巨型艾美球虫柔嫩艾美球虫二价虫苗的免疫保护力测定

鸡球虫病是一种世界性、广泛分布、严重危害养鸡生产的主要鸡病之一，各种龄期的鸡均易感，发病后可引起鸡只大批死亡，更重要的是影响增重和饲料转化率，造成巨大经济损失。控制该病的主要措施是采用药物防治和疫苗接种，但因为抗球虫药对球虫容易产生抗药性和在肉品中残留而对人体健康造成危害等问题，用疫苗防治鸡球虫病越来越受到人们的重视。寄生在鸡的艾美属球虫有７个种，其中以巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫最为常见，致病力也较强。因此，华南农业大学兽医学院寄生虫教研室林辉环教授、翁亚彪副教授等成功地研制了这两种球虫的早熟弱…     

鸡柔嫩艾美耳球虫致弱苗的保存期和免疫期

在鸡柔嫩艾美耳球虫(上海天山)株的安全性与免疫原性试验均证明良好的基础上。为进一步了解该虫苗保存的时间和免疫期的长短,以便在鸡群中推广使用,兹进行如下试验并将结果报告如下:     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

柔嫩艾美耳球虫强毒活苗免疫剂量的筛选

<正>鸡球虫病中以柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)致病性最强,主要侵害雏鸡盲肠,表现为排血便,严重则导致死亡。目前鸡球虫病以药物防治为主,但耐药虫株的出现及残留药物对人体的危害,使药物防治受到限制,免疫预防已成为当前研究的热点。免疫苗可分为强毒活苗、弱毒活苗、耐离子载体类抗生素活虫株疫苗和基因疫苗4种,但市购强毒活苗均属同种不同地理株,其免疫保护性效果往往不够理想。采用     

鸡柔嫩艾美耳球虫致弱虫苗的免疫研究——免疫鸡与无球虫卵囊鸡的同住感染试验

球虫病严重的威胁养禽业的发展,据Rose(1985)的报导虽然强毒卵囊少量多次感染雏鸡能产生免疫,但有危险性,必须研制弱毒虫苗。至目前还未见有用弱毒虫苗应用于生产的报导。本所经过9年的研究,于1983年通过鸡胚传代致弱培育了一个弱毒株,经实验免疫证明已具有安全性和有效性,该虫苗在实验条件有效的基础上经过1984～1986年三年的野外田间免疫观察,对75万羽鸡的安全性与免疫力均达到98％以上。为了进一步证实该虫苗的安全、有效,通过鸡体     

柔嫩艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定柔嫩艾美耳球虫（Eimenatenella）早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个／羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×10^4个／羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以存活率、增重、肠道病变记分、血便数量、卵囊减少率为观测指标。对免疫保护效果较好的3个免疫剂量进行重复试验,同时设置商品化球虫疫苗对照组,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验。结果显示：攻虫后,不免疫攻虫组出现5％死亡,而各免疫组来出现死亡;各免疫组卵囊减少率在61．57％～69．52％;200～2000免疫组的增重与不免疫不攻虫组差异不具备显著统计学意义（P〉0．05）;600～2000免疫组的肠道病变记分和血便数量均明显少于不免疫攻虫组（P〈0．05）。用600、800和1000进行重复试验,三个免疫组攻虫期间均来出现死亡,而不免疫组和疫苗对照组均出现5％死亡;三个免疫组的增重均明显高于不免疫攻虫组和疫苗对照组（P〈0．05）;早熟株免疫组的肠道病变记分和血便数量明显低于不免疫攻虫组（P〈0．05）,而疫苗对照组与不免疫攻虫组的相当（P〉0．05）;卵囊减少率在66.30％-78．75％,高于疫苗对照组的51．82％。结果表明,该柔嫩艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中600、800和1000个／羽的免疫效果均优于疫苗对照组,可考虑以600个／羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

应用ELISA检测紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株虫苗抗体

将无球虫雏鸡随机分为2组,在9日龄和16日龄分别进行首免和二免。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗球虫抗体的变化情况。结果显示,雏鸡的抗体水平动态变化整体呈上升趋势,并且在二免后第11天出现峰值(0.398),其后稳定地维持在较高水平;对照组抗体水平稳中有降。抗体水平动态变化表明,紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株有较强的免疫保护力。     

柔嫩艾美耳球虫病毒的鉴定

鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的一种单细胞寄生性原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地。感染鸡的艾美耳属球虫中,国外已报道在巨型艾美耳球虫（E.maxima）,堆型艾美耳球虫（E.acervu-lina）,毒害艾美耳球虫（E.necatrix）和布氏艾美耳球虫（E.brunetti）中发现了病毒粒子或病毒RNA。但是作为危害最严重的柔嫩艾美耳球虫是否有病毒感染,国内外迄今尚无报道。本研究首次在柔嫩艾美耳球虫中发现病毒并对其进行了鉴定。通过核酸分析、RNA依赖的RNA聚合酶（RDRP）活性和电镜形态观察对病毒进行鉴定。核酸酶的敏感性试验结果表明在柔嫩艾美耳球虫总核酸电泳图谱上观察到的大小分别为1.4、2.4和3.6kb的3条病毒带均不能被DNA酶（100mg/L）降解,但可被RNA酶（1.0mg/L）降解,表明这些核酸为RNA。另外,这些核酸不能被高盐浓度（0.3mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,但可被低盐浓度（0.015mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,并且采用α-32P标记的UTP掺入法测得该病毒样核酸具有RNA依赖RNA聚合酶（RDRP）活性,表明这些核酸为双链RNA（dsRNA）。利用蔗糖梯度离心和透射电镜技术对柔嫩艾美耳球虫病毒进行了分离和鉴定。电镜负染观察到柔嫩艾美耳球虫病毒粒子外观呈球形,二十面体,无囊膜,直径38nm。     

