Logic of the yeast metabolic cycle: temporal compartmentalization of cellular processes

Budding yeast grown under continuous, nutrient-limited conditions exhibit robust, highly periodic cycles in the form of respiratory bursts. Microarray studies reveal that over half of the yeast genome is expressed periodically during these metabolic cycles. Genes encoding proteins having a common function exhibit similar temporal expression patterns, and genes specifying functions associated with energy and metabolism tend to be expressed with exceptionally robust periodicity. Essential cellular and metabolic events occur in synchrony with the metabolic cycle, demonstrating that key processes in a simple eukaryotic cell are compartmentalized in time.     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达

【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高（27.45%）。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。     

拟南芥Ca~(2+)泵基因ACA_2的RNAi载体的构建及转基因植株的筛选

构建了含拟南芥Ca2+泵基因ACA2特异片段反向重复结构的RNA i载体,通过根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了12个T3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ACA2在转基因株系中转录的结果表明,其转录产物比野生型(WT)明显降低,且转基因株系之间差异明显,表达水平有1个梯度关系,因此,我们初步确定沉默Ca2+泵基因ACA2的RNA i载体是起作用的。     

Molecular mechanisms of the biological clock in cultured fibroblasts

In mammals, the central circadian pacemaker resides in the hypothalamic suprachiasmatic nucleus (SCN), but circadian oscillators also exist in peripheral tissues. Here, using wild-type and cryptochrome (mCry)-deficient cell lines derived from mCry mutant mice, we show that the peripheral oscillator in cultured fibroblasts is identical to the oscillator in the SCN in (i) temporal expression profiles of all known clock genes, (ii) the phase of the various mRNA rhythms (i.e., antiphase oscillation of Bmal1 and mPer genes), (iii) the delay between maximum mRNA levels and appearance of nuclear mPER1 and mPER2 protein, (iv) the inability to produce oscillations in the absence of functional mCry genes, and (v) the control of period length by mCRY proteins.     

巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486靶基因的研究

【目的】为了深入挖掘巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486的靶基因,为最终阐明巴什拜羊优良肉质性状形成的分子调控机制奠定基础,同时为巴什拜羊的持续选育提供理论依据。【方法】分别采集了巴什拜羊胎儿期40,50,60,80,100和120 d,以及出生当天,出生后30,60和90 d共计10个不同发育阶段的骨骼肌组织,分别利用胎儿期6个阶段的混合mRNA和出生后4个阶段的混合mRNA构建了胎儿期和出生后骨骼肌中miR-486调控靶基因的cDNA文库,并利用高通量测序技术对cDNA文库中的靶基因信息进行了深入挖掘。在对所得候选靶基因功能分析的基础上,选择10个候选靶基因,使用qRT-PCR检测其在巴什拜羊上述10个不同发育阶段骨骼肌中表达量的变化,结合课题组前期获得的miR-486在巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中的表达规律,对其靶向调控关系及生物学功能进行初步验证和分析。进而选择其中的4个候选靶基因使用荧光素酶报告载体试验和巴什拜羊骨骼肌卫星细胞中的靶向调控试验最终确认其靶向调控关系。【结果】通过对两个cDNA文库高通量测序数据的分析,胎儿期和出生后分别获得了123个和118个miR-48...     

Tet-on系统诱导猿猴病毒40T在CHO细胞中的表达

四环素诱导表达系统（Tet-off／Tet-on系统）是比较成熟的真核生物基因诱导表达系统之一,具有高效、无毒、严密开／关功能的特点。猿猴病毒40T（SV40T）是一种病毒癌蛋白,其与肿瘤抑制蛋白p53和Rb结合,并使之失活,从而消除它们抑制细胞生长的功能,使细胞分裂加速,形成肿瘤。利用Tet-on系统首先稳定筛选获得了表达Tet-on系统调节元件rtTA的阳性细胞CHO-pTet-on,再通过稳定筛选又成功得到导入其反应元件的双阳性细胞CHO-pTet-on-pTRE2-SV40T-Hyg,经强力霉素诱导表达了目的基因SV40T,建立了Tet-on基因诱导表达系统的细胞诱导表达研究平台。