中药成分对传染性法氏囊病毒感染细胞的影响

将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、中药和病毒同时加入 ,观察细胞病变的程度 ,以评价它们对IBDV感染细胞的影响。结果表明 ,先加中药后接种病毒和中药与病毒同时加入时 ,多数中药成分处理组在病毒接种后 72h的细胞病变程度明显减轻 ,表明多数中药能抑制病毒感染细胞 ,且有一定的量效和时效关系。     

抗羊传染性脓疱病毒中药组方的筛选

为了给临床兽医提供可靠的抗羊传染性脓疱病毒中药组方,试验从甘草苷、绿原酸、黄芩苷、咖啡酸、栀子苷、黄芪多糖及板蓝根多糖中选取三种中药成分按照一定比例组成10个中药组方,利用细胞病变(CPE)观察和MTT比色相结合的方法,在细胞上筛选出抗羊传染性脓疱病毒作用较强的组方。结果表明:通过细胞筛选,组方Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的抗病毒效果最好,并且不同组方加入方式和组方浓度均对其抗病毒能力有一定影响。     

8种中药成分体外抗犬细小病毒的研究

本研究旨在观察8种中药成分黄芪多糖（APS）,白术多糖（RAPS）,黄芩多糖（BSPS）,金银花多糖（FLPS）,栀子苷（CS）,苦参生物碱（SFA）,黄芪皂苷（AS）和金银花黄酮（FLF）体外对犬细小病毒（CPV）感染细胞能力的影响。分别将8种中药成分通过先加中药再接病毒、病毒和中药感作后加入和先接种病毒再加中药3种加药方式加入到培养24h的F81细胞中,于病毒接种后72h用MTT法测定F81细胞活性以评价各中药成分对F81细胞抵抗犬细小病毒感染的影响。结果,在第1种加药方式下,APS、RAPS、BSPS、FLPS抗CPV作用较强;在第2种加药方式下CS的抗病毒作用最为显著;在第3种加药方式下CS、SFA抗病毒作用最为显著。结果表明,8种中药成分均能不同程度地促进F81细胞抵抗病毒感染,部分中药成分的抗病毒作用与加药方式有关且呈一定的量效关系。     

金英汤及其活性成分体外对鸡胚成纤维细胞最大安全浓度的测定

为了评价中药方剂"金英汤"及其主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖的细胞毒性,利用鸡胚成纤维细胞来检测药物的细胞最大安全浓度。中药方剂"金英汤"的细胞最大耐受量为0.488 mg/mL(生药浓度),而其主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖的细胞最大耐受量分别为0.031,0.244和0.488 mg/mL。     

甘草多糖和甘草酸对NDV感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

从甘草中提取甘草多糖和甘草酸,进行抗病毒活性比较。用MTT法比较了它们对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长及以三种加药方式(先药后毒、先毒后药、药毒同时)抵抗新城疫病毒(NDV)感染细胞的影响,并用平均病毒抑制率比较甘草多糖和甘草酸的抗病毒活性。结果表明,先药后毒,甘草多糖能显著抑制NDV感染细胞(P0.05),平均病毒抑制率为60.6%;先毒后药,甘草多糖和甘草酸都能显著抑制NDV感染细胞(P0.05),其中甘草多糖的平均病毒抑制率为74.28%,甘草酸为62.3%。通过平均病毒抑制率比较,表明甘草多糖的抗病毒活性优于甘草酸。     

中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL,选择安全浓度范围内的(39.06～625μg/mL)5种浓度的各级多糖,用3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药)检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP_(50)、CAP_(30)、CAP_t、CAP_(80)和CAP_(70)均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP_(50)、CAP_(30)能显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05),阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP_(50)及CAP_(30)的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

维药阿魏根多糖体外抗新城疫病毒的作用

用水提醇沉法得到阿魏根总多糖FSPt和4种分级多糖FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70),FSP_(80)用苯酚-硫酸法及红外光谱对阿魏根多糖进行检测。用MTT法测定各多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,选择安全浓度范围内5种浓度的各多糖与新城疫病毒(NDV)用3种不同的加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用MTT法测定各多糖对NDV感染CEF能力的影响。先加多糖后接病毒组和先接病毒后加多糖组FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70)和FSPt均能显著抑制NDV感染CEF;多糖与病毒感作后加组FSP_(70)和FSP_(80)有显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05)。结论:新疆阿魏根多糖具有较好的抗NDV作用,其中FSP_(30)和FSP_(50)对病毒的抑制率较高,FSP_(70)在3种加药方式中均表现出显著且稳定的抗NDV作用,综合考虑,FSP_(50)具有很好的研发前景。     

中药复方粗提物对IBDV感染细胞能力的影响

将中药方1、方2、和方3的粗提物与鸡传染性法氏囊病毒以三种顺序（先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入）加入到培养24h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞（CEF）上，观察它们对病毒感染细胞能力的影响。结果表明：在细胞安全浓度范围内，方1、方2和方3的粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时均能抑制病毒感染，且与浓度与加药方式有关；以补气、清热凉血、滋阴为主的方3优于以补气、清热凉血为主的方1和以补气为主的方2。     

