大豆黄酮和染料木素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响

通过体外细胞培养的方法探讨大豆黄酮（Daidzein,Da）和染料木素（Genistein,Ge）对奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响。试验分空白对照组、10ng／mL雌二醇（Ez）组、不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）组,培养72h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果表明,10、100ng／mLGe组和100、1000ng／mLDa组同空白对照组比较可显著促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖（P〈0．05）,但均显著低于E2组（P〈0．05）。另取处于对数生长期的乳腺上皮细胞加入不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）继续培养24h,检测细胞培养液中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。结果表明,100、1000ng／mLDa组及100、1000ng／mL Ge组较空白组显著提高了T—SOD活性（P〈0．05）,显著降低了MDA含量（P〈0．05）;100、1000ng／mL Da组及10、100、1000ng／mL Ge组显著提高了NO含量（P〈0．05）;1000ng／mL Da组及100、1000ng／mL Ge组显著提高了GSH—PX活性（P〈0．05）。可见,Da和Ge在一定浓度范围内均有促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平提高的作用。     

EGF和IGF-I对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响

本文研究了EGF、IGF-I以及EGF和IGF-I联合对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,以确立绵羊卵母细胞体外成熟的最佳条件。结果表明：50ng／mL的EGF的成熟率和卵裂率分别为71．2％和45．5％,显著高于对照组和10、20、30、40ng／mL组（P〈0．05）,当EGF浓度达到100ng／mL时,成熟率和卵裂率最高,分别为72．9％和45．7％;40ng／mL IGF-1的成熟率和卵裂率分别为70．7％和58．5％,显著高于对照组和10、20、60、80、100ng／mL组（P〈0．05）,当IGF-I的浓度为100ng／mL时,成熟率和卵裂率最低,分别为38．8％和20．0％,与对照组和其它各试验组差异显著（P〈0．05）;50ng／mLEGF和40ng／mLIGF-I联合使用,成熟率和卵裂率分别为85．6％和61．0％,同对照组和50ng／mLEGF组、40ng／mLIGF-I组之间差异显著（P〈0．05）。     

牦牛繁殖季节若干激素动态变化研究

为掌握母牦牛繁殖季节促卵泡素（FSH）、促黄体激素（LH）、孕酮（只）、瘦蛋白（Leptin）、雌二醇（178-E2）激素含量变化,在牦牛繁殖季节对其卵巢、卵泡变化进行直肠检查,对FSH、LH、P4、Leptin、17β-E2激素进行测定。结果表明,牦牛在繁殖季节非发情期其FSH、LH、P4、Leptin、7β-E2含量在0．0836～0．3767（mlU／m1）、0．1350～1．0109（ng／m1）、3．1283～7．4809（pg／m1）、0．0650～8．0119（ng／m1）、0．1604—0．5139（mlU／m1）。在繁殖季节发情期以上激素含量分别为0．1280～0．4050（mlU／m1）、0．6820～1．6744（ng／m1）、3．1586～3．8438（pg／m1）、0．5275～1．3760（ng／m1）、0．4l10～0．5975（mlU／m1）。由此说明牦牛繁殖季节非发情期和发情期其激素变化个体差异很大,因此牦牛发情期的长短个体差异较大。     

影响绒山羊母羔卵母细胞体外成熟因素的研究

研究了母羔超排方法、成熟培养时间及成熟液添加EGF对绒山羊母羔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,直径〉130μm组PbI率（73．27％）显著高于直径120～130μm组（P〈0．05）,直径〈120μm组PbI率（32．22％）极显著低于其他组（P〈0．01）;卵母细胞成熟培养24～27h组PbI率（68．06％）显著高于21～24h组（P〈0．05）,27～30h组PhI率（73．47％）高于24～27h组,但差异不显著（P〉0．05）;10ng／mL组和20ng／mLEGF组PhI率极显著高于对照组（P〈0．01）,20ng／mLEGF组pbI率（71．43％）显著高于10ng／mL（P〈0．05）。     

不同细胞因子对水牛原始生殖细胞传代培养的影响

为探讨不同细胞因子对水牛原始生殖细胞（PGCs）传代培养的影响，将PGCs分别采用A、B、C、D、E、F和G共7种培养基进行培养，即A组：基础液＋10ng／mL白血病抑制因子（LIF）＋10ng／mL碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）；B组：基础液＋20ng／mL LIF＋20ng／mL bFGF；C组：基础液＋20ng／mL LIF＋10ng／mL bFGF；D组：基础液＋20ng／mL LIF；E组：基础液＋20ng／mL LIF＋20ng／mL bFGF＋20ng／mL干细胞因子（SCF）；F组：基础液＋20ng／mL LIF＋40ng／mL bFGF＋40ng／mL SCF；G组（对照组）：基础液。将机械法分离的PGCs小集落接种到水牛胎儿成纤维细胞（BEF）饲养层上进行传代培养。结果，原代时，A、B、C、D、E和F组的克隆数目都显著高于对照组（P％0．05），其中E和F组的克隆数目显著高于A组（P〈0．05），而与B、C、D组差异均不显著（P〉0．05）；1～8代时，B、C、D、E、F组的克隆数目显著高于A组（P〈0．05）；对照组传代数仅为2代，A组为5代，而B、C、D、E和F组均为8代以上。结果表明，在传代过程中，LIF起主要作用，20ng／mL的LIF浓度可以满足水牛PGCs传代培养的需要。     

