重组褐藻胶裂解酶基因工程菌超声波破碎条件研究

褐藻胶裂解酶是制备褐藻胶寡糖的重要工具酶,利用工程菌进行褐藻胶裂解酶基因的克隆与高效表达是提高酶活的主要途径之一。工程酶位于胞内,需采取有效破碎手段获取。对重组褐藻胶裂解酶基因工程菌E.coli TOP10采用超声波破碎,分析了超声波破碎强度、总工作时间、NaCl浓度对菌体破碎程度及酶活力的影响。通过单因素试验和正交试验得出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:菌液浓度40 mg/mL,菌液体积50 mL,超声波工作时间4 s,间歇时间8 s,超声波破碎强度50%,总工作时间6min,NaCl浓度为0.15 mol/L。在该条件下获得褐藻胶裂解酶粗酶液的酶活为21 U/mL。     

大肠杆菌内毒素诱导奶山羊急性乳房炎试验

试验研究了大肠杆菌内毒素乳房灌注在奶山羊引起的临床反应。结果表明，大肠杆菌内毒素注入杂种杂山羊乳池内能诱导出典型的急性乳房炎局部症状和全身症状：乳房肿胀，发热疼痛，体温升高，产奶量下降等。超声波图象说明，水肿是急性乳房肿胀的主要原因，随着局部炎症消失，乳腺组织能迅速达到临床上的完全康复。     

两种绘制枯草芽孢杆菌和大肠杆菌生长曲线方法的比较

利用分光光度法和活菌计数法对大肠杆菌O78和枯草芽孢杆菌CGMCC 1.504的生长曲线进行测定,并根据两种方法在细菌对数生长期的线性关系,筛选相关系数最大的吸光度。结果表明:大肠杆菌O78培养中0~2 h为迟缓期,2~12 h为对数生长期,12~20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期。枯草芽孢杆菌CGM培养中0~2 h为迟缓期,2~12 h为对数生长期,12~18 h为稳定期,18 h以后进入衰亡期。在两种细菌的对数生长期,分光光度计测出不同吸光度下的OD值和活菌计数法测得的细菌数都表现出一定的线性关系,且在吸光度为630 nm时,O78和CGM的OD值和活菌数相关系数最大(R~2_(O78)=0.991 2,R~2_(CGM)=0.990 4),相关程度最高。     

大肠杆菌内毒素诱导奶山羊急性乳房炎试验

试验研究了大肠杆菌内毒素乳房灌注在奶山羊引起的临床反应。结果表明，大肠杆菌内毒素注入杂种奶山羊乳池内能诱导出典型的急性乳房炎局部症状和全身症状：乳房肿胀，发热疼痛，体温升高，产奶量下降等。超声波图象说明，水肿是急性乳房肿胀的主要原因。随着局部炎症消失，乳腺组织能迅速达到临床上的完全康复。     

两种鸡大肠杆菌油佐剂灭活苗对雏鸡免疫效果的比较

为了探讨用鸡胚和普通培养基增殖的大肠杆菌在免疫效果方面有无差异,用致病性大肠杆菌地方菌株与标准菌株混合,经鸡胚及固体培养基增殖后,制成两种油佐剂灭活疫苗,分别免疫10日龄雏鸡,免疫后21d抗体达到峰值,抗体在3log2以上维持35d以上,免疫后42d用混合菌液对两种菌苗免疫组分别进行攻击,鸡胚苗免疫组对混合菌液的攻击保护率为93.3%,常规培养苗免疫组对混合菌液的攻击保护率为83.3%。     

鸡大肠杆菌病防治中药敏试验方法简介

近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养鸡业（特别是肉鸡）最为重要的疾病之一，为细菌病之首。因此，广大养鸡户谈之色变，没有比感染病毒病又继发大肠杆菌病更糟糕的了。正因为如此。抗生素得到了大量广泛的应用，又由于大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，所以大肠杆菌的耐药性问题日益突出。     

富硒酵母细胞壁破碎方法的比较—细胞自溶法和酸—一热破碎法

对影响富硒酵母自溶条件：NaCl浓度、pH值、温度、时间进行了研究，结果表明：3%NaCl,pH5.5,55℃，20h的条件下，自溶物中氨基酸含量最高，为最佳自溶条件；对影响酸-热破碎法的条件；酸浓度、热处理时间、浸泡时间进行了研究，结果表明：3mol/L HCl，浸泡60min，热处理3min，迅速冷却的条件下，氨基酸含量最高，为最佳破碎条件。将两种方法进行比较，发现破碎后内容物溢出量及硒含量及非常接近，差别不明显。     

