新除草剂HNPC-C9908对小球藻生长的影响研究

HNPC-C9908[2-（4-甲氧基-6-甲硫基嘧啶-2-基）氨基甲酰基氨基磺酰基苯甲酸甲酯]是国家南方农药创制中心湖南基地研制成功的具有自主知识产权的一种新型磺酰脲类除草剂,主要用于小麦田各种阔叶杂草和一些禾本科杂草的防除。以蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidosa Chick为对象, 研究了HNPC-C9908对藻类的毒性效应及其致毒机理。实验结果表明,HNPC-C9908对蛋白核小球藻生长具有明显影响,在低浓度(1 mg/L)时具有刺激藻细胞生长的作用,高浓度(＞25 mg/L)时表现出明显的抑制作用,其对蛋白核小球藻生长的96 h-EC50值为29.12 mg/L。参照国家有关建议评价标准, HNPC-C9908对蛋白核小球藻属于低毒。同时,HNPC-C9908对蛋白核小球藻叶绿素含量也有影响。藻细胞叶绿素含量随药剂浓度的增加而下降,表现出良好的剂量-效应关系。在HNPC-C9908作用下,蛋白核小球藻细胞中可溶性蛋白质含量和两种清除活性氧自由基的关键性酶——超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性均有明显的变化,低浓度时表现出应激性上升,而高浓度时明显受到抑制,其对藻细胞可溶性蛋白质含量、SOD和POD活性的96 h-IC50值分别为26.27、15.25和13.76 mg/L, 说明SOD和POD活性的降低是HNPC-C9908的存在使蛋白核小球藻产生过量活性氧自由基进而引起膜脂过氧化及细胞膜伤害的原因之一。     

新杀虫剂HNPC-A9908对蛋白核小球藻生长的毒性效应研究

研究了肟醚类杀虫剂HNPC-A9908 对蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidosa生长的毒性效应,结果表明,HNPC-A9908对蛋白核小球藻细胞生长具有一定的抑制作用,其抑制程度与药剂浓度呈正相关。当以丙酮为溶剂时,HNPC-A9908对蛋白核小球藻的96 h-EC50值为3.14 mg/L,以乙酸乙酯为溶剂时为25.2 mg/L。参照国家有关建议评价标准,HNPC-A9908对蛋白核小球藻属于低毒。此外,HNPC-A9908对蛋白核小球藻的光合色素含量也具有一定的影响,其中以对叶绿素a的影响最大。     

抑制番茄早疫病菌活性化合物的 高通量筛选方法研究

以OD 630 值作为评价指标,在高通量筛选设备上建立了番茄早疫病菌Alternaria solania的高通量定量筛选方法,并对嘧菌酯、百菌清、 NFDA1 醚唑、霜脲氰、甲霜灵、代森锰锌、福美双和咪鲜胺8种常用杀菌剂对番茄早疫病菌孢子萌发和菌丝生长的抑制效果进行了评价,结果与孢子萌发法和目测筛选法所得结论基本一致。     

拮抗核盘菌Bt菌株的筛选及抑菌活性研究

利用平板对峙试验从170株Bt菌株中筛选获得12株对核盘菌Sclerotinia sclerotiorum有抑菌活性的菌株,对其中4株活性较强的菌株进行抗病相关基因分析,发现菌株中都含有几丁质酶基因,测定4AP1菌株发酵液的几丁质酶活力为672.4U/mL。通过对4AP1菌株pH和温度敏感性的研究发现,4AP1菌株最高可耐受55℃高温及pH 12缓冲液的处理,抑菌活性与对照无显著差异。且该菌株抑菌谱较广,除核盘菌外,对小麦赤霉病菌Fusarium graminearum等其他9种病原真菌均有抑制作用。本研究获得的4AP1菌株对核盘菌具有较强抑制作用,且耐热耐强碱环境,为构建杀虫抗病Bt工程菌提供了菌株资源。     

