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本研究应用柠檬酸三钠还原法制备了20nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒。证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点。 相似文献
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为建立检测猪圆环病毒2型(PCV2)胶体金检测方法,本研究对SPA蛋白进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以重组PCV2 ORF2蛋白和猪IgG作为检测线和质控线,制作PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸条。检测结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可以判定结果,对PCV2免疫血清具有高度特异性,与猪其它病毒免疫血清无交叉反应,检测灵敏度与ELISA相近。试纸条在室温保存6个月,其特异性及灵敏度无明显变化。对临床采集的324份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒总符合率为98.77%。表明本研究建立的PCV2抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于PCV2抗体的现场检测。 相似文献
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为比较几种常用布鲁氏菌病(简称布病)检测方法特性,在某疫苗免疫的奶牛场随机选取40头奶牛,采集血清和奶样各40份,然后对采集的血清进行虎红平板凝集、试管凝集、胶体金、酶联免疫吸附试验(iELISA和cELISA)和琼脂扩散方法检测,对采集的奶样进行病原学检测(qPCR)和抗体检测(胶体金)。结果显示:4种国标方法(虎红平板凝集、试管凝集、iELISA和cELISA)检出的阳性样品数量有较大差距,分别为16、6、23和33份,其中经试管凝集试验检出的阳性血清,经其他3种国标方法也检测为阳性;通过胶体金法检出阳性血清数(9份)略高于试管凝集试验,且血清及牛奶样品经胶体金检测结果基本一致;琼扩法检出12份阳性血清,且显示抽检奶牛中存在野毒感染;qPCR和胶体金试纸条对采集奶样的检测结果有较大差距,经qPCR检测仅1份样品呈阳性。结果表明:国标方法中,试管凝集试验特异性最高,iELISA和cELISA敏感性较高;病原学检测临床样品检出率较低,琼脂扩散试验敏感性有限,胶体金法敏感性适中,操作简便,适合布病免疫奶牛场自检。本研究为牛场布病不同检测目的方法选择提供了参考。 相似文献
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为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法,本研究选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MAb).利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化MAb及兔抗旋毛虫53 ku ES多克隆抗体,利用枸橼酸三钠还原法制备的胶体金颗粒标记MAb,制备免疫金标试纸条.结果表明,获得的2株IgG1型杂交瘤细胞系4D10和5A2能够稳定分泌抗体,且效价高;胶体金标记MAb 4D10所制备的试纸条具有重复性好、灵敏性和特异性高的优点;该试纸条4℃条件下可密封保存6个月以上. 相似文献
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制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液,标记抗弓形虫表面抗原SAG3(surface antigen 3,SAG3)单克隆抗体(Anti-A-SAG3-7),用另1株抗弓形虫表面抗原SAG3单克隆抗体(Anti-A-SAG3-23)与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上的检测线和质控线,制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4μL 0.2 mol/L K2CO3时的pH值。Anti-A-SAG3-7的最适标记量为12μg。最佳NC膜为Millipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0.25g/L,T、C线抗体最佳包被体积均为8μL。试纸条的灵敏度达1∶160,与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明,该试纸条置于室温至少可保存1个月有效,置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测,分别有17,10份为阳性血清,样品阳性率为18.08%,10.63%。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单,敏感特异等优点,适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。 相似文献
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建立了一种快速检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的免疫胶体金检测方法.利用柠檬酸三钠还原法制备直径40 nm的胶体金溶液,利用胶体金标记抗DON单克隆抗体制备胶体金免疫复合物,将DON-BSA和羊抗鼠IgG分别固定在NC膜的检测线和质控线上,依次将样品垫、胶体金结合垫、NC膜和吸水垫粘贴到PVC膜上,组装成试剂板.该试剂板灵敏度可达到500 μg/kg,15 min内即可完成检测;特异性好,与其他霉菌毒素无交叉反应;稳定性、准确性均较好.该胶体金免疫层析试剂板使用方便、快速,且不需要任何仪器设备辅助,可开发作为一种大批量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇样本的筛选手段. 相似文献
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莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺(ractopamine,RAC药物残留),采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。 相似文献
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Surya Sankar Hiron M. Harshan S.R. Somarajan S.K. Srivastava 《Research in veterinary science》2010,88(3):375-378
A recombinant leptospiral lipoprotein, LigB, was evaluated for use in the diagnosis of bovine leptospirosis by enzyme-linked immunosorbent assay (rLigB IgG ELISA). The standard reference test (Microscopic agglutination test, MAT) of 200 serum samples from cattle suspected of leptospirosis showed that 95 (47.5%) samples had positive agglutination titres, which ranged from 100 to 1600. In rLigB IgG ELISA, 49% of the samples were positive. Sensitivity of IgG ELISA for 95 bovine sera, which had MAT titres of greater than or equal to 100, were 100%. ELISA showed a specificity of 97.1% with 105 bovine sera, which were negative at a 1:50 dilution in MAT for Leptospira interrogans serovars. The results of ELISA and MAT correspond very good. When analytical specificity of IgG ELISA was evaluated using bovine serum samples from animals showing the serum antibodies to other pathogens, no cross-reaction was observed. Thus the recombinant LigB IgG ELISA can be used instead of the MAT as an aid to the diagnosis of bovine leptospirosis. 相似文献
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牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用 总被引:10,自引:0,他引:10
为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景. 相似文献
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Mehrdad Ameri Melinda J Wilkerson 《Journal of veterinary diagnostic investigation》2008,20(3):333-336
Bovine failure of passive transfer (FPT), defined as inadequate transfer of colostral immunoglobulins from the dam to the calf, has been associated with increased risk in neonatal mortality. Currently, radial immunodiffusion (RID) assay is considered to be the gold standard in determining FPT in serum samples from calves. There are 2 commercial RID assays routinely used for serodiagnosis of FPT in calves: VET-RID and SRID. Discrepancies between results of these RID assays were observed in the authors' laboratory. The objective of this study was to compare 2 commercial RID assays by testing a paired panel of 30 blood samples collected from newborn Holsteins at birth before, and 24 hr after, ingestion of colostrum, a commercial bovine reference serum, and a panel of different concentrations of 2 purified bovine immunoglobulin G (IgG) products. Overall, the results of this study showed a high level of discrepancy and poor agreement between the 2 RID kits. The interassay precision study revealed lower between-run coefficients of variation for the VET-RID kit compared with the SRID kit. The spiking and recovery study using purified bovine IgG products demonstrated that the VET-RID kit more closely approximates the expected concentrations of the purified bovine IgG products, whereas the SRID kit consistently overestimates the concentration of purified bovine IgG products. It was concluded that this may be due to inaccuracies in the internal standards of the SRID kit. 相似文献