富甘氨酸果蝇抗菌肽SK66的抗菌机制研究

为了研究SK66的抗菌机制,对K66-his、AMA-SK66、Trx-SK66进行序列比对和分析,结果发现Trx-SK66是SK66的氮端加了1个Trx蛋白,AMA-SK66是SK66的氮端加了2个丙氨酸和1个甲硫氨酸,SK66-his是在SK66的碳端加了6个组氨酸;比较SK66-his、AMA-SK66和Trx-SK66杀灭细菌活性,结果表明Trx-SK66没有杀菌活性,AMA-SK66杀菌活性大大降低.试验结果说明氮端氨基酸对SK66杀菌活性很重要,尤其氮端氨基酸的极性.     

洛伐他汀对Hela和HCT116细胞凋亡的诱导效果

采用洛伐他汀诱导Hela细胞和HCT116细胞,以探讨洛伐他汀对两种细胞体外死亡和凋亡机制。结果表明:经过浓度为20μmol/L和50μmol/L的洛伐他汀处理24 h、48 h和72 h后,两种细胞的死亡和凋亡率与处理浓度及时间成正相关,在不含胎牛血清(SVF)条件下效果更明显;经25μmol/L洛伐他汀处理48 h后,caspase-2表达在两个细胞系中均有提高,尤以Hela更明显。故初步认为,Lovastatin能引起Hela、HCT116细胞的死亡和凋亡,凋亡机制与caspase-2表达有关。     

黑莓籽油提取工艺及功能应用研究

采用超声辅助溶剂萃取法制备了黑莓籽油，并采用MTT法研究了该黑莓籽油对宫颈癌细胞(Hela)、肝癌细胞(HepG2)、乳腺癌细胞(MCF-7)、非小细胞肺癌细胞(A549)和人脐静脉表皮细胞(HUVEC)的抑制增殖活性。该制备方法易操作，试验中所需物品无毒，并发现黑莓籽油对上述4种癌细胞的IC₅₀值分别为176.99、172.18、206.50和413.94μg/mL，而对正常细胞(HUVEC)的IC₅₀值>500μg/mL，表明该黑莓籽油抑制Hela细胞、HepG2细胞、MCF-7细胞和A549细胞增殖活性的作用较强，且无毒，为抗癌药的开发提供了新思路，拓宽了在绿色植物中挖掘新油脂原料的来源；并且该黑莓种籽油突破了传统食用油的局限性，是一类具有优良前景的高级保健食用油。     

瘤背石磺多糖对人宫颈癌细胞的体外抑制作用

体外试验研究瘤背石磺多糖（Onchidium reevesii polysaccharides, OSP）和硫酸酯化修饰后瘤背石磺多糖（Sulfated Onchidium reevesii polysaccharides, S-OSP）对Hela人宫颈癌细胞生长的影响,并以阳性药物顺铂(0.5 μg/ml、0.75 μg/ml、1.5 μg/ml)作为对照。将不同浓度（50 μg/ml、75 μg/ml、150 μg/ml）的OSP和S-OSP作用于Hela细胞,用CCK-8法分析Hela细胞在12h、24h、48h和72h的增殖情况,用流式细胞仪分析细胞周期,并应用qRT-PCR检测相关凋亡基因的表达变化。结果表明OSP和S-OSP均能降低Hela细胞活性并诱导其凋亡,而且S-OSP比OSP更能显著抑制Hela细胞增殖活性（P<0.05）,表明硫酸酯化修饰改变了多糖结构进而影响多糖抗肿瘤活性。作用48h后,三种浓度OSP组Hela细胞生长抑制率分别为60%、67%、71%;S-OSP组Hela细胞生长抑制率分别为74%、77%、84%;顺铂组Hela细胞生长抑制率分别为82%、86%、90%。流式细胞术检测显示OSP和S-OSP作用24h后,细胞早期和晚期凋亡的比率显著（P<0.05-0.01）,G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例不断降低;实时荧光定量表明促凋亡基因Caspase-3的表达量随药物浓度的提高显著增加,抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表达量随药物浓度的提高无明显变化,说明OSP和S-OSP可通过调节Caspase信号通路诱导Hela细胞凋亡。     