对绿盲蝽具有杀虫活性Bt菌株的筛选及Cry15Aa蛋白活性的研究

Bt棉有效控制了棉田主要害虫棉铃虫(Helicoverpa armigera),然而原来处于次要地位的刺吸式口器害虫盲蝽(Heteroptera:Miridae)为害逐年加重,目前对绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-Dür)有效的抗虫基因未见报道。本研究以本实验室保存的Bt杀虫基因和菌株为材料,对绿盲蝽进行杀虫活性筛选。利用本实验室先前克隆的Mtx类杀虫基因cry15Aa表达产物进行绿盲蝽杀虫活性测定,研究结果显示Cry15Aa蛋白对绿盲蝽具有一定的杀虫活性。通过杀虫活性测定,获得对绿盲蝽有效的Bt菌株20株;对这些菌株表达蛋白进行质谱鉴定,LC-MS/MS质谱鉴定结果显示,这些菌株可能含有Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ae、Cry1Af、Cry1Ag、Cry1Ah、Cry1Ba、Cry1Be、Cry8Ha等十余种对鳞翅目、鞘翅目害虫有杀虫活性的蛋白片段,并且有4株Bt菌株样品中检出了Mtx类杀虫蛋白Cry15Aa的片段。但是进一步基因鉴定结果表明,这4株菌株并不含有cry15Aa全长基因,推测这些菌株中含有Cry15类的新基因。上述研究结果表明这些菌株中可能存在对盲蝽有效的新型杀虫蛋白。本研究在发现了cry15Aa基因所表达的蛋白对绿盲蝽具有杀虫活性的同时,获得了对绿盲蝽具有杀虫活性的Bt新菌株,对绿盲蝽的生物防治具有重要的意义。     

新化合物HNPC-B2055的室内除草活性研究

HNPC-B2055是一种具有极高苗后除草活性的新化合物,在室内进行了该化合物对靶标杂草的IC50(或IC90)值测定、杀草谱测定、对作物安全性测定、吸收及传导性测定、土壤持效性测定以及对后茬作物的安全性测定。     

黏虫微量筛选方法的研究

用微量筛选方法和常规筛选方法筛选24种商品药剂,结果表明常规筛选出线的药剂要在微量筛选浓度下出线,活性必须达到C级。又分别用2种方法筛选了24个新化合物,结果表明,常规筛选出线的化合物在微量筛选时仍能出线,证实了100mg/L浓度下活性为C级的微量筛选出线标准是可行的。     

辛菌胺对15种植物病原菌的离体抗菌活性研究

分别采用菌丝生长速率法和吸光度法测定了辛菌胺对10种植物病原真菌和5种植物病原细菌的离体抗菌活性,结果表明辛菌胺具有广谱的抗菌活性,其中在真菌方面对番茄叶霉病菌的活性最高,EC50N4．3180μg／mL,对其他几种真菌的活性相对较低,但EC∞均〈100μg／mL;辛菌胺对细菌均表现出较高的抑制活性,其中对棉花角斑病菌的活性最高,EC50为0．1749μg／mL,对另外4种细菌的EC50值也均〈5μg／mL。     

除虫菊内生真菌Y2菌株的分离鉴定及其发酵产物抑菌活性初步研究

在对从除虫菊中分离到的内生真菌进行抑菌活性系统筛选的基础上,对其中活性较高的Y2菌株进行了初步的鉴定和活性物质的分离。经形态学初步鉴定该菌株为镰孢属真菌Fusarium sp.,其发酵液粗提物高抑菌活性馏分集中在丙酮、乙酸乙酯等中等极性馏分段。Y2菌株发酵液10倍稀释液对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum等6种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制率在80.41% ~93.26%之间,其5倍稀释液对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和苹果炭疽病菌Glomerella cingulata孢子萌发的抑制率均大于80%。活体生测结果表明,该发酵液对番茄灰霉病和黄瓜霜霉病的保护效果大于50%,治疗效果不明显。     

利用96孔板建立除草剂微量活体筛选方法初探

以马唐、稗草、反枝苋3种杂草为指示植物,采用96孔板建立了化合物除草活性微量活体筛选方法。从6种培养基中筛选出最适合3种指示杂草生长的Ⅰ号培养基,以传统盆栽法为对照,进行了96孔板苗前处理微量活体筛选方法(以下简称96孔板法)的研究。结果表明:96孔板法以指示杂草的株高受抑制情况作为评价指标较为合适;3种供试除草剂采用96孔板法对3种指示杂草所表现出的杀草活性要高于盆栽法;乙氧氟草醚、二甲戊灵、氟乐灵盆栽法的EC50和EC90值分别是96孔板法的1.44~21.47倍和1.47~32.84倍;采用96孔板法,乙氧氟草醚对马唐和反枝苋、二甲戊灵对稗草的活性最高,EC50值分别为0.79、0.73和0.45 μg/mL,EC90值也分别只有3.13、1.72和1.36 μg/mL。96孔板法达到了微量、敏感、节省时间和空间的要求,是发现先导化合物除草活性较适宜的微量活体筛选方法。