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1.
为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC对该作用的影响。结果显示:与未加激素对照组相比,单独添加P4或与E2同时加入均可显著抑制单独培养EEC中PR与ER的表达(P<0.05);而单独添加E2可轻微促进2种激素受体表达水平。在添加有ESC条件培养液的EEC培养模式中,E2单独作用对EEC中PR与ER表达水平无显著影响;P4单独或与E2共同作用下,EEC中PR与ER表达水平均较未加激素对照组显著降低(P<0.05)。性腺激素对单独培养及与ESC共培养模式下的EEC中PR与ER表达水平的调节作用相似,P4对山羊EEC中PR与ER表达水平具有显著抑制作用。 相似文献
2.
为了探究性腺激素作用下山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)中白细胞介素-18(IL-18)的分泌活性,以及子宫内膜基质细胞(ESC)对其分泌活性的调节作用。基于套皿共培养永生化山羊EEC和ESC为体外研究模型,通过ELISA和Western blot方法检测E2和/或P4对EEC中IL-18分泌水平的作用以及ESC对该作用的影响。ELISA结果显示,E2较无激素对照组可显著增强单独培养EEC中IL-18的分泌水平(P〈0.05),P4单独或与E2联合作用则进一步增强其分泌活性(P〈0.01);EEC与ESC共培养模式下,ESC细胞对性激素作用下EEC中IL-18分泌活性具有显著的抑制作用。Western blot结果显示,在单独培养或与ESC共培养模式下,EEC培养上清液中IL-18均以相对分子质量大小18 300的具有生物活性的蛋白形式存在。本研究结果表明,山羊ESC对性腺激素作用下EEC中IL-18的分泌活性具有重要调节作用。 相似文献
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为探讨性腺激素对山羊子宫内膜细胞分泌活性的影响,基于套皿培养技术构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)共培养体外研究模型,通过ELISA检测性腺激素E2和/或P4对单独培养EEC中TNF-α与TGF-β分泌活性的调节作用以及ESC对该培养体系的影响.结果显示:与未加激素对照组相比,单独或混合添加E2和P4均可显著增加单独培养EEC向顶端分泌TNF-α水平(P<0.05),而对细胞基底端TNF-α分泌活性影响不显著;E2单独作用较对照组显著降低EEC向细胞顶端分泌TGF-β水平(P<0.05),P4单独或与E2共同作用下则主要对单独培养EEC顶端及基底端分泌TGF-p水平具有显著增强作用(P<0.05).对于EEC-ESC共培养细胞模式,E2和/或P4显著降低EEC顶端和基底端TNF-α分泌水平(P<0.05);EEC顶端TGF-β分泌水平在E2和/或P4作用下显著降低(P<0.05),而EEC基底端TGF-β分泌水平不受激素作用所影响.激素对单独培养及与ESC共培养模式下的极化EEC顶端及基底端TNF-α与TGF-β分泌水平的差异,提示ESC对激素作用下山羊子宫内膜上皮细胞分泌方向及分泌水平的重要调节作用. 相似文献
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利用免疫组织化学和形态计测学的方法 ,观察了 7匹公马和 6匹在 1~ 2岁期间被摘除了睾丸的阉割马的脑垂体前叶促性腺激素 (GTH )细胞的数量和面积 ,同时利用放射免疫分析方法检测了血浆中垂体促卵泡激素 (FSH)和垂体促黄体激素 (L H)的水平。结果表明 ,公马阉割后 GTH细胞的数量和在垂体前叶实质细胞中的百分率并没有发生明显改变 ,但 GTH细胞的面积却明显增加 ,血中 GTH水平也明显升高。研究结果提示 ,处在生长发育期的马睾丸可能抑制脑垂体中 GTH细胞的合成与储存 ,也抑制 GTH的释放 相似文献
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《畜牧与兽医》2016,(7):83-88
为建立一种经济、简便的分离纯化培养绵羊子宫内膜上皮细胞及基质细胞的方法,采用传统组织块培养法、胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶消化+组织块培养法,分别对绵羊子宫内膜上皮细胞与基质细胞进行了原代培养比较研究。结果表明:3种方法均可以获得原代绵羊子宫内膜上皮细胞与基质细胞。混合生长的细胞经胰蛋白酶差时消化可获得较纯上皮细胞和基质细胞,且其生长曲线均呈S型。经比较分析,胰蛋白酶消化+组织块培养法为最佳培养方法,操作简便、经济实用,获得的绵羊子宫内膜上皮细胞呈铺路石状可传3代,角蛋白18免疫细胞化学染色阳性,纯度达90%以上;基质细胞呈长梭形、漩涡状生长可有限传代,波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,纯度达95%以上。 相似文献
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试验旨在明确瘦素在妊娠和非妊娠绵羊子宫内膜组织中的定位特征,探究其对绵羊子宫内膜上皮细胞中胚胎附植的影响。使用免疫组化法检测瘦素及其受体在妊娠和未妊娠绵羊的子宫内膜上皮组织的表达及定位;利用组织块分离培养原代绵羊子宫内膜上皮细胞,CCK8法确定瘦素最适浓度,RT-qPCR和Western blot检测瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞凋亡的作用,细胞划痕试验检测瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞迁移的作用,RT-qPCR检测瘦素对胚胎附植相关因子血管内皮生长因子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)、白细胞介素-6(IL-6)、子宫内膜附植位点黏蛋白(Muc1)、基质金属蛋白9(MMP9)、白细胞介素-1β(IL-1β)、骨桥蛋白(OPN)、泛素样修饰因子(ISG15)等基因mRNA的表达情况。结果显示,瘦素蛋白主要表达在未妊娠绵羊子宫内膜的基质和上皮组织中,主要在妊娠绵羊子宫内膜上皮组织中表达,瘦素受体表达无明显变化;组织块法可成功获得具有典型上皮样细胞特征并表达角蛋白CK18的原代绵羊子宫内膜上皮细胞。250 mg/L瘦素促进绵羊子宫内膜上皮细胞增殖和迁移,并显著上调Bcl-2,下调BAX、Cas... 相似文献