三种质粒DNA对不同大肠杆菌菌株转化率的比较

将重组ＤＮＡ导入细菌细胞是分子克隆的中心工作之一．转化率的高低直接关系到实验成败．使用３种质粒ｐＢＲ３２２、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ和ｐＵＣ１８，对３种大肠杆菌菌株进行转化，比较转化率，推荐使用１００ｍｍｌ／ＬＣａＣｌ２，ｐＨ６～８和４℃１２ｈ作为转化的优选条件。     

三黄汤与环丙沙星对大肠杆菌体外抑菌作用的比较

[目的]比较三黄汤与环丙沙星对耐药性大肠杆菌体外抑菌作用的差异,探讨二者联合使用的临床意义。[方法]试管稀释法测定三黄汤和环丙沙星的MIC,采用分批培养法绘制在亚MIC浓度下二者抑菌曲线和组合用药时抑菌曲线。[结果]三黄汤、环丙沙星的MIC值分别为450 mg/ml和15.63μg/ml;在亚MIC浓度下三黄汤对大肠杆菌的抑菌曲线一直保持平稳状态;而环丙沙星抑菌曲线在起始3～4 h内呈下降趋势,随后保持较平稳状态。通过转接20次培养后,发现三黄汤的MIC没有明显改变,而环丙沙星MIC增至90.7μg/ml,显著增高;组合药物培养时,FIC指数<0.5,表现为协同作用;通过不同梯度组合培养测出最佳组合浓度为三黄汤112.5 mg/ml、环丙沙星9.38μg/ml,在最佳组合药物的培养下,大肠杆菌的抑菌曲线起初表现环丙沙星的抑菌作用,但随后保持稳定;组合药物中转接20次的大肠杆菌对环丙沙星的药敏性有所提高,其MIC值降至11.4μg/ml。     

不同保存方法对重组大肠杆菌菌株活性的影响

[目的]探讨不同重组大肠杆菌菌株保存的方法,找出其保存的最适条件。[方法]以携带质粒pcDNA3的大肠杆菌DI-lSct为研究对象,分析了4oC冷藏和一70℃冷冻保存对菌株活性的影响。[结果]4℃条件下,高稀释度的菌液中活细胞教随着时间的延长而逐渐上升,到第7天时达到最高峰,随后呈现逐渐下降的趋势-70℃条件下,菌液OD600值为0．8,甘油终浓度为8％的处理组,在各保存时间段的活细胞数均显著高于其他组.[结论]4℃短期保存重组菌株时,菌液最佳存放时间为7d左右;-70℃长期保存时,宜采用对数生长期的细菌,且保持甘油工作浓度8％为宜。     

山西省鸡致病性大肠杆菌耐药性研究

采用纸片扩散法,对山西省11个地区的138株鸡致病性大肠杆菌用26种抗菌药物进行敏感性测定,结果,138株鸡致病性大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、磷霉素、头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松等的高敏率为62.3%~83.3%;对氧氟沙星、庆大霉素、多黏菌素B、氟苯尼考的中敏率为50%以上;对26种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,如恩诺沙星耐药率为81.2%,多西环素为83.3%,氨苄青霉素为85.5%,阿莫西林为87.0%,罗红霉素为89.1%,复方磺胺为99.2%,利福平为100%。所以,临床首选高敏的药物,慎重使用中敏药物,尽量不用恩诺沙星等高耐药性的药物。     

培养条件对大肠杆菌产L-天冬酰胺酶的影响

研究了培养温度、培养时间、初始pH值和摇床转速等培养条件对所选大肠杆菌（E.coli No TN1.5885）产L-天冬酰胺酶的影响。实验结果表明,该菌株进行摇瓶培养的最适培养条件为37℃下培养16h,初始pH值在7.0-7.5间,摇床转速约为300r／min。其比酶活力约为406U／g,比优化前大约提高了20％。     

鸡致病性大肠杆菌耐药性检测

从河南省4个地市（区）商品肉鸡病料中分离了15株大肠杆菌（E．coli）,在对其进行生化鉴定的基础上,采用微量倍比稀释法测定了17种抗菌药物对它们的体外最小抑菌浓度（MIC）,并按照美国临床实验标准化委员会（NCCLS）的抗菌药物敏感性标准（2009年第十九版）进行耐药性判断和耐药谱比较分析。结果显示：15株鸡E．coli对17种抗菌药物中的16种药物均有不同程度的耐药性,其中对头孢唑林、恩诺沙星、新霉素、环丙沙星的耐药性比例达90％～100％,对阿莫西林、头孢曲松、庆大霉素、阿奇霉素的耐药性比例达到80％以上,对多西环素、大观霉素、左氧氟沙星的耐药性比例达到60％以上。17种抗菌药物敏感性比例达到60％以上的有多粘菌素B、阿米卡星、氟苯尼考,其余药物的敏感性比例均在40％以下。15株鸡E．coli均为多重耐药菌株,耐药谱最多的药物达到14种,耐药谱最少的药物有6种。说明鸡E．coli对常用抗菌药物已产生比较普遍的耐药性,而且耐药谱较宽。     

