琥珀酰辅酶A转移酶硝基化酪氨酸位点

摘 要：线粒体琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)含有4个酪氨酸残基，其4、76位点酪氨酸(Tyr4、Tyr76)的硝基化可导致其酶活性下降，制备特定的抗体可对其硝基化水平和位点进行检测。应用淋巴细胞杂交瘤技术，以化学合成的含琥珀酰辅酶A转移酶硝基化Tyr4和Tyr76肽段为半抗原，偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)后, 作为免疫原免疫Balb/c小鼠，分离免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得了多株融合细胞。经对融合细胞多次筛选和检测，最终获得4株单克隆抗体，分别对应SCOT Tyr4和Tyr76硝基化后表位，其间接ELISA检测效价分别达到1∶128 000、1∶32 000、1∶512 000和1∶4 096 000，表明抗体具有较强特异性和灵敏度。     

烟草绿原酸生物合成途径关键酶基因的研究进展

绿原酸是重要的植物苯丙素类次生代谢产物之一,与植物的食品风味和药用生物活性等密切相关,其生物合成与调控研究一直是科研人员所关注的焦点。本文综述了烟草绿原酸生物合成途径中关键节点苯丙氨酸解氨酶基因、肉桂酸-4-羟化酶基因、对-香豆酸辅酶A连接酶基因、羟基肉桂酰辅酶A:奎尼酸羟基肉桂酰转移酶基因、羟基肉桂酰辅酶A莽草酸/奎尼酸羟基肉桂酰转移酶基因、对-香豆酸3′-羟化酶基因的研究进展,并进一步展望了烟草绿原酸生物合成代谢调控的研究方向,旨在为烟草绿原酸生物合成途径的深入研究和定向调控提供参考。     

苎麻咖啡酰辅酶A甲基转移酶基因原核表达及其结构分析

为了研究苎麻木质素合成关键酶——咖啡酰辅酶A-甲基转移酶(CCoAOMT)基因编码的酶蛋白,了解其结构特点;采用原核表达系统——大肠杆菌表达系统pQE,对苎麻CCoAOMT cDNA编码区进行了高效表达,获得了分子量为29.4kD的苎麻CCoAOMT融合蛋白。采用SwissModel服务器模拟构建了该酶蛋白的空间结构。并利用InsightII软件包中的Docking模块构建了该酶蛋白与辅酶Sinapoyl、SAH和Ca2 相互作用的复合物的结合模型,并利用Discover模块对模拟的结构进行结构优化。可以推知所克隆的苎麻CCoAOMT cDNA编码了咖啡酰辅酶A甲基转移酶,具有O-甲基转移酶蛋白典型的催化功能,参与苎麻木质素单体前体的甲基化反应。     

甜荞热激转录因子基因家族的鉴定及生物信息学分析

利用Blastp比对程序对甜荞基因组数据库进行搜寻,共鉴定到23个甜荞HSF基因。基因结构分析显示,所有HSF基因都含有内含子,且大部分基因只含有1个内含子。蛋白序列多序列比对分析表明,23个HSF蛋白均含有氨基酸序列高度保守的DNA结合域(DNA–binding domain,DBD)和不保守的寡聚化结构域(oligomerization domain,OD)。蛋白保守基序分析表明,23个HSF蛋白共包含10个保守基序,基序长度为11~62个氨基酸,其中基序1、2和3代表DBD区。亚细胞定位分析表明,除Fe HSF13、Fe HSF14和Fe HSF18同时定位于细胞核和细胞质上,其余20个Fe HSF蛋白均定位于细胞核上。磷酸化位点分析表明,所有HSF蛋白均含有潜在的丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Thr)磷酸化位点,部分HSF蛋白还含有酪氨酸(Tyr)磷酸化位点。系统发育分析表明,23个HSF基因可以分为A、B和C 3类,进一步细分为A1、A3、A4、A5、A6、A7、A9、B3、B4和C共10个亚类。     

