5种胃肠激素样内分泌细胞在斜带石斑鱼稚鱼期消化道中的定位

5-Hydroxytryptamine, 5-HT）、生长抑素（）、P物质（     

6 种胃肠激素样内分泌细胞在细鳞鲑消化道的定位

采用免疫细胞化学ABC方法,选择5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、生长抑素(somatostatin,SS)、胰多肽(pancreatic polypeptide,PP)、胃泌素(gastrin,GAS)和P物质(substance P,SP)6种特异性哺乳类胃肠激素抗血清,对不同年龄段(1龄、2龄和3龄)细鳞鲑(Brachymystax lenok)的消化道内分泌细胞进行了免疫细胞化学定位研究.结果表明,仅在食管、胃贲门、胃体和胃幽门检出有5-HT、SS和PP阳性细胞的分布(除1龄鱼食道),且这3种内分泌细胞均大量定位于胃部;在前肠、中肠、后肠和直肠中均未检测到这3种内分泌细胞的阳性反应.在3个年龄段的细鳞鲑胃肠各部位均未检测到GAS、GLU和SP阳性细胞.细鳞鲑的5-HT、SS和PP与其他有胃鱼类的内分泌细胞一样,可分为2种类型,即开放型和闭合型,这类细胞主要通过腔分泌和旁分泌两种方式释放激素.5-HT、SS和PP这3种细胞在1龄幼鱼消化道内就已经发育成熟,其对胃肠道活动的调节作用已经与成鱼没有差别,细胞的分布密度随着细鳞鲑的年龄增长不断增加.本研究揭示了不同生长阶段细鳞鲑消化道中这6种胃肠激素内分泌细胞的发育特征,并阐明了这些胃肠激素细胞在细鳞鲑幼鱼消化道的分布、形态以及生理作用.     

斜带石斑鱼Epinephelus coioides(Hamilton)消化道的组织学及四种内分泌细胞的免疫组织化学定位研究

本研究主要应用H.E染色和SABC免疫组织化学方法对斜带石斑鱼消化道进行了研究,结果表明:斜带石斑鱼消化道由食道、胃、幽门盲囊、小肠和直肠构成.食道粘膜表面为复层上皮细胞,表面为一层扁平细胞.下层为杯形细胞,伴有大量的粘液细胞.胃为v形,粘膜表层为单层柱状上皮细胞,贲门和盲囊部上皮下有一层较厚的胃腺组织;由单一柱状腺细胞组成.小肠上皮为具微绒毛的单层柱状上皮,其间分布有大量的杯形细胞.本研究讨论了斜带石斑鱼消化道组织学特征与消化、吸收的关系,认为斜带石斑鱼消化道基本具备典型肉食性鱼类消化道特征,但也有其自身明显的特征,如幽门盲囊非常发达,小肠较一般肉食性鱼类细长,这与其对食物的同化能高达90%的特征相适应.SABC免疫组织化学结果:5-HT免疫阳性细胞在消化道各段均有分布;STT免疫阳性细胞在胃中分布数量最多,肠道次之,在食道和幽门盲囊中未检测到该种免疫阳性细胞;Gas免疫阳性细胞分布于胃幽门部和前肠、中肠,食管、胃贲门部和胃体部和后肠未检出;PP免疫阳性细胞在消化道各段均未检出.     

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交子代幼鱼消化道粘液细胞和胃泌素细胞的研究

利用组织化学(AB-PAS)和免疫组织化学(SABC)的方法分别对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides♀)×鞍带石斑鱼(E.lanceolatus♂)杂交子代(青龙斑)幼鱼消化道的粘液细胞和胃泌素(gastrin,Gas)分泌细胞的分布进行系统的研究。青龙斑幼鱼食道中有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型粘液细胞,含中性粘多糖和酸性粘多糖。贲门胃粘液细胞有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ种类型,胃体部有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型粘液细胞,在胃腺的周围含有较多的Ⅰ和Ⅳ型粘液细胞,而幽门胃中只有Ⅰ型粘液细胞,只含有中性粘多糖。幽门盲囊和肠道都含有中性粘多糖和酸性粘多糖,幽门盲囊以Ⅱ型粘液细胞最多,少量的Ⅲ型粘液细胞,前肠、中肠和后肠均有4种类型的粘液细胞。肠道粘液细胞数量为中肠>后肠>前肠。利用免疫学的方法研究青龙斑幼鱼消化道Gas细胞的分布,表明幼鱼的整个肠道和幽门盲囊均有Gas细胞的存在,食道和胃中未发现Gas免疫阳性细胞。     