糖尿病合并恶性肿瘤患者化疗后血糖增高5例临床分析

恶性肿瘤化疗是通过化疗药物在体内杀灭癌细胞或抑制癌细胞生长,同时对机体正常细胞有不同程度的损害,特别对生长旺盛的细胞、组织影响更明显,例如骨髓、胃肠道、生殖细胞、头发等,常引起不同程度的毒副作用,但关于对糖尿病患者血糖升高的影响,国内、外少见报道,现将本科5例糖尿病合并恶性肿瘤患者化疗后出现血糖增高作一分析。1　临床资料5例中,男1例,女4例,年龄最小48岁,最大66岁,均经病理确诊为恶性肿瘤,以往均有糖尿病(型)病史,常规口服降糖药,血糖能控制在正常范围,化疗前除2例血糖稍高外,余3例均正常,化疗期间继续按原方案口服降糖药,…     

"红勋1号"红肉苹果多酚抗氧化与抗癌活性

在前期提取纯化红肉苹果多酚及分析组成的基础上,通过3项抗氧化试验探讨多酚抗氧化能力,并用MTT法和荧光染色法研究多酚的抗癌活性。体外抗氧化试验结果表明,浓度为0.80 mg/mL红肉苹果多酚的总还原力与V_C持平,0.60 mg/mL的多酚对ABTS~+具有良好的清除作用(清除率94.11%),且对Cu~(2+)/H_2O_2诱导的BSA蛋白氧化损伤具有明显的保护作用。MTT试验显示红肉苹果多酚对3种癌细胞(HepG2、Hela、A549)的增殖均有明显抑制作用(IC_(50)值分别为0.687、0.405、0.635 mg/mL),且对Hela癌细胞的抑制率最高达65.19%;台盼蓝染色、AO/EB及DAPI荧光染色试验发现,多酚浓度增大Hela细胞凋亡明显,且细胞内线粒体膜电位降低,活性氧水平升高,呈剂量依赖性。红肉苹果多酚具有良好的抗氧化活性,可显著诱导Hela细胞的凋亡,可作为天然抗氧化、抗癌食品基料进行深入开发利用。     

欢迎邮购农业科技教育VCD光盘

野生松针层孔菌的药理作用 1松针层孔菌功效：主要用于治疗食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、乳腺癌和子宫癌等，能直接杀灭癌细胞，抑制癌细胞再生，使肿瘤出血死亡．缓节肿瘤症状，增强免疫力．①对癌细咆抑制率达99％，防止复发转移，迅速止痛。②增强人体造血功能，使血小板和白细胞、红细胞正常化。     

菹草类胡萝卜素抗癌作用与机理的研究

通过MTT细胞增殖抑制试验,测定肿瘤细胞膜唾液酸(SA)含量、线粒体跨膜电位(ΔΨm)、细胞培养液中NO和NOS含量等的变化,研究菹草类胡萝卜素(carotenoids extracts fromPotamogeton crispusL.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响及其作用机制。结果表明:CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;能显著降低Hela细胞表面的SA含量,诱导Hela细胞ΔΨm下降,导致iNOS活性增强,NO含量显著升高。CEPC对Hela细胞的生长抑制作用可能是通过降低肿瘤细胞膜SA含量,使线粒体跨膜电位下降i、NOS的活性增强、NO的浓度升高而引起肿瘤细胞凋亡。     

安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建(英文)

[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆和在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入Hela细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。     

酶催化制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸及其抗肿瘤活性研究

以亚临界1,1,1,2-四氟乙烷(R 134a)作为非水介质,以磷脂酶D催化鱿鱼卵磷脂与L－丝氨酸的酰基转移反应制备富含多不饱和脂肪酸(EPA/DHA)磷脂酰丝氨酸(PS),探讨了亚临界R134a体系条件对酶促反应的影响.采用四氮唑蓝还原法(MTT法),研究所制备的EPA/DHA磷脂酰丝氨酸对人宫颈癌细胞(Hela细胞)和结肠癌细胞(Caco-2细胞)的体外抗肿瘤活性.结果表明,磷脂酶D在亚临界R134a中显示出高活性,在6 MPa 、40℃、加水2.4 mL、反应240 min的条件下,酰基转换反应制备EPA/DHA磷脂酰丝氨酸的转化率为84.77％;制备的EPA/DHA磷脂酰丝氨酸对Hela细胞和Caco-2细胞增殖有显著抑制.200 μg/mL PS作用于Hela细胞72 h,可使其存活率下降30％;200 μg/m LPS作用于Caco-2细胞72 h,可使其存活率下降40％.     

