胺（大干或等于1．56mg／L）和施保克（大干或等于0．63mg／L）则对三叶浮萍的生长表现为明显的抑制作用,而且,这种抑制作用还会随着处理时间的延长或处理浓度的上升而加强．总体表现出“低（浓度）促高（浓度）抑”或“长（作用时间）抑短（作用时间）促”的毒性效应．第1天时,咪鲜胺对三叶浮萍的毒性低于施保克的毒性,但随着时间的推移（处理2d以后）,咪鲜胺的毒性均高于施保克．     

植物乳杆菌Lp基因表达时内参基因的选择

实验以植物乳杆菌Lp为实验材料,用荧光定量PCR技术分析16S rRNA、Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenas、L-lactate dehydrogenase以及rec A protein四个候选内参基因的表达情况。应用两种软件ge Norm和Norm Finder程序对实验结果进行分析。实验结果显示在植物乳杆菌Lp中,稳定值最小的是16S ribosomal RNA,用Norm Finder软件分析,稳定值最小的也是16S ribosomal RNA。揭示16S ribosomal RNA适合做植物乳杆菌正常生长状态下的内参基因。     

Comparison of Three Methods for Determination of Root Hydraulic Conductivity of Maize （Zea mays L.） Root System

Three techniques of root pressure probe, pressure chamber and high pressure flow meter were used to measure the hydraulic conductivities （Lpr） of whole root systems of young maize （Zea mays L.） seedlings grown hydroponically under either drought or normal water conditions. Compared to normal water conditions, drought stress simulated by polyethylene glycol 6 000 （osmotic potential =-0.2 MPa） reduced Lpr in the root system by over 50%. It indicated that water permeability in the roots decreased significantly when plants suffered from water shortages. Moreover, there was no significant difference （P〈 0.05） on the Lpr values in the root systems developed under a given water stress regime among the three techniques used. Therefore, all three methods are acceptable to study the hydraulic conductivity of maize seedling root systems. We have also highlighted some of the technical limitations of each method. It can be inferred that the root pressure probe is preferable for young maize seedlings because it is subtle and has the additional ability to determine solute transport properties, but the method is time consuming. Other advantages and disadvantages of each technique are discussed in order to acquaint researchers with basic information that could contribute to their choice of an appropriate technique for future studies.     

患脂肪肝奶牛的代谢、内分泌和组织基因表达特征#br#

 【目的】旨在阐明患脂肪肝奶牛体内代谢、内分泌以及肝和脂肪中3个基因表达的变化。【方法】分别对10头患脂肪肝奶牛和10头健康奶牛进行血液指标和肝脂含量的检测,利用半定量RT-PCR检测奶牛肝PEPCK-C mRNA的丰度,应用实时荧光定量PCR检测脂肪Lp mRNA和HSL mRNA的丰度。【结果】①脂肪肝奶牛血糖浓度显著降低（P＜0.01）,血浆NEFA和BHBA的浓度显著升高（P＜0.01）,肝脂（约41.98%左右）和血清AST活性显著增加（P＜0.01）,血清γ-GT、TBI、CHE显著升高（P＜0.05）;②脂肪肝奶牛Ins浓度、Ins/Gn明显升高（P＜0.05）,肝PEPCK-C和脂肪HSL mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）;③脂肪Lp mRNA表达水平和血浆Lp、NPY浓度显著下降（P＜0.05）。【结论】患脂肪肝奶牛存在严重的能量代谢障碍和明显的肝功障碍,体内Ins与Gn、Lp与NPY之间失调,肝PEPCK-C和脂肪HSL、Lp的基因表达减弱,是病牛能量代谢障碍发生的重要机制。     

Compositional relatedness between histocompatibility antigens and human serum lipoproteins

Human histocompatibility antigens and the protein part of Lp(a) lipoprotein and low density lipoprotein of human serum appear to be related when the amino acid compositions are compared. The Lp(a) lipoprotein appears to be closely related also to murine H-2(d) antigen. The results support the concept of a relation between serum lipoproteins and histocompatibility antigens on cell membranes.     

发酵羊肉乳酸菌发酵剂的筛选及发酵性能研究

通过对嗜酸乳杆菌(Lactobacillu acidophilus,简称La),植物乳杆菌(Lactobacillu plantarum,简称Lp),干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,简称Lc)进行生化试验,并对其耐食盐、耐亚硝酸盐、产酸能力、生长曲线、抑菌能力及拮抗性能进行试验,从而筛选出适宜于发酵羊肉的优良乳酸菌.结果表明:Lp,La对食盐、亚硝酸盐具有较好的耐受性, 能在6;的NaCl溶液和80～150 mg/kg NaNO2溶液中较好的生长;Lp,La,Lc对蛋白质、脂肪无分解作用,均能抑制大肠杆菌,金黄色葡萄球菌;三株乳酸菌的生长曲线相似,生长2 h可接入羊肉中进行发酵,生长10 h可进入后熟阶段;三株乳酸菌的产酸特性相同,pH值都能在24 h内下降到5.0以下.由于Lp,La拮抗作用弱,所以Lp,La既可单独作为肉制品发酵剂,又可作为混合发酵剂.由于Lc耐盐性和耐亚硝酸盐性差,所以不适于作为发酵肉制品发酵剂.