辣椒花药培养再生株后代性状分离的观察与研究

本文对辣椒花药培养得到的5个再生株群体后代的主要植物学性状进行了田间观察与分析,结果表明:再生株中具有与供体及其双亲所不具有的植株个体,但大多数性状差异不是很大;双亲差异越大的供体,其再生株个体性状分离程度越大,反之,则越小;以自交系作为供体的再生株后代在表型上几乎没有分离;再生株后代群体中,再生株的植物学性状部分趋向于供体,部分趋向于双亲之一,部分为新出现的性状。     

Integration of the rolA gene into the genome of the vigorous apple rootstock A2 reduced plant height and shortened internodes

Summary

The aim of this work was to dwarf the vigorous apple rootstock A2 by insertion of the rolA gene. To optimize conditions for a successful transformation, regeneration tests were carried out. The use of sucrose in the regeneration medium gave higher regeneration frequency than sorbitol in some cases and the shoot number per regenerated leaf was higher at 10 |j.M TDZ compared with 2.5 |j.M TDZ on the sucrose medium. Two transgenic clones, verified by PCR and Southern analysis, have been obtained on the sucrose medium together with 2.5 |j.M TDZ and 1.0 or 2.5 |j.M NAA and wounding by forceps. The two clones, named LAI and LA2, contained both the rolA and nptll genes. The results of in vitro rooting showed that LAI had a lower rooting percentage and a reduced root number per rooted shoot than the untransformed control shoots and the clone LA2 on the rooting medium containing 5 |JLM IBA. Growth analysis revealed that both transgenic clones had a reduced plant height and a shortened internode length compared with the control plants. However, the node number and the stem diameter were significantly larger for clone LAI than clone LA2 and the control plants.     

Molecular analysis of genetic stability in micropropagated apple rootstock MM106

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were used to assess the genetic stability of 10 micropropagated plants regenerated through axillary buds of clonal apple (Malus pumila Mill.) rootstock MM106. Eleven random decamer primers were successfully used to analyse genomic DNA from mother plants and in vitro plant material. A total of 129 scorable fragments were amplified with an average of 11.73 bands per primer. Among them, 99 were monomorphic and 30 were polymorphic with 23.2% polymorphism. Among these 30, 12 were found monomorphic across seven plants and parent. Three plants could be regarded as off-types. Our results show that RAPD markers could be used to detect the genetic similarities and dissimilarities in micropropagated material.     

红龙草叶片的组织培养及其植株再生

 建立了红龙草叶片再生体系。叶片外植体在培养基MS + 6-BA 1.0 mg/L + 4-PU 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L上形成浅绿色愈伤组织, 20 d后愈伤组织诱导率达100%。约45.31%的愈伤组织在添加6-BA 1.0 mg/L和NAA 0.4 mg/L的MS培养基上分化出紫红色的不定芽, 约6%的愈伤组织在该培养基上产生出细小叶片和绿色变异幼芽。所产生的紫红色不定芽在1/2MS +NAA 0.4 mg/L的培养基上可全部生根,长成完整植株。再生植株的移栽成活率达85%以上。     

芸薹属异源六倍体CGMCCNo.2553多类型再生植株的获得

应用游离小孢子培养技术对兼具有A,B,C染色体组的芸薹属异源六倍体CGMCC No.2553(AABBCC,n=27)材料进行游离小孢子培养.结果表明,供试材料具有胚胎发生能力,并获得DH再生植株.220份驯化后的再生植株定植于日光温室中自交留种,其中12株获得白交种子.分别将DH植株与3份大白菜品种正、反交授粉杂交,得到4份杂交种F1代.经田间植物学鉴定,获得的杂交种为真正的杂种.目前,4份杂交种的染色体组成、倍性、育性等正在研究中.所获得的DH植株为今后构建遗传图谱,标记和定位重要的基因等后续研究奠定了基础.     