二氢卟吩载药胶团的制备及体外光动力效应研究

[目的]研究二氢卟吩e6（Ce6）载药胶团的体外光动力疗法（PDT）对子宫颈癌Hela细胞的杀伤作用.[方法]合成壳聚糖硬脂酸聚合物二氢卟吩e6载药胶团（CSO-SA/Ce6）和叶酸修饰聚合物的二氢卟吩e6载药胶团（FA-CSO-SA/Ce6）后,通过荧光显微镜观察载药胶团对细胞的毒性.以游离的Ce6、壳聚糖硬脂酸聚合物（CSO-SA）为对照组,应用MTT法检测Ce6载药胶团对Hela细胞的毒性作用;同时采用波长630 nm的半导体激光垂直照射到24孔培养板上,照射时间为180 s/孔,继续孵育细胞24h,应用MTT法检测载药胶团在光照条件下对Hela细胞的光动力杀伤效率.[结果]荧光显微镜显示,Ce6载药胶团不影响细胞的数量和形态,对Hela细胞毒性较小;MTT法表明,Ce6包载后,对Hela细胞的PDT杀伤作用显著强于Ce6.[结论]Ce6载药胶团对Hela细胞具有良好的光动力杀伤作用,且PDT杀伤效率优于Ce6.     

脑心肌炎病毒感染Hela细胞的内吞途径

旨在探究脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是否通过内吞途径以及通过何种内吞途径感染细胞,分别采用内吞途径抑制剂、网格蛋白抑制剂、巨胞饮途径抑制剂和肌动蛋白抑制剂作用于Hela细胞后接种EMCV,通过TCID_(50)、qRT-PCR和Western blot等方法检测病毒感染是否受影响。结果显示,内吞途径抑制剂和肌动蛋白抑制剂作用于Hela细胞后,TCID_(50)、qRT-PCR和Western blot等检测结果提示EMCV的感染受到抑制。表明EMCV可通过肌动蛋白参与的内吞途径感染Hela细胞。     

西兰苔叶黄酮体外抗癌活性的研究

[目的]探讨西兰苔叶黄酮粗提物（EOF）的抗癌机制。[方法]通过四甲基偶氮唑盐（MTT）试验检测EOF对细胞生长的抑制率,并用流式细胞仪采用Annexi-V/PI双染法进行细胞凋亡检测,以探讨西兰苔叶EOF对癌细胞增殖的抑制作用及其诱导的癌细胞凋亡机制。[结果]西兰苔叶EOF对SW480、HepG2、Hela和A549这4种细胞的生长均表现出抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而增大,呈明显的量效关系,其50%抑制浓度（IC50）值分别为88.14、99.65、104.43、79.77μg/ml,对SW480细胞的作用最为明显。通过Annexi-V/PI双染法流式细胞仪测得其浓度为30、60、80、120、160μg/ml时,诱导的SW480细胞的早期凋亡率分别为12.74%、16.41%、19.61%、28.28%和50.66%。[结论]西兰苔叶EOF是通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来发挥对肿瘤的治疗作用的。     

猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救

 【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50?mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。     

人pot1基因cDNA的克隆及其在HeLa细胞中的表达

目的：克隆人端粒保护蛋白（human proteetlon of telomeres 1.pot1）基因cDNA全编码区,构建成真核表达质粒并实现在HeLa细胞中的表达。方法：RT-PCR法扩增出HeLa细胞hpot1基因cDNA编码区全序列,定向克隆至真核表达载体pcDNA3,阳性重组质粒经插入片段测序验证;重组的pcDNA3-hpot1质粒瞬时转染HeLa细胞,RT-PCR和EMSA法（电泳迁移率改变分析）检测hpot1基因的表达水平。结果：来自Hela细胞的hpot1基因cDNA编码区全序列构建成的真核表达质粒pcDNA3-hpot1,经测序分析序列和ORF正确;该重组质粒转染在HeLa细胞48h后,hpot1基因表达水平增高。结论：真核表达载体pcDNA3-hpot1构建成功,并实现了hpot1在Hela细胞中的表达。     

Respiration and parturition affected by conditional overexpression of the Ca2+-activated K+ channel subunit, SK3

In excitable cells, small-conductance Ca2+-activated potassium channels (SK channels) are responsible for the slow after-hyperpolarization that often follows an action potential. Three SK channel subunits have been molecularly characterized. The SK3 gene was targeted by homologous recombination for the insertion of a gene switch that permitted experimental regulation of SK3 expression while retaining normal SK3 promoter function. An absence of SK3 did not present overt phenotypic consequences. However, SK3 overexpression induced abnormal respiratory responses to hypoxia and compromised parturition. Both conditions were corrected by silencing the gene. The results implicate SK3 channels as potential therapeutic targets for disorders such as sleep apnea or sudden infant death syndrome and for regulating uterine contractions during labor.     

