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根据基因库中的猪水泡病病毒(SVDV)高度保守的VP1基因的序列,设计了与SVDV互补的2对特异性引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地扩增出251bp和366bp特异性条带,将其克隆入pMD18-T载体中,并进行序列测定,与已发表的SVDV基因比较发现,核苷酸的同源性为100%,证实为SVDV的VP1段基因。通过检测FMDV、VSV、BHK21细胞等,对照的扩增结果均为阴性,验证其特异。对SVDVRNA进行10倍系列稀释后检测,结果SVDVRNA在10-4稀释度时仍能检测到阳性,说明具有较好的敏感性。此项试验能稳定、高效、快速地检测出猪水泡病病毒。 相似文献
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水貂源犬瘟热病毒的分离鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
利用Vero传代细胞从病死水貂肝脏中分离获得1株病毒。该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变(CPE)。以提取病毒感染细胞总RNA为模板进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),结果扩增出的基因片段大小与预期值相符。根据病毒的致细胞病变特征和RT-PCR鉴定结果,确证该毒株为犬瘟热病毒。 相似文献
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百合无症病毒的RT-PCR检测 总被引:4,自引:1,他引:4
以百合病株为材料,针对百合无症病毒(LSV)的CP基因序列,设计合成了一对特异引物,并通过RT-PCR技术扩增出与预期大小相一致的870 bp片段,而对照无任何产物,应用该方法对田间百合中的LSV的带毒情况进行检测,检出率达80%,检测灵敏度高,专一性强,为百合的病毒检测提供了一种分子生物学检测方法. 相似文献
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依据马铃薯病毒PVS、PVX、PLRV、PVA的CP保守序列设计特异性引物,从马铃薯病叶组织中提取出病毒总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增,得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物,建立了能够同步检测PVS、PVX、PLRV、PVA的RT-PCR多重检测体系。该方法对PVS、PVX、PLRV、PVA扩增出的靶带大小分别为435、625、222、300 bp,凝胶电泳易辨别区分。研究结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、快速简便,为马铃薯病毒的高效检测提供了有效手段。 相似文献
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[目的]建立一种犬瘟热病毒(CDV) RT-nested PCR检测方法.[方法]根据CDV弱毒株Onderstepoort 的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性、重复性实验.[结果]特异性试验表明,该方法可以特异扩增出CDV NP基因片段,但从RNA病毒狂犬病病毒(RV),DNA病毒犬细小病毒(CPV)以及正常Vero细胞中均未扩增出该条带.敏感性试验表明,RT-PCR可以扩增10-3稀释度的病毒RNA,而建立的RT-nested PCR可以扩增10-6稀释度的病毒RNA,后者的敏感性明显高于前者.重复性实验表明,不同情况下的3次重复实验,结果相同.用RT-nested PCR对石河子地区疑似感染CDV的病料进行检测,结果表明,该研究建立的RT- nested PCR不仅能有效的检测CDV感染,而且能够检测不同组织的样品.[结论]建立的RT-nested PCR检测方法,适用于动物CDV的快速诊断和流行病学调查. 相似文献
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根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。 相似文献
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为丰富我国犬瘟热病(CD)的流行病学资料,同时为CDV贵州分离株主要抗原基因及结构研究奠定基础,对贵阳市某宠物医院犬瘟热病毒金标卡检测呈阳性病死犬的肝脏、肺脏、淋巴结等组织,取适量经混合研磨过滤后,同步接种于Vero传代细胞上进行病毒分离培养,并对该分离毒株进行理化特性、电镜形态、血清学和核酸检测等系列鉴定。结果表明:在Vero细胞上盲传至第6代时稳定出现特征性的CPE,该毒株为RNA囊膜病毒,电镜下可见胞浆包涵体、病毒粒子呈晶格状排列,病毒可被犬瘟热阳性血清中和,分离病毒为犬瘟热病毒并被命名为CDV-GZ1株。 相似文献
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表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒构建与包装 总被引:1,自引:1,他引:1
为构建表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒,用MluⅠ和SphⅠ双酶切真核表达载体pVAXLPN,获得CDVN基因表达盒,将CDVN基因表达盒克隆入预先用SspⅠ酶切后的线性化质粒pVAXAE3中,构建含CDVN基因表达盒的转移质粒pVAX△E3LPN。用NruⅠ和SalⅠ双酶切转移质粒pVAX△E2LPN。回收E3区部分缺失的含CDVN基因表达盒的目的片段,定向克隆入同样酶切处理含CAV-2全基因组的质粒载体ppoly2-CAV-2中,构建E3区部分缺失的包含CDV N基因表达盒的重组质粒pCAV-2-CDVLPN。重组质粒pCAV-2-CDVLPN经AscⅠ酶切获得线性化基因组CAV-2-CDVLPN。此基因组与NruⅠ和Sal Ⅰ分别酶切CAV-2 SY基因组获得的片段混合,利用脂质体介导共转染MDCK细胞,重复转染3次后。出现典型CAV-2病变,经电镜观察和酶切鉴定,证明表达犬瘟热核蛋白的重组犬2型腺病毒包装成功。 相似文献
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犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用问接ELJSA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性.结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别命名为AD7、AE2、CE3、EH5、GG6和GF1.交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,6株单抗的特异性良好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单抗.培养上清液及小鼠腹水ELISA效价分别为26~211和104~107.相加试验表明:单抗AE2、CE3、GG6和GF1具有共同的表位,而单抗AD7和EH5识别的位点与其他4株不同. 相似文献
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【目的】了解近年来犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus,CDV)在我国中部地区的流行及遗传变异情况。【方法】于 2019—2020 年期间从河南和河北两省部分地区随机采集犬、水貂、貉和狐狸样品 459 份,进行 RT-PCR 检测、毒株分离鉴定、病毒血凝素(Hemagglutinin,H)基因测序和遗传进化分析。【结果】检出 CDV 阳性样品 87 份,阳性率为 18.96%。犬在秋季的 CDV 阳性率较高,为 37.77%;水貂、貉和狐狸则多于夏季 7 月患病;不同年龄的动物均可发病,幼龄动物更为易感。从病犬样本中成功分离到 1 株 CDV,经鉴定后命名为 HB19-1 株。基于 H 基因序列的遗传进化分析表明,HB19-1 株属于亚洲 1 型毒株,与 GenBank 中的KJ994343 毒株同源性最高,与疫苗株Onderstepoort(GenBank 登录号:AF378705)的核苷酸和氨基酸同源性分别为 91.3% 和 90.2%。【结论】在河南和河北部分地区犬及毛皮动物的 CDV 流行病学调查过程中成功分离到 1株犬源毒株 HB19-1,遗传进化分析显示该毒株为亚洲 1 型,且与疫苗株同源性较低。研究结果可为流调所涉地区的 CDV 预防、疫苗选择与使用提供依据。 相似文献