中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖（CAP）对体外抗新城疫病毒（NDV）能力的影响，本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖，通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测，采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度，多糖的安全浓度统一为625 μg/mL，选择安全浓度范围内的（39.06~625 μg/mL）5种浓度的各级多糖，用3种加药方式（先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药）检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示，先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP₅₀、CAP₃₀、CAP_t、CAP₈₀和CAP₇₀均能显著抑制NDV感染CEF的能力，两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%；先加多糖后接病毒组CAP₅₀、CAP₃₀能显著抑制NDV感染CEF的作用（P<0.05），阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%，其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性，其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP₅₀及CAP₃₀的抗NDV活性较强，可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

玉屏风多糖体外抗新城疫病毒效果的研究

以新城疫病毒(NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides YPF-P)及其含药血清的抗病毒效果。SPF兔采用500 mg/kg体重YPF-P灌服给药,于第1、3、5、7天采集全血,制备不同浓度含药血清;培养SPF鸡成纤维细胞(CEF),分别加入不同浓度的YPF-P及其含药血清,进行细胞毒性试验;采用先加多糖后加病毒、先加病毒后加多糖、多糖和病毒感作后同时加入的3种给药方式,观察YPF-P及其含药血清对病毒的阻断、抑制和直接杀灭作用。结果与正常对照组相比,不同浓度YPF-P(0.625、1.25、2.5、5、10 mg/m L)和7 d的YPF-P含药血清的CEF细胞活性均显著增强(P<0.05或P<0.01)。CEF培养24 h后,YPF-P抑制病毒作用明显,与NDV对照组相比差异极显著(P<0.01);3种给药方式与NDV对照组相比,含药血清组细胞活性均极显著升高(P<0.01)。表明YPF-P及其含药血清均对CEF无毒副作用,且可显著增强细胞活性;YPF-P及其含药血清有较好的抑制病毒毒性的作用。     

藏药材抗新城疫病毒的体外试验研究

为筛选抗新城疫病毒藏药复方的组分药,将安全浓度范围内的藏菖蒲、红景天、灵芝菌柄、灵芝菌盖、决明子、天冬、龙胆、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味松石丸和二十五味珍珠丸的煎液和鸡新城疫病毒（NDV）分别以3种方式（先加藏药后接种病毒、先接种病毒后加藏药、藏药和病毒感作后同时加）加入到鸡胚成纤维细胞（CEF）的培养体系中,72h后用MTT法测定各藏药对NDV感染CEF能力的影响。结果表明,多数藏药均能显著抑制NDV感染细胞,且与加药方式和药物浓度有一定关系。藏菖蒲、灵芝菌盖和降香在3种加药方式中均呈现显著效果,可作为抗NDV藏药复方的组分药。     

复方中药成分对新城疫疫苗免疫雏鸡外周血T淋巴细胞转化和血清抗体效价的影响

选择4种中药成分（黄芪多糖、淫羊藿多糖、峰胶黄酮、人参皂甙）组成2个复方，各按3个剂量水平与新城疫疫苗混合后免疫雏鸡，以无佐剂苗和油乳苗为对照，分别于免疫后7、14、21、28、35、42d采血，用MTT法和微量血凝法测定T淋巴细胞转化和血清抗体效价的动态变化。结果表明。中药佐剂能显著促进淋巴细胞转化。提高血清抗体效价，多数时间点与油佐剂的效果相当，部分时间点显著强于油佐剂。综合判定方1高剂量和方2中剂量的效果最好。     

中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响

为筛选增强免疫作用较好的中药成分和研制新型复方中药成分免疫增强剂，比较了4种浓度的当归多糖（CAPS）、黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶多糖（PPS）、淫羊藿黄酮（EF）、蜂胶黄酮（PF）、黄芪皂苷（AS）和人参皂苷（GS）9种中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响。结果表明，多数中药成分能促进淋巴细胞增殖，其中APS、EPS、GS和AS等在一定浓度既能单独又能协同ConA或LPS刺激淋巴细胞增殖，以EPS和APS作用最强。同时根据浓度试验结果，选出各药的合适浓度，进一步比较它们作用的差异，发现EPS和GS效果最好。这些中药成分可以作为复方中药成分免疫增强剂的组分药。     

一定纯度中药复方多糖对鸡细胞免疫和体液免疫的影响

为筛选对鼠免疫增强效果显著的一定纯度中药复方多糖(cCHMPS)对雏鸡的最佳免疫增强剂量,本试验将300只1日龄雄性良凤青脚麻鸡随机分为6组,即空白对照组、盐酸左旋咪唑组、黄芪多糖组及cCHMPS高、中、低剂量组,每组各50只.分别于8日龄皮下注射生理盐水、盐酸左旋咪唑、黄芪多糖及不同剂量的cCHMPS,连续7 d,在免疫后第8、14、21、35、42天采血,测定外周血中T、B淋巴细胞增殖活性及血清中新城疫病毒抗体含量.试验结果表明,黄芪多糖和不同剂量cCHMPS均能显著或极显著促进外周血T、B淋巴细胞增殖(P<0.05;P<0.01),提高新城疫病毒抗体浓度,增强机体细胞免疫和体液免疫水平,且中剂量的cCHMPS的免疫增强效果最好.     