点带石斑鱼仔稚鱼消化系统黏液细胞的类型与分布

利用组织学切片及AB-PAS组化染色技术对点带石斑鱼0～28日龄仔稚鱼消化道(口咽腔、食道、胃、肠)不同类型黏液细胞的发生与发育进行了系统的研究.点带石斑鱼黏液细胞分成Ⅰ～Ⅳ共4种着色类型和囊状、梨状、杯状3种形态类型.结果表明,点带石斑鱼黏液细胞最早出现在3日龄仔鱼的口咽腔部位.12日龄之前的黏液细胞数量较少,且主要以Ⅱ型为主,形态上主要为囊状细胞.12～15日龄黏液细胞的数量出现急剧增长,其空间分布模式也随之基本形成.之后日龄的样本中,黏液细胞以Ⅲ、Ⅳ型为主,而Ⅰ、Ⅱ型黏液细胞所占比例较低.口咽腔、食道的黏液细胞以囊状、梨状为主,胃、肠黏液细胞早期为囊状,随后梨状细胞逐渐增多,最终以杯状细胞为主.食道前段、肠前段的黏液细胞存在显著的差异,但此两段均为黏液细胞的主要分布场所.     

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交子代仔、稚鱼的异速生长

应用实验生态学的方法研究斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)(♀)×鞍带石斑鱼(E. lanceolatus)(♂)杂交子代(青龙斑)仔、稚鱼阶段的生长模式。利用Q-Capture Pro 6软件对仔、稚鱼(0~28日龄)的全长、肛前长、体高、头长、眼径、口径、第二背鳍棘、腹鳍棘、胸鳍、臀鳍和尾鳍等11个可量性状进行拍照和测量。研究表明青龙斑全长的生长可分为3个阶段, 不同阶段生长速率存在显著差异(P<0.05)。各功能器官均表现为异速生长。在11个可量性状中, 肛前长为等速生长, 头长和体高的生长由正异速生长分别转变为等速生长和负异速生长; 头部器官(口径和眼径)生长在20 ~22日龄时出现拐点, 拐点后分别转变为等速生长和负异速生长; 运动器官在拐点前均为正异速生长, 除臀鳍外, 其他各鳍的生长均存在不同的拐点。通过对青龙斑仔、稚鱼异速生长的研究, 发现在早期发育过程中, 有关摄食、感觉、运动等功能器官得到优先发育。在人工繁殖苗种的培育中, 可根据青龙斑重要器官发育的优先性, 创造有利的外部环境, 提高苗种的成活率。

     

[11]斜带石斑鱼亲鱼周年产卵的观察及仔鱼活力判别

对5～7龄斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)亲鱼的周年产卵、产卵量、卵质以及初孵仔鱼活力的判别进行了观察研究.亲鱼共231尾,雌、雄、性别不明鱼样的数量比例为88:84:59;养殖于面积为4 000 m2,平均水深为2.0 m的土池中;冬季使用温泉加温管控制水温在18～26℃,夏季通过遮阳网控制水温在26～32℃.结果显示:(1)斜带石斑鱼亲鱼每月均可产卵,在水温25～31℃之间产卵量最多.全年产卵天数共为141 d,总产卵量为184 999.6万粒,平均每尾雌鱼的年产卵量为2 102.3万粒,其中,1月中旬到7月下旬是亲鱼的产卵盛期,共产卵108 d,占全年产卵时间的76.6%;产卵166 133.5万粒,占全年产卵量的89.8%.(2)斜带石斑鱼卵的受精率和孵化率在初夏的产卵盛期可达80%～90%,其他季节一般在30%～60%.(3)测定了15批受精卵所孵化出仔鱼的存活力指数SAI值为3.98～18.30,SAI值与卵的受精率、孵化率呈正相关性;只有SAI值高于6.19的仔鱼才有可能被成功培育成苗.因此,在春夏之交和夏秋之交,水温24～28℃时,选用受精率、孵化率和SAI值较高的受精卵进行人工育苗,获得成功可能性最大.     

鱼类消化道内分泌细胞概述及研究方法

消化道内分泌细胞能产生多种具有调节胃肠功能的胃肠激素。该类激素除了能促进胃肠对营养物质的消化与吸收外,还能控制摄食行为、调控消化道运动以及细胞营养作用,甚至能够影响其他一些内分泌腺的活动。了解肠道内分泌细胞的基本概况有助于深入地研究鱼类的消化生理,组织化学、免疫细胞化学和电子显微镜等技术是研究消化道内分泌细胞鉴别、定位...     

