莱克多巴胺多克隆抗体的制备

采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺，用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白（KLH，BSA）偶联，制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体，以BSA-Rac为包被抗原，采用间接ELISA检测抗血清，其效价达到1：6000，间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng／mL，其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0．01％。     

两种不同偶联比的莱克多巴胺免疫原免疫效果比较

将同窝3月龄体重2 kg左右的新西兰白兔随机分为2组,每组5只,分别用偶联比为2.5∶1、10∶1的莱克多巴胺-BSA(BSA-Rac)免疫6次后,间接ELISA和间接抑制ELISA检测抗血清的效价和特异性。结果表明,偶联比为10∶1的免疫原产生了效价超过1∶10000以上、IC₅₀值约为10 ng/ml的抗体,而偶联比为2.5∶1的免疫原未产生抗体。     

莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争ELISA检测方法的建立

用混合酸酐法将莱克多巴胺(Rac)与匙孔蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测得偶联物Rac-KLH浓度为3.6 mg/mL,Rac-BSA浓度为6.2 mg/mL。以偶联物Rac-KLH作为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。以Rac-BSA作为包被抗原,经间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9、1F3、2C11、5C3、3A10、4A8、6B7、6D5、7C11、7D3。其中单克隆抗体5C3和3A10间接ELISA效价1∶500 000,对莱克多巴胺的半数阻断浓度(IC50)均为3.98 ng/mL,对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的IC50均大于2 000 ng/mL;对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的交叉反应率均小于0.2%。间接竞争ELISA检测莱克多巴胺在0.5～100 ng/mL范围内为线性分布,确定的最低检测限为0.5 ng/mL。     

莱克多巴殷检测问题探讨

莱克多巴胺（Ractopamine，Rac）是β-兴奋剂中的一员．在欧盟和我国属违禁药物。笔者经过检测实践并结合相关的文献，阐述了莱克多巴胺检测中造成酶联免疫吸附（EUSA）方法与确证方法符合率低的主要原因，并提出了解决方法和建议。     

莱克多巴胺检测问题探讨

莱克多巴胺(Ractopamine,Rac)是β-兴奋剂中的一员,在欧盟和我国属违禁药物。笔者经过检测实践并结合相关的文献,阐述了莱克多巴胺检测中造成酶联免疫吸附(ELISA)方法与确证方法符合率低的主要原因,并提出了解决方法和建议。     

莱克多巴胺对鼠的毒性研究

莱克多巴胺急性毒性按寇氏法测得LD50分别为大鼠：1854．81（1601．77－2147．83）mg/kg，小鼠LD50为：1829．79（1616．59－2071．09）mg/kg。根据化学物质的急性毒性分级标准，属低毒纸。采用剂量定期递增法给药测得蓄积系数K值大于5．3，根据蓄积系数评价标准为轻度蓄积。大鼠90天亚慢性试验，从精神状况、体重、采食、血液学指标和组织切片光镜检查上看，在饲料中添加20、200、2000mg/kg莱克多巴胺均无明显毒性反应。     

莱克多巴胺的检测方法

莱克多巴胺又名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean．化学成分为1-（4-羟基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇。动物生产中以RCT盐酸盐形式用作饲料添加剂,称之为盐酸莱克多巴胺（RCT·HCI）。莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）与沙丁胺醇（Salbutamol,SAL）是苯乙胺类药物,均为中等极性的疏水性物质,呈酸碱两性。     

莱克多巴胺的检测方法

莱克多巴胺又名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean．化学成分为1-（4-羟基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇。动物生产中以RCT盐酸盐形式用作饲料添加剂，称之为盐酸莱克多巴胺（RCT·HCI）。莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）与沙丁胺醇（Salbutamol，SAL）是苯乙胺类药物，均为中等极性的疏水性物质，呈酸碱两性。     

用ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量

近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注，政府出台了一系列相关法律法规，加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度，同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高，对不法分子起了较大的震慑作用。但由于利益的驱使，加之对“瘦肉精”替代品的检测仍处于起步阶段，违法活动并没有停止。现有证据表明，莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品已在养猪生产中被使用。本试验用ELISA方法对吴江市区域内生产和销售的中大猪配合饲料进行莱克多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法，探明目前吴江地区猪用饲料中使用违禁药物的现状。     

环丙沙星人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将半抗原环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白进行偶联。采用非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法对偶联物中环丙沙星与载体蛋白的分子结合比进行分析。紫外分光光度法表明，环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白的分子结合比分剐为6：1和13：1。非变性凝胶电泳显示，即使只有6个环丙沙星分子与栽体蛋白偶联，偶联物在凝胶中的迁移轨迹与栽体蛋白和偶联剂处理的载体蛋白对照样品均有明显不同。结果表明，非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法可用于环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白分子结合比的定性分析和定量分析。     

氨基脲人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。     

ELISA检测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析

为探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果的影响因素,试验分析了ELISA法检测饲料中莱克多巴胺的不确定度。依据JJF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法,分析不确定度来源并进行量化,找出主要影响因素。结果显示,ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量为43.75 ng/kg时,其扩展不确定度为6.77 ng/kg,k=2。影响不确定度的主要因素为样品称量、测量重复性和标准曲线拟合。     

UPLC/MS-MS测定饲料中的莱克多巴胺

利用液质联用检测方法测定饲料中莱克多巴胺,试验采用乙腈提取试样中的莱克多巴胺,用OasisMCX小柱净化,4mmol/l乙酸胺溶液:乙腈(80:20)为流动相,用PDA检测器分离测定。试验结果莱克多巴胺的检测限为1.37μg/kg,平均回收率为84.4%,最后用质谱进行确证。该方法简单,结果准确,可用于测定饲料中莱克多巴胺的含量。     

检测莱克多巴胺胶体金免疫层析试验的建立

采用混合酸酐法制备莱克多巴胺-OVA偶联抗原,胶体金标记莱克多巴胺单克隆抗体,建立了检测莱克多巴胺的胶体金免疫层析试验。该试验具有较好的敏感性和特异性,最低可检测10ng/mL的莱克多巴胺,而与克伦特罗和沙丁醇胺无交叉反应。胶体金免疫层析试验对尿液和饲料样品中莱克多巴胺的最低检测量分别为10ng/mL和0.01mg/kg。     

动物组织中莱克多巴胺残留的不确定度评定

为保证实验室测试结果的准确性和可靠性,依照国家计量技术规范JJF1059—199《测量不确定度评定与表示》,对气相色谱-质谱法测定动物组织中莱克多巴胺残留量进行了不确定度的评定。分析和量化了影响测定结果的各不确定度分量,得出了被测量的合成标准不确定度和扩展不确定度。当动物组织中莱克多巴胺残留量为17．72μg／kg时,其合成标准不确定度为0．47μg／kg,扩展不确定度为0．94μg／kg（k=2）。     

动物产品中莱克多巴胺的残留检测研究进展

莱克多巴胺（Ractopamine, RAC）是一种人工合成的β-肾上腺素能受体激动剂类化合物，属于第二代“瘦肉精”。本文分别从传统仪器检测法和快速检测法及生物传感器技术三个方面综述了当前RAC在动物性产品中残留检测技术的研究进展，并对RAC检测技术的发展趋势进行了展望，旨在为RAC的残留监控提供方法学上的参考，为检测新方法的建立提供思路。     

二氟沙星人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了二氟沙星人工免疫原和包被原；采用碳二亚胺法将半抗原二氟沙星与载体蛋白BSA连接制备人工免疫原；并采用氯甲酸异丁酯法将二氟沙星与载体蛋白OVA连接制备人工包被原，经FeCl3显色反应、紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功。这对抗二氟沙星单克隆抗体的制备具有重要意义。