原生质体非对称融合获得胡萝卜( Daucus carota L. ) 种内胞质杂种

 用紫外线辐射处理胡萝卜雄蕊瓣化型不育材料7-0-8 ( 供体) 的原生质体, 与经15 mmol/ L 碘乙酰胺预处理的来源于可育材料66-3 的原生质体( 受体) 电融合, 获得了33 株再生植株。所有再生植株营养体形态特征与受体亲本一致, 染色体数目为18 条, 是二倍体。RAPD 分析表明, 所有再生植株核基因型与受体亲本一致; 线粒体特异性引物- STS4 引物PCR 扩增中, 所有再生植株均得到了与供体亲本一致的谱带, 而与受体亲本不同, 认为33 株再生植株均为胞质杂种。对4 株再生植株进行花期形态学鉴定, 全部为雄蕊瓣化型不育株, 进一步证实获得的为胞质杂种, 雄蕊瓣化型细胞质不育性已由7-0-8 供体转移到受体可育材料66-3 中。     

3种苹果潜隐病毒多重RT-PCR检测体系的建立

 研究建立了能同时检测苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus, ASGV) 、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) 和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus, ASPV) 的多重RT-PCR方法。以复合感染3种病毒的苹果‘望山红’组培苗为试材, 对影响多重PCR的反应条件进行了一系列的调整和优化。多重RT-PCR体系灵敏性测验显示, 最低能从RNA总量187.5 ng的样品中检测3种病毒的存在。多重RT-PCR产物的序列与报道的病毒序列有较高的同源性, 12个田间苹果样品的多重RT-PCR检测结果与单一PCR的结果一致, 初步证明了多重RT-PCR检测的准确性。     

番荔枝开花调控转录因子基因AsLEAFY的克隆与表达分析

利用同源克隆和RACE-PCR获得番荔枝LEAFY基因的全长cDNA序列,命名为AsLEAFY,Gen Bank登录号为KP866145。序列分析表明,克隆获得的番荔枝AsLEAFY基因长为1 236 bp,编码411个氨基酸,该氨基酸序列含有5′-N端脯氨酸富集区和中央酸性区,具有LEAFY(FLO)家族的典型结构特征。同源分析表明,该氨基酸序列与多种木本植物LEAFY类蛋白的同源性较高。进化树分析表明AsLEAFY与木本植物的亲缘关系高于草本植物。实时定量PCR结果表明,AsLEAFY在番荔枝花发育的整个过程中都有表达,在初期的花芽中表达量最高,在不同组织器官中表达量存在差异,在枝条去叶后的腋芽中的表达量最高。推测该基因在番荔枝花器官形成初期发挥重要作用。     

用离体微嫁接法快速检测苹果潜隐病毒

用离体微嫁接法同时检测了苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒和苹果茎痘病毒。由于苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒，症状是在叶部表现黄斑，试管内不易观察，病毒检出率较低，检测带毒率分别为37.5%和61.1%，在检测苹果茎痘病毒上取得成功，检出率达81.3%以上。用木本指示植物跟踪检测了带毒品种，试验证明采用离体微嫁接法检测果树病毒比用木本指示植物检测所需时间短，病毒检出率基本一致。     

L-谷氨酸促进富士苹果花青素积累的效应

为了探索更为经济适用的果实增色技术,以13年生富士苹果为材料,在果实着色初期(9月中旬)用200～800mg/L谷氨酸(Glu)溶液处理,然后分批取样,分析结果表明,不同浓度谷氨酸处理均能明显促进果皮花青素积累,增加果实着色面积,并明显增加果实可溶性糖含量。分析果实中内源5-氨基乙酰丙酸(ALA)含量,发现Glu能够促进内源ALA含量提高,推测Glu促进苹果着色可能与其促进ALA生物合成有关。分析果实着色过程中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)等抗氧化酶活性,没有观察到这些抗氧化酶活性与果实着色之间存在着明显的相关关系。     