8.
为探索干扰素τ(IFN-τ)、孕酮对牛子宫内膜上细胞外基质(ECM)及其配基基因表达的影响,本研究在体外培养的牛子宫内膜细胞(bECs)培养液中,分别添加孕酮、bIFN-τ、孕酮和bIFN-τ混合物培养24h后,通过荧光定量PCR技术,检测bECs上Collagen、Laminin、Fibronectin、THBS和Tenascin等ECM基因和ECM配基基因Syndecan、CD44、CD47和RHAMM的表达。结果表明:在体外培养的牛子宫内膜细胞上,bIFN-τ显著地诱导了Tenascin、Collagen、RHAMM和Laminin基因的表达,孕酮显著地诱导了CD44、Fibronectin、RHAMM和Laminin基因的表达,但当bIFN-τ和孕酮联合作用时,CD44、THBS基因的转录水平受到抑制,Tenascin、Fibonectin、Colla-gen基因的转录水平恢复到对照组转录水平。研究结果显示,在胚胎植入过程中,IFN-τ和孕酮可能对牛子宫内膜上ECM及其配基基因表达具有调控作用。 相似文献
9.
信息素(pheromone)是同种生物有机体之间的化学通讯信息物质或信号,由一个有机体释放,能引起同种接受者产生行为变化或生理反应。与生殖及性行为有关的信息素称为性信息素。研究表明,鱼类性信息素来源于性腺[1]。关于性信息素的化学本质,已有一些报道[... 相似文献
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In this study different digestion and isolation methods were applied to obtain canine endometrial stromal cells (ESCs), different concentration levels were set for estrogen (E2) and progesterone (P4), then MTT method was used to measure their effect on cell proliferation in vitro, also cell immunohistochemistry was used for cell identification and measurement of effect on progesterone receptors (PR) expression.The results indicated that E2 (15, 30 and 100 pg/mL) showed no significant regulations on both cell proliferation and PR expression, P4 (15 and 30 ng/mL) had significant promoting effect on proliferation of ESCs (P<0.05), P4 (3, 15 and 30 ng/mL) showed significant inhibitory effect on PR expression (P<0.05), the regulation level was related to concentration and acting time. 相似文献
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本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E2)和孕酮(P4)的浓度,采用MTT法测定E2和P4浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E2浓度变化(15、30、100 pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P4(15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P4(3、15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。 相似文献
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通过建立和完善绵羊子宫内膜上皮原代细胞体外培养技术,为研究绵羊母体和孕体之间的相互作用机制建立体外着床模型。采用组织块法分离培养子宫内膜上皮细胞,观察其生长情况,并比较不同表皮生长因子(EGF)浓度对子宫内膜上皮细胞增殖的作用效果。结果显示,组织块培养1~2 d后,组织周围迁出子宫内膜上皮细胞,长满60 mm培养皿需9~12 d;经差时消化法纯化后,F1代绵羊子宫内膜上皮细胞纯度可达90%以上,表明所获细胞可用于后续试验;F2代细胞在不同浓度EGF(0、12.5、25、50、75、100 ng/mL)下培养144、168 h,经检测在144 h,12.5、25和100 ng/mL浓度下D450 nm值极显著高于对照组(P<0.01),50 ng/mL浓度下显著高于对照组(P<0.05),在168 h,12.5 ng/mL浓度下显著高于对照组(P<0.05),因此,在12.5 ng/mL EGF作用下效果最佳;F3代细胞在0、12.5 ng/mL浓度下培养不同时间(24、48、72、96、120、144、168、192、216 h),经检测D450 nm值在144 h差异显著(P<0.05),168 h后差异极显著(P<0.01)。因此,在培养液中添加12.5 ng/mL EGF可以更加高效、快速得到子宫内膜上皮细胞。 相似文献
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GU Xin-yu LUO Chao-chao AO Jin-xia HUANG Xin ZANG Yan-li SUN Xia GAO Xue-jun 《中国畜牧兽医》2016,43(6):1557-1565