油茶种仁成熟过程油脂合成代谢的转录组分析

以普通油茶品种"闽43"种仁为试验材料,应用转录组测序技术分析油茶种仁成熟阶段中3个发育时期转录组的表达差异,探讨油茶种子油脂代谢的分子机制。转录组测序结果发现,与脂肪酸和甘油三酯代谢相关的4个基因乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶α亚基基因(ACCase α-CT)、β酮脂酰合酶基因(KASⅢ)、长链酰基辅酶A合酶基因2(LACS2)和甘油三磷酸酰基转移酶基因4(GPAT4)随着油茶籽的成熟,表达水平呈上升趋势。4个基因的RT-q PCR的分析结果与转录组数据一致,此外,种仁的含油量的变化趋势与4个基因的表达水平相一致。研究结果表明,4个基因在油茶籽油脂代谢过程中发挥重要作用,有助于油茶籽含油量的增加。     

柱前衍生高效液相色谱法测定糜子发芽过程中氨基酸变化

采用柱前衍生高效液相色谱法测定了糜子发芽过程中氨基酸的变化规律。以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为衍生试剂,以磷酸盐缓冲液为流动相A,乙腈/水(6∶4)为流动相B进行梯度洗脱;在柱温37℃条件下用紫外检测器在波长248 nm下进行测定。结果表明,糜子中谷氨酸(Glu)含量最高,其次是亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala);发芽时间为48 h时,总氨基酸含量和必需氨基酸含量达到了最大;在发芽过程中氨基酸含量增加30%以上的有甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr),其中,组氨酸(His)的增幅最大,为51.36%;天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、精氨酸(Arg)、丙氨酸(Ala)在发芽过程中含量变化不显著。     

脂肪酸合成酶基因(FASN)的研究进展

在哺乳动物中,脂肪酸合成酶在脂肪酸合成中起着至关重要的作用。它含有7个活性位点,在还原型辅酶Ⅱ的存在下,FASN负责乙酰辅酶A(acetyl-CoA)和丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)从头合成一种长链软脂酸(棕榈酸酯)的所有催化步骤。脂肪酸合成酶是脂肪合成的关键酶,并且在腹脂肪组织重变异及相关性状变异中起着重要作用。综述了FASN及其基因在生命活动中的地位、作用、定位、结构及FASN基因的遗传变异与生产性状关系的研究进展。     

对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法

木质素是绿色植物生长发育所需的重要化合物之一。肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是在木质素合成过程中,催化苯丙烷类合成途径第1步的关键酶。本文以其底物之一——对香豆酰辅酶A酯为例,以现有的辅酶A酯合成纯化的文献报道为参考,介绍经过整合改进并不断试验而得到的CCR底物的合成与纯化方法。从大肠杆菌中提取出来的重组酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)用于合成CCR底物,这比从植物组织中提取更易获得。提纯后的4CL可以在-80 ℃下保存3、4个月。4CL反应后的产物在2个不同梯度下通过C18反相柱进一步纯化,并用高效液相色谱仪监测。在整个纯化过程中,所有用于装载对香豆酸和对香豆酰辅酶A酯的容器都用锡箔纸完全包裹起来。最后提纯出来的产物用质谱和核磁共振检测。检测的结果表明,提纯出来的辅酶A酯单一性非常好。      

嗜水气单胞菌脂肪酸生物合成途径相关蛋白的耐药性

嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila是一种广泛存在于水体与土壤的人-畜-鱼共患病原菌。本课题组前期研究发现生物被膜状态下嗜水气单胞菌在抗生素金霉素的胁迫下,脂肪酸生物合成途径中相关蛋白表达上升,但具体特性与功能尚不明确。为进一步探究这些蛋白在抗生素胁迫下的变化规律与功能,设计引物克隆乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶α亚基(AccA)、乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(AccD)、酰基载体蛋白质合成酶(FabB)以及丙二酸单酰辅酶A酰基载体蛋白酰基转移酶(FabD)。通过比较各高表达菌株在金霉素作用下的生存率,来分析相关蛋白的耐药特性。结果表明,高表达AccD、FabB和FabD蛋白能够显著提高细菌在抗生素胁迫下的生存率,而高表达AccA蛋白则只在前期提高细菌存活率。此研究揭示脂肪酸生物合成途径相关蛋白在细菌的耐药过程中起重要作用,也为后续研究嗜水气单胞菌的耐药机制提供了实验依据。     