新城疫病毒F基因的真核表达及其免疫原性检测

为了探讨F基因在DNA免疫防制新城疫(ND)中的免疫原性,将NDV Z株F基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-H is-TOPO中,构建了真核表达质粒pcDNA NDV ZF。在脂质体作用下将pcDNA NDV ZF转染CEF细胞,用间接免疫荧光试验检测,在CEF细胞中可见有大量F蛋白表达。将重组质粒以100μg/只的剂量肌注免疫SPF雏鸡,经间接ELISA试验检测二免前后的血清,结果证明,pcDNA NDV ZF基因可在SPF鸡体内诱导相应抗体的产生,具有特定的免疫原性。     

蜂胶黄酮对宿主细胞抗病毒能力的影响

本试验旨在研究蜂胶黄酮对宿主细胞抗病毒能力的影响。首先采用MTT法测定蜂胶黄酮对宿主鸡胚成纤维细胞（CEF）和PK-15细胞的安全浓度;然后将蜂胶黄酮从最大安全浓度250 μg/mL开始倍比稀释至15.6 μg/mL共5个浓度,将蜂胶黄酮分别与新城疫病毒（NDV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）及猪细小病毒（PPV）一起加到相应长成单层的宿主细胞CEF或PK-15中,在感染后24、48和72 h分别用MTT法测定宿主细胞的存活率,代表蜂胶黄酮提高宿主细胞抗病毒能力的指标。结果显示,蜂胶黄酮可显著提高宿主细胞抗病毒能力,这种活性与其剂量正相关,即剂量越大作用越好。蜂胶黄酮提高宿主细胞抗有囊膜病毒NDV和TGEV作用主要体现在病毒感染的前期,而提高宿主细胞抗无囊膜病毒IBDV和PPV作用主要体现在病毒感染的后期。提示蜂胶黄酮可用于NDV和TGEV的预防及IBDV和PPV的治疗。     

Effects of Propolis Flavone on Antiviral Ability of Host Cell

This experiment was conducted to study the effects of propolis flavone (PF) on antiviral ability of host cell.First,the maximal safe concentration of PF to CEF and PK-15 was determined by MTT method.Then PF was diluted to five concentrations (from 250 to 15.6 μg/mL) with maintenance medium and acceded to foster system of CEF or PK-15 with NDV,IBDV,TGEV and PPV,respectively,and the cell viability was observed by MTT method at 24,48 and 72 h after infection as the index of high antiviral ability of host cell.The results showed that PF could promote the antiviral ability of host cell.And the effects were related to PF concentration,as the concentration increased,the effects were better.The antiviral activity of PF to NDV and TGEV with envelope in host cell existed in infectious earlier stage,while for IBDV and PPV without envelope,the activity appeared in infectious later stage.The results indicated that the antiviral effect period and mechanism of propolis flavone was different for different viruses,propolis flavone could be use for the prevention of NDV and TGEV,and for the treatment of IBDV and PPV.     

黄芪多糖和淫羊藿多糖对培养细胞增殖和衰老的影响

将安全浓度范围内的黄芪多糖(astragalus polysaccharide，APS)和淫羊藿多糖(epimedium polysaccharide，EPS)分别加入到培养12h和24h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，测定加药后CEF增殖率和成层率的动态变化。结果表明，2种多糖均能促进细胞增殖和延缓细胞衰老，EPS的作用强于APS，具有一定的量效、时效关系。     

中药成分对培养细胞的生长和抵抗病毒感染的影响

将 5种浓度的含当归多糖 (CAPS)、黄芪多糖 (APS)、板蓝根多糖 (IRPS)、淫羊藿多糖 (EPS)、蜂胶多糖 (PPS)、淫羊藿黄酮 (EF)、蜂胶黄酮 (PF)、黄芪黄酮 (AF)、黄芪皂甙 (AS)和人参皂甙 (GS) 1 0种中药成分分别加入到已培养 48h、 1 2h前接种新城疫病毒的鸡胚成纤维(CEF)细胞单层中 ,于病毒接种后 72h用中性红染料吸收法测定CEF细胞的活性 ,以评价各中药成分对培养细胞的生长和抗病毒感染的影响。结果表明 ,EF、PPS和PF显著促进细胞生长 ,CAPS、IRPS和GS显著抑制细胞生长 ,EF、GS、PPS、AF、PF、APS和EPS 7种中药成分显著抑制病毒感染 ;部分中药成分的作用各有所长 ,且有一定的量效关系。