鸡致病性大肠杆菌对抗菌药物的敏感性测定

从阿拉尔某鸡场分离出1株致病性大肠杆菌，应用K—B法，用10种抗菌药物对其敏感性进行了测定。结果，抑菌作用最强的是红霉素、庆大霉素、磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶、环丙沙星；无抑菌作用的是青霉素、四环素、氟哌素、头孢唑啉。     

新生仔猪致病性大肠埃希菌的分离鉴定

从湖北某猪场发生典型黄痢的新生仔猪无菌采集粪便。上清接种小白鼠，取粪便和死亡小白鼠的心血接种麦康凯琼脂培养基，桃红色菌落，革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌，用法国BioMerieuxATB全自动细菌鉴定及药敏仪ID32E肠杆菌鉴定条鉴定。得到大肠埃希菌的极好鉴定结果。不同剂量接种小白鼠，证明其毒力，用163种O抗原标准血清玻板凝集试验定型为O101型。用ATB VET药敏试条进行药敏试验结果显示对7种抗生素敏感。     

规模化牛场犊牛腹泻大肠杆菌对常用消毒剂的敏感性研究

[目的]测定犊牛腹泻大肠杆菌对常用消毒剂的敏感性,为牛场消毒剂的合理使用提供理论依据。[方法]选用常用的拜洁、安灭杀、三氯异氰尿酸3种消毒剂,对来自石河子地区不同牛场犊牛腹泻大肠杆菌分离株进行了最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及定量杀菌率的测定。[结果]安灭杀、三氯异氰尿酸和拜洁的最佳抑菌浓度分别为1∶240、1∶1 200和1∶1 200。5 min内不同浓度的3种消毒剂对10株大肠杆菌菌株的最小杀菌浓度分别为1∶80、1∶600、1∶800。在推荐浓度下,对石河子地区犊牛腹泻大肠杆菌,三氯异氰尿酸(1∶1 000～1 600)杀菌率为99.86%～99.88%,安灭杀(1∶160～240)杀菌率为99.12%～99.24%,拜洁(1∶1 000～1 600)杀菌率为97.64%～98.36%。[结论]犊牛腹泻大肠杆菌对三氯异氰尿酸最为敏感,而安灭杀和苯扎氯铵次之。     

大肠杆菌内毒素多克隆抗体的制备与纯化

为制备大肠杆菌内毒素多克隆抗体,应用大肠杆菌内毒素作为抗原免疫5周龄家兔,辛酸-硫酸铵法和葡聚糖凝胶层析法分离提纯抗血清,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳方法鉴定多抗纯度,紫外分光光度计测定抗体蛋白含量,ELISA法检测抗血清效价与交叉反应;大肠杆菌内毒素抗体含量和效价分别为6.95mg/ml和1:12800;成功制备出抗大肠杆菌内毒素多克隆抗体,为大肠杆菌内毒素病诊断试剂盒的研制奠定基础。     

不同宿主大肠杆菌对15种抗生素抗药性差异研究

采用96孔板微量肉汤稀释法,测定SPF鸡、商品肉鸡、鸡场饲养员、医院病人等不同宿主粪样140株大肠杆菌对15种抗生素的抗药性,比较不同用药环境下大肠杆菌的抗药性差异。结果表明：SPF鸡分离菌株的抗药性最低,平均抗药性频率为46．08％,大部分菌株对8～9种抗生素存在低水平抗药性。医院病人大肠杆菌平均抗药性频率达到67．47％,多数菌株对12—13种抗生素产生抗药性。由于商品鸡场大量使用抗生素,鸡场饲养员和肉鸡分离株平均抗药性频率远高于SPF鸡,分别达80．00％和72．27％,并对12—13种抗生素产生抗药性,其中对磺胺二甲嘧啶、利福平的抗药性频率都在90％以上。建议测定区域使用抗药性频率低于50％的抗生素：头孢唑啉、头孢噻呋、硫酸黏菌素、阿米卡星。