Glycyl-tRNA synthetase is an important member of aminoacyl-tRNA synthetase family.However,the knowledge about expression and regulation mechanism of GlyRS in the development of bovine mammary gland is limited.To reveal the relationship among GlyRS and bovine mammary gland development and lactation,EdU immunofluorescence and flow cytometry were used to analyze the impact of GlyRS on the number of DNA and the influence of the cell cycle of BMEC,and the expression of Cyclin D1 of BMEC by Real-time PCR and Western blotting.The results showed that the DNA synthesis of BMEC,the numbers of cells in S and G2/M phase,and Cyclin D1 expression levels in BMEC were all increased after BMEC was transfected with a GlyRS overexpression vector,whereas all of the above indexes were reduced after BMEC was transfected with a shRNA targeting against GlyRS.This study revealed that GlyRS accelerates cell cycle transformation,increases the number of DNA synthesis by upregulating the expression of Cyclin D1,thereby promoting BMEC proliferation. 相似文献
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甘氨酰tRNA合成酶(glycyl-tRNA synthetase,GlyRS)是重要的氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetases,aaRSs)家族成员。目前,国内外关于GlyRS 在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。为了揭示GlyRS的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本试验应用EdU免疫荧光法、流式细胞术检测GlyRS对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中DNA数目及细胞周期的影响,实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测GlyRS对BMEC中Cyclin D1的表达影响。结果显示,GlyRS过表达时,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均增加;GlyRS抑制后,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均减少。表明GlyRS通过上调Cyclin D1的表达,加快细胞周期转换,增加DNA合成数目,从而促进BMEC增殖。 相似文献
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YAN Bao-qi DONG Shu-wei WANG Dong-sheng NA Li-dong SANG Meng-qi YANG Hong-zao ZHANG Shi-dong YAN Zuo-ting 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3239-3244
To explore the cytotoxicity of palmatine in vitro,goat endometrial epithelial cells (EECs) were stimulated by different concentrations of palmatine,then the growth curve of cell was drew by MTT assay which could detect the cell proliferation. The cell growth state was observed by inverted microscope,and Wright-Giemsa staining was used to observe morphological changes of the cells while LDH test was used to check the membrane permeability of EECs. The results showed that when the concentration was 10 to 227 μg/mL,palmatine had a role in promoting proliferation of the EECs,while when the concentration was more than 227 μg/mL,cell proliferation was inhibited,and 50% inhibitory rate of proliferation (IC50) of this drug on EECs was 360 μg/mL.Wright-Giemsa staining results showed that themorphology of the nucleus and cytolymph were not significantly changed when 100 and 200 μg/mL palmatine effected EECs. LDH results showed that when the palmatine concentration was more than 250 μg/mL,LDH content was extremely significantly higher than that of normal cell group(P<0.01).In conclusion,palmatine presented certain toxic effect on EECs with a significant dose-response effect,and the safe dose range of palmatine was less than 250 μg/mL. 相似文献