锌铜处理对苹果属植物叶内碳酸酐酶活性的影响

通过室内外试验,观测了锌、铜处理对苹果属植物叶内碳酸酐酶(CA酶)活性的效应和锌处理对叶内锌、铜、磷、钙、铁含量韵影响。结果表明:在甜茶实生苗和苹果幼苗水培中,锌0.5mg·1~(-1)处理的CA酶活性最高;加入到苹果幼苗酶提取液中的波尔多液(1:2:160)明显抑制CA酶活性,而硫酸铜溶液(160倍)只有微弱的抑制作用,在幼苗叶上喷波尔多液对CA酶活性有一定的抑制作用;在红星苹果大树上喷施锌肥对叶内的CA酶活性无显著影响;梯度锌水培和新梢速长期叶面喷锌的处理都显著或极显着改变和提高了叶内含锌量,但对铁、铜、钙含量影响较小。对叶内锌含量与CA酶活性的关系和波尔多液对CA酶活性的抑制原因进行了讨论。     

Variation in essential oil components in regenerated lavender (Lavandula vera DC) plants

The variation in morphology and essential oil components in 63 regenerated plantlets of Lavandula vera was investigated. Ten regenerated plantlets appeared dwarf-like and exhibited reduced spike lengths and floral stalk lengths. Phenotypic variants were obtained using plant growth regulators at all concentration regimes, but 4.4×10⁻⁶ M of 6-benzylamino purine (BA) for shoot induction produced the highest frequency of dwarfism (30.8%). None of the regenerated plantlets produced as much essential oil as the original plant. However, three regenerated plantlets had a different fragrance from other regenerated plantlets and the original plant. In a comparative analysis, these three plantlets exhibited much higher levels of linalool and lavandulol than linalyl acetate and lavandulyl acetate. From these results, we suggest that the activity or quantity of acetyltransferases may be reduced in those plants. However, neither the shoot or root induction medium altered the essential oil compositions. These results suggest that somaclonal variation may be useful to produce variants with different fragrance in L. vera.     

苹果体细胞悬浮培养及植株再生研究

以苹果试管苗叶片的再生不定芽嫩叶为试材,对苹果体细胞悬浮系的建立及植株再生的影响因素进行了研究.结果表明:在MS+NAA 0.5 mg/L+BA 2.0 mg/L培养基上可诱导获得高活力的愈伤组织.将该愈伤组织转入MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L液体培养基中培养,采用无菌筛网分离获得含单个细胞和少于8～10个细胞的小细胞团进行继代培养,建立体悬浮细胞培养系.将悬浮细胞转到MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L的固体增殖培养基上暗培养25 d后,可形成微型愈伤组织,将该愈伤组织转到MS+BA 5.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L的植株再生培养基上暗培养30 d后转入光下,光照培养30 d后53％的愈伤组织可再生植株.该研究建立的苹果体细胞悬浮培养技术,不仅可用于细胞融合及遗传转化过程中杂种细胞和转化细胞的分离及植株再生研究,而且对于利用组织培养技术筛选变异株系也具有重要意义.     

墨兰组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv) 的研究

 对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv) 病原的效果进行了研究。取1～2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织, 经0, 20和40 mg·L ^{- 1}的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养, 诱导再生植株。RT2PCR检测表明: 从带病叶样提取的RNA经反向转录和PCR扩增反应, 在琼脂糖凝胶电泳中检测到长为767 bp的CymMv病原特异扩增产物, 而健康墨兰叶样中未检测到该扩增产物。单纯利用原球茎顶端分生组织培养获得的试管苗, 脱毒率为72.9%; 原球茎顶端分生组织经过20 mg·L ^{- 1}的三氮唑核苷处理, 可以获得100%的无病毒苗。虽然三氮唑核苷处理造成原球茎顶端分生组织细胞一定程度的伤害, 但经过5～6个月的培养, 分生组织能恢复生长, 不定芽能有效地增殖, 并获得了再生植株。当三氮唑核苷处理浓度为40 mg·L ^{- 1}时, 原球茎的顶端分生组织出现透明和褐变现象, 细胞活力难以恢复。     