鱼类消化道内分泌细胞概述及研究方法

消化道内分泌细胞能产生多种具有调节胃肠功能的胃肠激素。该类激素除了能促进胃肠对营养物质的消化与吸收外,还能控制摄食行为、调控消化道运动以及细胞营养作用,甚至能够影响其他一些内分泌腺的活动。了解肠道内分泌细胞的基本概况有助于深入地研究鱼类的消化生理,组织化学、免疫细胞化学和电子显微镜等技术是研究消化道内分泌细胞鉴别、定位以及形态学的重要方法,利用这些技术能够揭示鱼类消化道内分泌细胞的生物功能及作用机理,对研究鱼类摄食、消化和吸收等生理机制有重要意义。因此,本文综述了近年来国内外鱼类消化道内分泌细胞的研究进展及主要研究手段,旨在为鱼类消化生理学、内分泌学和营养学提供参考资料。     

斜带石斑鱼生长激素cDNA克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

通过构建斜带石斑鱼垂体cDNA文库,克隆了其生长激素(GH)全长cDNA。斜带石斑鱼GH全长cDNA为955bp,编码的多肽为204aa。应用PCR方法把编码GH成熟肽的cDNA片段克隆到表达载体pET-15b,在大肠杆菌BL21(DE3)表达N端含6个组氨酸的融合多肽。SDS-PAGE结果表明,0.4mmol·L-1IPTG诱导表达的蛋白约为24kDa,主要为不溶性的包含体。细菌裂解液沉淀溶于6mol·L-1盐酸胍后,用Ni2+-NTA树脂进行亲和分离纯化,纯化产物在SDS-PAGE上表现为一条24kDa的蛋白带。在黑鲷GH放射免疫分析系统中,纯化产物能与黑鲷GH竞争结合GH抗体,表明大肠杆菌表达的斜带石斑鱼GH融合多肽具有GH免疫活性。     

Quantitative l-lysine requirement of juvenile grouper Epinephelus coioides

An 8‐week feeding trial was conducted to determine the quantitative lysine requirement of juvenile grouper Epinephelus coioides (initial mean weight: 15.84 ± 0.23 g, mean ± SD) in eighteen 500‐L indoors flow‐through circular fibreglass tanks provided with sand‐filtered aerated seawater by feeding diets containing six levels of l ‐lysine ranging from 19.2 to 39.5 g kg^?1 dry diet in 4 g kg^?1 increments. The diets, in which 250 g crude protein kg^?1 diet came from fish meal and soybean protein concentrate, and 230 g kg^?1 from crystalline amino acids, were formulated to simulate the amino acid profile of 480 g kg^?1 whole chicken egg protein except for lysine. Each diet was assigned to three tanks in a completely randomized design. Grouper were fed to apparent satiation twice daily during the week and once daily on weekends. Weight gain and specific growth rate increased with increasing levels of dietary lysine up to 27.2 g kg^?1 (P < 0.05) and remained nearly the same thereafter (P > 0.05). Feed efficiency was the poorest for fish fed the lowest lysine diet (P < 0.05) and showed no significant differences among other treatments (P > 0.05). Survival could not be related to dietary treatments. Body composition remained relatively constant except for lipid contents in muscle and liver. Total essential amino acid contents in liver increased with dietary lysine level although there was a slight decline for fish fed the highest lysine level of diet. Plasma protein content increased with increasing dietary lysine level (P < 0.05), but cholesterol, triacylglycerol and glucose contents were more variable and could not be related to dietary treatments. Dietary lysine level significantly influenced morphometrical parameters (condition factor, hepatosomatic index and intraperitoneal fat ratio) of juvenile grouper (P > 0.05). Broken‐line analysis of weight gain indicated the dietary lysine requirement of juvenile grouper to be 28.3 g kg^?1 diet or 55.6 g kg^?1 dietary protein.     

Iron bioavailability of different sources in juvenile grouper Epinephelus coioides

A 70‐day experiment was implemented to study the iron (Fe) bioavailability of three Fe sources in Epinephelus coioides (initial weight, 12.19 ± 0.14 g). Treatments consisted of 0, 50, 90, 130, 170 and 210 mg supplemental Fe/kg from iron sulphate (FeSO₄), ferric citrate (Fe‐citrate) and hydroxy methionine analogue iron (Fe‐MHA). The results showed that the growth performance was not affected by Fe level regardless of Fe sources. Hepatic catalase activity (CAT), the haematocrit value (Hct), haemoglobin (Hb), mean corpuscular volume (MCV) and Fe content in whole body or liver firstly increased significantly and then plateaued as Fe level increased regardless of the Fe source, except significant decreasing of Hct in 210 mg Fe/kg group from FeSO₄. Manganese (Mn) content decreased significantly and then kept stable in the whole body and liver whatever the source was. The slope‐ratio method using FeSO₄ as the reference and Hb content, CAT activity, body and hepatic Fe concentration as the response parameter showed the average relative bioavailability of Fe‐citrate and Fe‐MHA was 103.25 ± 4.35 (n = 4) and 134.5 ± 15.67 (n = 4), respectively, with the maximum value of Fe‐MHA in any case. In conclusion, Fe‐MHA was the most effective to meet preferable haematological index, CAT activity and mineral deposition, with little difference between Fe‐citrate and FeSO₄, athough Fe levels with different sources failed to influence the growth in grouper.     

