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《中国预防兽医学报》2017,(3)
为建立鸡白痢沙门氏菌与其他常见致病性沙门氏菌的血清型特异性快速PCR检测方法,本研究通过对Gen Bank中鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌全基因组进行生物信息学分析,确定SEEP17495基因为鸡白痢沙门氏菌的检测靶基因,设计特异性引物,建立了一种能够直接从粪便样品中检测鸡白痢沙门氏菌的PCR检测方法。结果显示:该方法对于两株鸡白痢沙门氏菌均可以特异性地扩增出356 bp的目的片段,但对于7株常见非沙门氏菌致病菌和29株其他常见致病性沙门氏菌血清型的扩增结果均为阴性。该方法无论检测鸡白痢沙门氏菌纯培养菌,还是检测模拟鸡粪样品中的鸡白痢沙门氏菌,检测的灵敏度均为103cfu/m L。本研究建立的PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性,并且能够快速检测出粪便样品中的鸡白痢沙门氏菌,为鸡白痢沙门氏菌的检测提供了一种快速、有效的方法。 相似文献
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为实现沙门氏菌的快速检测,根据沙门氏菌特异性invE、hilA、invA、hut基因编码区序列,分别设计合成4套引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了以invA特异性基因设计合成为引物的沙门氏菌环介导等温扩增检测方法。本方法对沙门氏菌定性检测灵敏度可达到101CFU/mL (细菌浓度),其灵敏度比普通PCR高10倍且反应结果易于观察。以6种沙门氏菌和8种非沙门氏菌细菌DNA为模板进行LAMP扩增检测,并无交叉反应。结果显示,设计的LAMP引物组和建立的沙门氏菌的LAMP检测方法具有特异性好、灵敏度高、快速、费用低廉等优点,可应用于动物和食品样品中肠道沙门氏菌6个亚种的快速检测。 相似文献
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PCR技术检测饲料中沙门氏菌的应用研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用聚合酶链反应(PCR)技术检测饲料中沙门氏菌,对已知被沙门氏菌污染的动物饲料培养物均能检出阳性,说明本方法对检测饲料中沙门氏菌具有特异性高、灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测饲料中沙门氏菌的需要。 相似文献
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建立依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明:采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50 μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10 μg,T4 gp32添加量为5.0 μg,得到与设计序列长度(304 bp)一致的扩增产物,检出限为2.6×102 CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。 相似文献
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建立一种多重PCR方法,同时检测肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌。针对沙门氏菌属特异性invA基因、肠炎沙门氏菌特异性Sdf I序列、鼠伤寒沙门氏菌特异性STM4497基因、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌flhB基因设计引物,对引物浓度和反应条件进行优化,并对多重PCR特异性和灵敏度进行评估。利用建立的多重PCR方法调查河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌流行现状。研究建立的多重PCR方法可快速、特异性鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌,最低检出限为100 CFU细菌和0.5 ng基因组DNA。沙门氏菌流行病学调查显示,肠炎沙门氏菌是河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌主要流行血清型。成功建立鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌的多重PCR方法,对沙门氏菌流行病学调查及临床快速诊断具有重要意义。 相似文献
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变性高效液相色谱高通量检测动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌 总被引:5,自引:0,他引:5
应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,通过通用增菌培养,建立动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌的快速高通量检测方法.根据沙门氏菌和志贺氏菌特异基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测.以49株参考菌株做特异性试验,并开展了精密度检测试验.试验结果表明,该方法具有很好的特异性和精密度,经通用增菌和复合PCR-DHPLC技术可同时检测饲料中的沙门氏菌和志贺氏菌.该方法可以快速、准确、高通量检测,是动物源性饲料中致病菌高通量检测的新技术. 相似文献
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为建立一种能快速、准确、简便区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的方法,研究通过对鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌pegB序列进行分析,发现存在3个单核苷酸多态性位点,基于此建立了一种特异性PCR方法用于鉴别鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌。结果显示,该方法特异性强、耗时短,检测限为10.14 pg/反应。临床样品检测表明,该方法不仅具有良好的特异性,且操作比传统方法更为简便。该方法的建立为准确区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌提供了实用技术,将在分子检测中发挥重要作用。 相似文献
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鸡白痢沙门氏菌PCR检测技术的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为鸡沙门氏菌的临床检测提供了一种更快速、敏感、特异的诊断,参照GeneBank中已公布的的鸡白痢沙门氏菌fliC基因序列,合成出了一对引物,使用PCR法对1株沙门氏标准菌株和其他3株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增并检测其敏感度。采用上述技术,对12份可疑病料及10份饲料进行PCR检测,同时与传统检测方法进行比较。结果表明1株沙门氏菌PCR产物出现600 bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明所设计引物具有沙门氏菌特异性;通过敏感度检测,此PCR体系能检出50 pg以上的细菌DNA,敏感性较高。运用PCR法阳性检出率及敏感性均高于常规检测方法。由此可见,沙门氏菌PCR检测是一种快速、敏感和高度特异的诊断方法。 相似文献
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荧光定量PCR快速检测食品中沙门氏菌方法的建立及初步应用 总被引:20,自引:0,他引:20
根据编码鼠伤寒沙门氏菌肠毒素stn基因的核苷酸序列设计1对引物和荧光探针,通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索,建立了检测沙门氏菌的核酸荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究结果显示,该方法检测沙门氏菌结果均为阳性,而非沙门氏菌均为阴性;对带有沙门氏菌肠毒素stn基因的阳性质粒的检测敏感性为4个/μL。用该方法对人工污染沙门氏菌的鲜猪肉和鲜鸡蛋进行检测,当检样中沙门氏菌初始含菌量分别为1CFU/g(鲜猪肉)和1CFU/g(鲜鸡蛋),经过12h的增菌后,检测结果均为阳性。该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点。此研究为食品中沙门氏菌快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。 相似文献
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应用PAS-β-萘酸酯法(光声光谱-β-萘酸酯法)检测桑叶与家蚕被农药污染情况,具有准确、快速、适应性广等优点,可以定性检测,也可定量检测。应用实例表明,这项技术对检测农药污染,实用性强,有广阔应用前景,并可作为探索家蚕农药中毒机理等方面的研究手段。 相似文献