柔嫩艾美耳球虫的抗原分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳，免疫印渍技术，用抗柔嫩艾美耳球虫抗体分析了第二代型殖子、子孢子和未孢子化卵囊的蛋白质。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳银染表明第二代裂殖子主要蛋白质为：１７．６ＫＤ，２９．９ＫＤ，３８．９ＫＤ和５３．７ＫＤ，但用抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ抗体免疫印渍法检测出的主要抗原为：７８．０ＫＤ，８３．２ＫＤ和９５．５ＫＤ，这说明并不是含量高的蛋白质就是产生抗体的抗原；子孢子蛋白质含     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

应用柔嫩艾美耳球虫苗预防鸡球虫病的试验

鸡球虫病是雏鸡肠道感染、由一种或多种球虫引起的急性流行性原虫病，是危害养鸡生产的主要疾病之一。长期以来，鸡球虫病的控制方法是采用药物防治，但在生产实践中，抗球虫药无一不遇到产生耐药性问题。近几年来．我市养鸡生产普遍采用连续应用多种抗球虫药的方法，解决了耐药性l司题，获得较好的保护效果。但是．药费开支较多，投药麻烦费工，尚有15％的发病率，0.49％的几亡率和生长受阻等生产损失。为提高养鸡生产的经济效益，在1995年10月至1996年底，我们采用球虫苗预防鸡球虫病，从试验观察到推广应用，均收到今人满意的效果，为防…     

柔嫩艾美耳球虫的分离鉴定与致病性测定

本实验采用单卵囊分离技术分离纯化球虫,并根据其临床病理变化、潜隐期、最短孢子化时间等指标综合判定其为柔嫩艾美耳球虫。用纯化所得球虫卵囊进行致病性试验,结果表明:该柔嫩艾美耳球虫致病力较强,半数致死量为7.52×104个/只。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

不同地理株柔嫩艾美耳球虫免疫保护性研究

为了研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)不同地理株的免疫保护性,试验采用E.tenella广州株、保定株、长春株、山东株、黑龙江株对AA肉鸡分别进行免疫和攻虫,通过OPG计数、粪便计分、盲肠病变计分、增重测定、保护率计算、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞检测评价免疫保护效果。结果表明:广州株对于同株攻虫的免疫保护率显著高于其他虫株(P0.05);广州株、保定株、山东株、长春株、黑龙江株对于其他株攻虫的平均免疫保护率分别为72.8%、66.5%、63.7%、58.2%、52.7%,广州株极显著高于长春株和黑龙江株(P0.01);各株均能引起2种T淋巴细胞数量增加。说明E.tenella不同地理株的免疫保护性不同。     

柔嫩艾美耳球虫野外抗药性虫株的RAPD分析

用RAPD方法对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）的8个分别来源于黑龙江、北京、四川、甘肃和广东的中山、新会、东莞以及广州近郊的江村镇的野外分离虫株和2个药物敏感性虫株进行了遗传多态性分析。同时用9种抗球虫药物即马杜霉素（5mg/kg）、盐霉素（60mg/kg）、莫能霉素（120mg/kg）、拉沙菌素（90mg/kg）、克球多（150mg/kg）、常山酮（3mg/kg）、氯氢苯乙氰（1mg/kg）、尼卡巴嗪（125mg/kg）和球痢灵（125mg/kg）分别对8个野不进行抗药性试验，8个虫株对上述药物均有不同程度的抗药性。RAPD分析表明：10个样品都有相似而清晰的主带，每个泳道有5－13条带不等，大小为0.18-2.10kb。它们之间的相似率（SI）大于40.58%，最大的为90.72%，这种相似率属种内变异水平。根据SI值可把10个样品划分为3个类群：广东虫株类群，群内比较，平均SI值为76.60%；广东省外虫株类群，群内比较的平均SI值72.14%；敏感株类群，其间的SI值为89.27%。在另一方面，广东株与广东省外株、敏感株之间比较，其SI的平均值分别仅为63.03%和47.25%，说明柔嫩艾美耳球虫抗药性虫株之间有遗传差异法。     

柔嫩艾美耳球虫杂交F2株卵囊超声波致弱后的免疫保护性研究

柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）是球虫病爆发中致病性最强的虫种之一，主要侵害鸡的盲肠，通过裂殖体在盲肠上皮细胞大量增殖破坏肠黏膜，引起肠管发炎和上皮细胞崩解，鸡排血便甚至死亡，给养鸡业带来巨大的经济损失。目前，对该病的防治主要有药物防治法和疫苗防治法，其中用疫苗来预防鸡球虫病的发生是既科学又经济的方法，具有良好的发展前景。现在国内外研制、开发的鸡球虫病疫苗有强毒株虫苗、弱毒株虫苗和球虫基因工程苗等。     

柔嫩艾美耳球虫TA4重组抗原的免疫试验

构建了能表达柔嫩艾美耳球虫TA4抗原的重组质粒,使其在乳球菌中表达。用刚出壳的健康雏鸡为实验对象,对乳球菌表达的TA4重组抗原进行免疫效果的研究。用表达球虫TA4抗原的工程乳球菌以5×108个/(只·d)的剂量给雏鸡口服10d,同时设置乳球菌组、未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,于11日龄用5×104个强毒卵囊进行攻毒。结果表明TA4重组抗原组抗球虫指数为160.12,实验鸡可获得一定免疫保护力。