豆豉纤溶酶的研究进展

综述了含豆豉纤溶酶基因的枯草杆菌的筛选,酶的分离提取、酶学性质、活性测定,豆豉纤溶酶基因的克隆、表达以及动物溶栓药效试验的研究进展。     

豆豉纤溶酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据已发表的豆豉纤溶酶基因DNA序列(GeneBank AY720895.2),设计并合成了一对引物,应用PCR技术以筛选的来自豆豉的产纤溶酶的芽孢杆菌的总DNA为模板,扩增出了豆豉纤溶酶基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,进行了序列测定,测序结果经Genetool序列分析表明该基因长1 089 bp,编码363个氨基酸,与已发表Brevibacillus laterosporus豆豉纤溶酶基因序列在核苷酸水平上与所发表的序列有98%的同源性;在氨基酸水平上与已发表的芽孢杆菌豆豉纤溶酶同源性为100%。并将该基因克隆到大肠杆菌表达载体pET22b上,在大肠杆菌中实现了高效表达。     

豆豉纤溶酶产生菌的筛选

以新鲜的猪血制取的猪血粉作为培养主要基质进行产纤溶酶菌株的筛选,经平板法初筛,从3个不同来源的豆豉样品中筛选出10株较高纤溶活性的菌株.通过摇瓶复筛确定1个产酶活性最高的菌株HN3,液体发酵确定其产酶最适温度、时间分别为30 ℃、96 h.     

豆豉纤溶酶基因在枯草杆菌中表达的研究进展

文中介绍了豆豉纤溶酶的分子生物学特性及其基因在宿主表达菌——枯草杆菌中表达的研究进展。     

豆豉纤溶酶高产突变株的选育

[目的]从豆豉中筛选出高产纤溶酶的菌株,并通过平板筛选得到高产突变株。[方法]从6种不同豆豉样品中,筛选得到具有较高纤溶酶活性的菌株,采用物理化学诱变方法进行复合诱变,再利用纤维蛋白平板对诱变后菌株进行筛选。[结果]得到1株高纤溶酶活力菌株,命名为DC-YC41,酶活达到742 IU/ml。[结论]初步判断,得到的这株高纤溶酶活力菌株为枯草芽孢杆菌。     

豆豉纤溶酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达豆豉纤溶酶基因。[结果]经PCR扩增可获得约1.1 kb的DNA片段。序列分析表明所克隆DNA片段包含1个1089 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。该克隆基因与所发表的豆豉纤溶酶基因序列的核苷酸序列同源性为98%,而氨基酸序列同源性达100%。[结论]所克隆的豆豉溶纤酶基因在毕赤酵母中成功表达,且表达产物具有正常的生物学活性。     

豆豉纤溶酶产酶菌的筛选及菌种保藏

[目的]从豆豉产品中筛选分离活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌,并对菌种进行保藏。[方法]用自制的猪血粉为底物配制筛选培养基进行豆豉纤溶酶产酶菌的筛选,然后根据水解圈的大小筛选活性高的产酶菌株,最后将其保藏于LB培养基中。[结果]成功从湖南、广东、江西等地产的豆豉中筛选到一株溶栓活性相对较高的产酶菌。[结论]该研究为新型溶栓药物的开发奠定了基础。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化

用硫酸铵分级盐析, 透析除盐及 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ—纤维素、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－ ２５ 和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ ５０ 三种柱层析方法从蚯蚓组织提取液中分离纯化一种单一组分的纤溶酶。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺研究

对人工饲养的北星二号蚯蚓纤溶酶的分离纯化表明，其较佳工艺为磷酸缓冲液保温或匀浆提取，Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＡ－９０４或ＤＥＡＥ－纤维素柱层析，Ｓｅｐｈａｄｅｓ Ｇ－１００凝胶过滤，真空冷冻干燥，按此工艺可得到纤溶化活力为８３７００ｍｍ＾２／ｍｇ。蛋白的蚯蚓纤溶酶。     

Bacillus subtilis Z-3菌株纤溶酶的分离纯化研究

为获取微生物源溶栓药物,从土壤中获得产纤溶酶活性较高的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Z-3。从Z-3菌株的发酵液中提取纤溶酶,利用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和聚丙烯酰凝胶电泳等方法,对纤溶酶进行分离纯化。分离纯化得到1个单一组分(BSFE-1),SDS-PAGE电泳检测为单一条带,BSFE-1表观分子量为48 kDa,等电点为10.5,属丝氨酸蛋白酶类,纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性BSFE-1的比活力为4 494.099 U/mg,BSFE-1在4~50℃和pH 4~11之间活性较稳定。     

根霉Yc1发酵豆渣产纤溶酶的研究

[目的]研究根霉Yc1以豆渣为原料经液态发酵产生纤溶酶的发酵条件。[方法]采用单因素试验与正交设计方法对根霉Yc1培养基及发酵工艺条件进行优化。[结果]根霉Yc1发酵产酶的适宜培养基组成为：麸皮5．00％,豆渣粉3．00％,ZnCl2 0．03％,MgSO。0．15％,Na：HPO4 0．05％;适宜的发酵工艺条件为：发酵温度32℃,初始pH值7．0,250ml三角瓶装液量60ml,摇瓶转速180r／min。在优化条件下培养60h,纤溶酶的发酵效价可达176．2U／ml,比优化前提高92．3U／ml。[结论]以豆渣为主要原料所产的纤溶酶可能成为一种安全、低毒的溶栓剂,其生产成本低,可为大豆综合利用提供新的思路。     

豆豉纤溶酶对枯草杆菌WB800的影响

[目的]研究豆豉纤维酶（DFE）在枯草杆菌WB800中的生理功能。[方法]以能够合成DFE的重组菌株WB800/pBE3.DFE为试验菌株,研究其产孢率和在各外界胁迫下的耐受性。[结果]菌株WB800/pBE3和WB800/pBE3.DFE在产孢培养基中发酵24 h后,菌株WB800/pBE3.DFE的产孢率仅比对照菌株高9.6%;继续发酵至48 h,菌株WB800/pBE3.DFE的产孢率提高到了83.3%,而对照菌株的产孢率只有57.0%。表明DFE可以提高枯草杆菌的产孢率。在酸性、NaCl、高温、H2O2胁迫下,菌株WB800/pBE3.DFE的耐受性要高于对照菌株。可见,DFE很可能通过调节产孢机制来提高枯草杆菌的耐受性。[结论]该研究初步揭示了DFE在枯草杆菌中的生理功能,为DFE的应用奠定了理论基础。     

复合酶制剂在动物生产中的应用研究进展

酶制剂是一种绿色饲料添加剂,在动物新陈代谢过程中发挥着重要的作用。文章主要对酶制剂的种类、功能、复合酶制剂在动物生产中的应用效果及影响使用效果的因素进行了综述。