利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０－１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异；９０－１１２－４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨｏｏ ２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合组合的融合频     

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌 Ⅲ.融合子产生新活性物质的分离、精制和初步鉴别

农抗５１０２产生菌同源菌株９０１１和ＦＲ００８的原生质体融合重组子ＳＲ７能产生１种两亲本所没有的抗细菌活性物质。该物质可用７２４弱酸性阳离子树脂从发酵滤液中吸附,以７％硫酸解吸后,经７１７强碱性阳离子树脂柱层析精制。经热稳定性、酸碱稳定性、纸电泳、纸层析谱、紫外吸收光谱和呈色反应等多项试验检测,初步判定为１种强碱性水溶性氨基糖苷类抗生素。它具有广谱抗Ｇ＋、Ｇ－细菌的活性,对各种真菌和酵母无活性。     

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅰ.原生质体的制备、再生和融合

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。     

农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究——Ⅰ. 影响原生质体形成和再生的因素

本文报道了溶菌酶的浓度,酶解温度、时间,生长培养基成分和上再生培养基成分等因素对农抗5102产生菌两个营养缺陷型菌株的原生质体形成和再生的影响。实验结果表明:溶菌酶用量为4mg/ml时,合适的酶解温度和时间是32℃,1.5小时;生长在PM_1培养基和有机A培养基上的菌丝细胞壁对溶菌酶最敏感;原生质体不仅可以在高渗的RM_2培养基上形成菌落,而且也可以在非高渗的PM_1培养基上形成菌落;补充10%蔗糖的PM_1培养基上生长的菌丝可以增加对溶菌酶的敏感性和原生质体的再生频率;当原生质体在4℃中贮存24小时和48小时后,再生频率可分别下降达76%和和94%。     

农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究——Ⅱ影响原生质体融合的因素

用农抗5102产生菌的两株不同营养缺陷型突变体WNF-2-1-90和WNF-2-1一135所进行的原生质体融合条件试验。结果表明,1000、4000和6000三种分子量的PEG,各以30%、40%和50%的浓度加入两株突变体的混合原生质体悬液,其融合率达1.8-4.1%,比不加PEG的提高2-7倍;较佳的PEG浓度,则因其分子量不同而异,1000PEG的诱导效果随加入浓度升高而增大,余二者则相反。混合原生质体悬液在4℃和28℃中放置4小时后,其融合率几乎和加PEG的相近。融合前立即用UV照射混合原生质体悬液,其融合率比未照射的提高2倍以上。比较直接选择法和间接选择法检出融合子,表明间接法比直接法检出的要高1倍以上。     

链霉菌融合子SR-7产生抗细菌新活性物质的适宜条件

研究表明,链霉菌融合子ＳＲ－７抗细菌新活性物质的适宜发酵条件为：选用５１０２－Ｉ号素培养基,在２８℃下,扔瓶发酵９６￣１２０ｈ左右。