几种饲料对斜带石斑鱼消化酶活性的影响

本文分析了不同饲料对斜带石斑鱼消化酶活性的影响。将1 500尾斜带石斑鱼随机分成3组,每组2个重复,分别用3种不同饲料投喂50 d,从每个平行组中随机抽取5尾鱼测体内消化酶活性。结果表明,不同饲料种类、成分均对斜带石斑鱼体内消化酶活性有明显影响,在本试验中,投喂2号饲料的斜带石斑鱼淀粉酶活性最高,3号饲料整体蛋白酶活性最高,脂肪主要在肠道消化,3种饲料脂肪酶活性在肠道中差异不显著。     

斜带石斑鱼幼鱼的饲料精氨酸需求量

通过配制7种含不同水平精氨酸(2.13%、2.42%、2.71%、2.95%、3.20%、3.48%、3.74%干物质)的等氮、等脂的实验饲料,研究精氨酸对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)幼鱼生长、饲料利用和血清一氧化氮合酶等的影响。每组设3个重复,每个重复30尾鱼(7.52±0.02g),饲喂8周。结果显示,饲料精氨酸水平对各组存活率无显著影响(P0.05);精氨酸水平为2.95%的斜带石斑鱼获得最大增重率和特定生长率,显著高于其他各组(P0.05);2.95%组饲料系数显著低于2.13%、2.42%和2.71%组(P0.05);3.20%组体蛋白达到最大,显著高于2.13%组(P0.05)。随着饲料中精氨酸水平的增加,斜带石斑鱼幼鱼血糖含量呈逐渐降低的趋势,2.13%与2.42%组显著高于其他各组(P0.05)。2.95%组血清总蛋白和血清总一氧化氮合酶显著高于其他各组(P0.05)。研究表明,日粮中适宜的精氨酸水平不仅能促进斜带石斑鱼幼鱼生长和体蛋白的合成,还能提高机体免疫力。以特定生长率为判据,通过二次多项式回归分析表明,斜带石斑鱼幼鱼精氨酸的最适需要量是饲料干重的3.06%(饲料蛋白含量的6.07%)。     

斜带石斑鱼消化系统胚后发育的组织学研究

利用形态学和连续组织切片技术,对出膜后1-60d的斜带石斑鱼各期仔鱼、稚鱼和幼鱼的消化系统进行了光镜观察,描述了其消化器官发育过程和组织学特性。研究表明,实验水温为22.0-27.8℃时,孵化后第4天,上下颌形成,卵黄囊被吸收,消化系统明显分化成食道、胃、肠、直肠以及肝脏、胆囊和胰脏等,鱼体由内源性营养转向外源性摄食营养,表明其消化系统的形态变化与食性的变化相适应。此后随着鱼体的生长,其消化系统从功能和结构上逐步完善成熟。胰脏在出膜后第4天出现,是和肝脏相互分开的一个独立的器官,但是发育到第35-60天,位于肠道后部的胰脏组织内出现许多大空泡。     

鲻鱼胃肠道内分泌细胞免疫组织化学的定位

用7种哺乳类胃肠激素抗体对鲻鱼消化道内分泌细胞进行免疫组织化学定位。结果表明5-HT、SST、VIP、GAS和P物质免疫活性内分泌细胞均存在于鲻鱼胃肠粘膜中，而胰高血糖素和胰岛则显免疫阴性反应。文中还描述了鲻鱼胃肠道免疫活性内分泌细胞的形态学特点及在胃肠各部的分布密度，并对其可能的分泌方式和功能进行了讨论。     

石斑鱼仔稚鱼微粒子配合饲料系列产品研制

根据石斑鱼仔稚鱼的营养需求,精选原料,筛选配方,研制出石斑鱼仔稚鱼微粒子配合饲料,通过测定其散失率和沉降速度,筛选出较适宜的粘合剂配方为褐藻胶1.5%,胶原蛋白3.5%混合使用。分析石斑鱼仔稚鱼微粒子配合饲料的脂肪酸和氨基酸组成,结果表明其n3HUFA组成占19.4%,与小球藻轮虫的20%～28%非常接近;10种必需氨基酸的组成合理。所研发的饲料安全限量符合NY5072《无公害食品渔用配合饲料安全限量》的要求,第20d到第45d,投喂微粒子配合饲料的点带石斑鱼鱼苗成活率3.3%,优于对照组的3.1%。