植物乙酰辅酶A羧化酶β亚基acc D在因研究进展

综述了乙酰辅酶A羧化酶及其催化域羧基转移酶(Carboxyltransferase,CT)的β亚基(β-CT)的分布和生理功能、β-CT编码基因accD的分子生物学特征及乙酰辅酶A羧化酶在脂肪酸代谢工程中的应用研究进展。     

水稻香豆酸辅酶A连接酶基因的分子克隆及一级结构分析

 香豆酸：辅酶A连接酶（4CL）是类黄酮生物合成过程中的关键酶之一。本文以水稻为材料分离、克隆了4CL基因，并测定了该基因的一级结构。水稻4CL基因含有5个外显子，共编码563个氨基酸。外显子/内含子交界顺序和多数已报道的其他植物基因相似，边界剪切位点符合GT-AG规则。编码区中同义密码有明显的偏态使用现象，导致整个编码顺序GC含量升高。在非编码区，除了有5'端真核生物基因启动转录所必需的TATA盒以及3'-端mRNA多A加尾信号之外，在TATA盒的上游有一个在碱基顺序和位置上都十分类似于“光盒”的结构。     

椰子乙酰CoA羧化酶(ACC)基因的鉴定及表达分析

[目的]克隆椰子的乙酰Co A羧化酶(ACC)基因.[方法]通过已发表的椰子转录组注释结果,鉴定潜在的椰子ACC基因.分析ACC基因在椰子果肉和嫩叶混合样转录组中的RPKM值,同时,采用实时定量PCR技术研究5个高RPKM值的ACC基因在椰子果肉发育的不同时期的表达情况.[结果]共获得21个椰子的ACC基因,这21个ACC基因在椰子果肉和嫩叶混合样品中有较高的表达量,4个ACC基因(Unigene7806、Unigene47155、Unigene7847和CL185.Contig1)在椰子果肉发育9个月时表达量最高.[结论]该研究为解析椰子脂肪酸积累的分子机制提供了前期工作基础.     

紫穗槐4-香豆酸:CoA连接酶基因的克隆和结构分析

该文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法从紫穗槐(Amorpha fruticosa)茎中克隆了木质素生物合成过程中重要的酶4-香豆酸:CoA连接酶(4CL)的cDNA全长序列,避免了复杂的构建、筛选cDNA文库的过程.所获得的全长4CLA cDNA,有1 911个碱基,包含一个完整的阅读框架,编码540个氨基酸.氨基酸序列同源性分析表明4CLA 是典型的4CL蛋白,含有预计的AMP-binding 位点,接触反应区和保守的Cys.     

Tyr527 is phosphorylated in pp60c-src: implications for regulation

The Rous sarcoma virus oncogene product, pp60v-src, transforms cultured fibroblasts but its corresponding proto-oncogene product, pp60c-src, does not. Both proteins are known to be protein-tyrosine kinases. Published results suggest that the kinase activity of pp60c-src is inhibited relative to that of pp60v-src, due perhaps to phosphorylation of a tyrosine in pp60c-src that is not phosphorylated in pp60v-src. In this study, it was observed that the tyrosine phosphorylated in pp60c-src is Tyr527, six residues from the COOH-terminus of the protein. The region of pp60c-src from residue 515 to the COOH-terminus, including Tyr527, has been replaced with a different sequence in pp60v-src. Thus, the increase in transforming ability and kinase activity that occurred in the genesis of pp60v-src may have resulted from the loss of a tyrosine involved in negative regulation.     

毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶338Val缺失突变分析

通过对毛白杨中的4--香豆酸:辅酶A连接酶1（Pt4CL1）蛋白第338位缬氨酸进行缺失突变,从而获得了具有芥子酸催化活性的Pt4CL1蛋白突变体338dVal。与野生型4CL1蛋白活性相比较,该突变体获得了催化芥子酸的活性,比活力是(162±034) nkat/mg。同时,对4--香豆酸催化活性有轻微的降低（约降低12％）,对咖啡酸的催化活性有明显增加（约增加126％）,对阿魏酸的催化活性有部分的降低（约降低29％）,对肉桂酸的催化活性没有显著变化。该结论证实了第338位缬氨酸对底物芥子酸5位甲氧基具有空间位阻效应。该项研究为通过基因工程技术调控木质素的合成提供了新的方法。      

Oxidative damage linked to neurodegeneration by selective alpha-synuclein nitration in synucleinopathy lesions

Aggregated alpha-synuclein proteins form brain lesions that are hallmarks of neurodegenerative synucleinopathies, and oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of some of these disorders. Using antibodies to specific nitrated tyrosine residues in alpha-synuclein, we demonstrate extensive and widespread accumulations of nitrated alpha-synuclein in the signature inclusions of Parkinson's disease, dementia with Lewy bodies, the Lewy body variant of Alzheimer's disease, and multiple system atrophy brains. We also show that nitrated alpha-synuclein is present in the major filamentous building blocks of these inclusions, as well as in the insoluble fractions of affected brain regions of synucleinopathies. The selective and specific nitration of alpha-synuclein in these disorders provides evidence to directly link oxidative and nitrative damage to the onset and progression of neurodegenerative synucleinopathies.     

The development of the 2, 4-dienoyl CoA reductase 1 gene （DECR 1） in pig

2,4-dienoyl CoA reductase gene(DECR 1)is mapped on pig 4 q 1.2,includes ten exons and nine introns of variable size that span 30 kb.DECR 1 gene participates in theβ-oxidation pathway,affects the content of intramuscular fatty acid,especially the percentage of linoleic acid.The expression of DECR 1 gene has important influence on IMF,the pH,and the meat colour of pork, further affects the meat quality.     

口山酮生物合成路径及其关键酶的研究进展

口山酮是一种特殊的黄酮类化合物,也是藏药中含量最高、生物活性较强、药用价值和经济价值丰富的一类有效成分。目前认为,3-羟基苯甲酸辅酶A连接酶、二苯甲酮合成酶和口山酮合成酶是口山酮生物合成路径中的关键酶。文章对口山酮的结构类型、功能及其在植物中的分布,以及口山酮的生物合成路径与关键酶进行综述,并对相关研究进行了展望。     

The cellular src gene product regulates junctional cell-to-cell communication

Overexpression of the cellular src gene in NIH 3T3 cells causes reduction of cell-to-cell transmission of molecules in the 400- to 700-dalton range. This down-regulation of gap junctional communication correlates with the activity of the gene product, the protein tyrosine kinase pp60c-src. The down-regulation was enhanced by point mutation of Tyr527 (a site that is phosphorylated in pp60c-src and that inhibits kinase activity) or by substitution of the viral-src for the cellular-src carboxyl-terminal coding region. Mutation of Tyr416 (a site phosphorylated upon Tyr527 mutation) suppresses both the down-regulation of communication by Tyr527 mutation and that by gene overexpression. The regulation of communication by src may be important in the control of embryonic development and cellular growth.     

Isolation and Characterization of a Cinnamoyl CoA Reductase Gene（CCR） in Pear（Pyrus pyrifolia）

Pear is a popular and commercially important fresh fruit, and its texture is related to the presence of sclereid formatted by parenchyma cell with lignification in vascular plants. Previous studies have demonstrated that content of lignin may be regulated by cinnamoyl CoA reductase（CCR） in various plants. However, the function of CCR in pears remains very limited. In the present study, we isolated a cDNA encoding CCR（PpCCR, GenBank accession No. KF999958） and its promoter（proPpCCR） from Whangkeumbae pear to investigate the function of CCR in lignin biosynthesis. PpCCR-GFP expressed in rice mesophyll protoplast demonstrated that PpCCR-GFP was localized in the cytoplasm, indicating that CCR may function in cytoplasm without localization signals. In transgenic plants carrying PpCCR, we observed higher lignin content compared with that in wild type plants, further suggesting that PpCCR can affect the lignin contents through regulating lignin biosynthesis in Arabidopsis thaliana. More studies in other plants are needed to confirm our conclusion.