原生质体诱变技术选育香菇菌株研究

本文比较了双核菌丝制备的香菇原生质体在不同培养基上的再生率,观察了原生质体再生过程.以存活率37%的剂量进行紫外线诱变处理后,选出102份再生克隆,从中选出在CM培养基和木屑培养基上菌丝长速较快的材料23份,进行栽培试验,其中10份产量提高,出菇较早.在随后的二次或三次组织分离后代的栽培试验中,大部分材料保持了增产、早熟的性状,经显著性测验.其中2份材料的产量显著提高.本研究初步建立了用原生质体诱变技术选育香菇菌株的试验程序.     

苹果MdFT基因对番茄的遗传转化

 通过RT2PCR扩增, 从苹果叶片cDNA中克隆了^FT基因的同源基因^MdFT, 构建了花椰菜病毒35S启动子驱动的MdFT植物表达载体35S: : MdFT, 并利用根癌农杆菌介导法将其导入番茄栽培品种‘中蔬四号’; 同时转化拟南芥A tFT基因作为阳性对照。从添加卡那霉素的筛选培养基上再生了抗性植株,PCR扩增证明, 外源基因MdFT和AtFT已经整合到转基因番茄的基因组, 半定量RT-PCR则证明它们已经在转基因番茄中得到异位过量表达。形态鉴定发现, 转基因番茄植株比非转基因对照植株开花早, 表明成功地从苹果中克隆了成花素基因MdFT, 该基因具有通过转基因缩短苹果树童期的潜在价值。     

紫外线辐照对马铃薯茎段愈伤组织及其再生植株的影响

用紫外线和低温处理马铃薯试管苗茎段,然后观察其再生过程,记载试管苗的生长速度、生长形态等及棚栽苗和扦插苗的生长特点并测定其生理指标,研究紫外线和4℃低温对大西洋马铃薯茎段组织的影响。结果表明,紫外线和4℃低温能够渗入生长点细胞;显著降低愈伤组织的生长势,诱导再生植株及其组织器官发生变异;证实紫外线照射4 min以上或紫外线照射3 min＋4℃处理1个月对马铃薯具有明显的诱变效应。     

抗菌肽MB39基因导入‘皇家嘎啦’苹果及其四倍体植株的培育

 采用农杆菌介导法, 将抗菌肽MB₃₉基因转入‘皇家嘎啦’苹果, 获得了7 个转基因株系。通过秋水仙素诱变染色体组工程育种技术, 由转化体叶片获得了20 个四倍体植株。经PCR 检测和Southern Blotting 杂交证明, 抗菌肽MB₃₉基因已经整合到皇家嘎啦苹果的染色体组中。转基因株系TR21、TR23 提高了对火疫病的抗性。采用流式细胞技术( Flow Cytometry) 确定植株为四倍体。     

四川省攀西地区南瓜、甜菜和辣椒部分病毒种类的ELISA检测

利用马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）的多克隆抗体,以及烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2,BBWV-2）及芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus,TuMV）的单克隆抗体,采用抗原直接包被ELISA法对四川省攀枝花、西昌和德昌地区的南瓜、甜菜和辣椒上采集的病毒病样品进行了检测。结果表明,在87份样品中PVY的侵染最普遍,总检出率达74.71 %|CMV、TMV、TuMV、BBWV-2和PVX的总检出率分别为12.64 %、13.79 %、22.99 %、10.34 %和14.94 %。在87份样品中,仅发现TuMV、PVX及PVY的单独侵染|其余25份样品均检测到2种以上病毒的复合侵染,总检出率为34.72 %。表明攀西地区蔬菜上病毒复合侵染现象普遍,PVY是该地区蔬菜上的优势毒原。