菜芙蓉醇提物金丝桃苷含量测定及对肿瘤细胞生长抑制作用

[目的]建立测定菜芙蓉（Abelmoschus manihot（L.）Medic）醇提物金丝桃苷含量的方法以及研究菜芙蓉醇提物对Hela肿瘤细胞生长的抑制效果。[方法]采用体积分数为80%的乙醇提取总黄酮,HPLC法测定菜芙蓉不同植株部位中金丝桃苷含量。色谱柱为伊利特C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（V/V,60∶40）,流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,检测波长为360 nm和进样量为10μl。另外,MTT法测定菜芙蓉提取物体外抗Hela肿瘤细胞活性。[结果]金丝桃苷在0.040.4 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 8。菜芙蓉不同部位金丝桃苷含量分布为：花〉叶〉茎〉根〉籽,花中平均含量最高达4.002%。平均回收率和RSD值分别为99.23%和1.08%（n=6）。菜芙蓉黄酮提取物能够有效地抑制Hela细胞的生长,IC50约为228μg/ml。[结论]该方法准确、简便、重复性好,可作为菜芙蓉金丝桃苷定量分析方法;菜芙蓉总黄酮具有抑制肿瘤细胞生长的作用。     

Study on the Inhibition of Fermented Soybean to Cancer Cells

In the experiment, the inhibition of isoflavones extracted from soybean and tempe to SP2/0 and Hela cells was studied, and the inhibition rate of each unit for cancer cells was also studied. The results showed that the inhibition rate of tempe isoflavones to SP2/0 was 96.9% and to Hela cells was 69.5% when the concentration was 20μg·mL^-1. In the same condition, the inhibition rate of soybean isoflavones was 83.16% and 60.5%. With the decline of concentration, the inhibition rate decreased. The inhibition of isoflavones to SP2/0 did not exist when the concentration was 5-1.25μg·mL^-1.     

猪繁殖与呼吸综合征弱毒苗阴道免疫对母猪子宫IgA和IgG分泌细胞的影响

用猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS) 弱毒苗分别通过生殖道黏膜免疫和肌肉注射免疫母猪 (各 4头 ), 另 4头经生殖道接种生理盐水作为对照, 运用免疫组化技术显示子宫局部IgA分泌细胞和IgG分泌细胞的分布。结果表明, 对照组子宫中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞主要分布于黏膜固有层浅层, 子宫颈中的IgA分泌细胞数量多于子宫角, 而子宫角中IgG分泌细胞数量多于子宫颈。生殖道免疫后, 与对照组相比, 子宫角IgA分泌细胞数量极显著增多 (P<0 01), 子宫颈IgA分泌细胞数量无显著增加; 子宫角IgG分泌细胞数量有所增加, 但差异不显著, 子宫颈IgG分泌细胞数量无显著变化。肌肉注射后, 子宫中IgA和IgG抗体分泌细胞数量与对照组间无明显变化。表明用PRRS弱毒苗经生殖道黏膜免疫可增加子宫局部抗体分泌细胞数量, 而全身免疫对子宫抗体分泌细胞无显著影响。     

红树内生真菌BYY-1中一个酚类化合物的分离鉴定与抗肿瘤活性

采用硅胶柱层析、薄层层析、Sephadex LH-20柱层析从红树内生真菌BYY-1的次级代谢产物中分离到化合物B1.通过乙酰化、NMR、HR ESI-Q-TOF MS等技术鉴定了化合物B1的结构,确定其为首次从红树内生真菌中分离到的化合物.运用MTT法和流式细胞术研究了化合物B1的抗肿瘤活性,结果表明,化合物B1可显著抑制Hela细胞的增殖（IC50=3.3μg/mL）,并且质量浓度为4μg/mL时,能诱导Hela细胞发生明显的凋亡.