抗IVM多克隆抗体检测牛组织中IVM残留的研究

用自制的抗伊维茵素（IVM）多克隆抗体检测牛肌肉和肝脏中IVM的残留,将IVM以5．0ng／g、10．0ng,g、20．0ng／g和40．0ng／g的量分别添加至经处理的各空白组织中,用竞争ELISA法测得IVM在肌肉和肝脏中的回收率为93．9％～98．3％,变异系数为2．1％～5．1％,最低检测限为0．94ng／g。     

猪肉和牛奶中10种磺胺类药物残留检测超高效液相色谱法研究

建立了猪肉和牛奶中磺胺嘧啶（SD）、磺胺噻唑（ST）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺氯哒嗪（SPD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲基异嗯唑（SM2）、磺胺氯吡嗪（Esb3）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹嗯啉（SQ）共10种磺胺类药物残留检测的超高效液相色谱（UPLC）法。色谱条件：色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱（2．1mm×50mm,1．7μm）;流动相为50％甲醇乙腈溶液-2％乙酸水溶液,梯度洗脱;紫外检测波长270nm;柱温30℃;进样量4μL;外标法定量。结果表明：10种组分在20～1000ng／mL浓度范围内,呈良好线性关系,相关系数R^2均大于0．998;方法检出限为20ng／g,定量限为50ng／g;在猪肉和牛奶中添加浓度分别为50、100、200ng／g时,平均回收率为75．1％～99．8％,批内、批间平均RSD均小于13．2％。     

氯霉素残留伏安免疫测试法的电化学条件

在间接竞争ELISA的基础上，建立了以碱性磷酸酶（ALP）-对硝基苯磷酸（pNPP）为反应体系的检测氯霉素（CAP）残留的伏安免疫方法，并对此法的电化学条件进行了详细的探讨。结果，在0．2mol／L的B-R电解质溶液（pH3．0）中，当扫描速度为50mV／s时，伏安法对硝基苯酚（PNP）的灵敏度最佳；且在1．2V处，该物质具有良好的氧化峰形。用此法测试CAP的检测下限达到0．064ng／mL，检测线性范围为0．15～600ng／mL。     

表皮生长因子和胰岛素样生长因子对水牛卵母细胞胞质成熟的影响

以皮层颗粒（CG）单层分布于质膜下做为卵母细胞胞质成熟的标志,利用CG荧光染色法,研究了不同浓度表皮生长因子（EGF）和胰岛素样生长因子（IGF-1）及其组合对水牛卵母细胞胞质成熟的影响。结果发现：（1）添加不同浓度的EGF（10、20、30、50ng／mL）都可以提高胞质的成熟率,但是组间差异不显著（P〉0．05）;皮质颗粒的分布随着EGF浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变;（2）在成熟液中添加IGF-130ng／mL时效果较好,能显著提高卵母细胞胞质的成熟率;皮质颗粒的分布随着IGF-1浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变,在添加IGF一130ng／mL时,在皮层分布最好,随着IGF-1量的进一步增加,皮质颗粒又向中间分布转变;（3）添加20ng／mL EGF＋30ng／mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率高于添加30ng／mL的IGF-1组,显著高于添加20ng／m LEGF组和对照组（P〈0.05）。由此表明,EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟有协同作用。     

鸡肉和鸡蛋中金刚烷胺与金刚乙胺残留检测UPLC-MS/MS法研究

建立了鸡肉和鸡蛋中金刚烷胺与金刚乙胺残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法（UPLC-MS／MS）。样品在酸性条件下乙腈提取后,用正己烷去除脂肪,高速离心去除蛋白质等杂质,上机测试。液相色谱条件：色谱柱为BEHC18（50×2．1mm,1．7μm）,流动相为0．1％甲酸乙腈溶液＋0．1％甲酸水溶液,流速0．3mL／min,柱温30cI二,进样量10μL。质谱条件：电喷雾离子源（ESI^＋）,多反应监测（MRM）方式进行采集。结果表明：金刚烷胺与金刚乙胺在2～100ng／mL浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数（R。）分别为=0．9977和0．9988;鸡蛋和鸡肉中金刚烷胺与金刚乙胺残留检测方法检测限均为1ng／g,定量限均为2ng／g。从鸡肉组织在2、5和10ng／g三个添加浓度检测结果可以看出,金刚烷胺与金刚乙胺的平均回收率分别为79．6％～107．5％和78．4％～101．2％,批内和批间RSD均小于15％。从鸡蛋在2、5和10ng／g三个添加浓度检测结果可以看出,金刚烷胺与金刚乙胺的平均回收率分别为90．8％～111．1％和75．4％～87．4％,批内和批间RSD均小于15％。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

笼养丹顶鹤繁殖行为和粪样中性激素水平变化的关系

2007年3月～2008年2月,在哈尔滨北方森林动物园,选2对健康的成年丹顶鹤,采用目标取样和扫描取样相结合的方法进行了行为观测,同时收取粪便提取激素,利用放射免疫分析法（RIA）测定了笼养丹顶鹤粪样中睾酮、孕酮、雌二醇的浓度。试验结果表明：笼养丹顶鹤繁殖行为呈显著的季节变化,其对鸣、炫耀行为的高发期在3、4月（P〈0．05）,营巢行为在3月极显著高于其他月份（P〈0．01）,丹顶鹤的交尾行为集中出现在3、4月（P〈0．05）;繁殖期雄性丹顶鹤粪便中睾酮平均水平为（259．59±149．70）ng／dl,非繁殖期为（84．81±27．35）ng／dl,二者差异显著,繁殖期雄鹤求偶炫耀、交尾、卧巢等的发生频次与粪便中睾酮呈极显著相关（P〈0．01）,其对鸣、警戒以及营巢都与睾酮变化水平呈显著相关（P〈0．05）。繁殖期雌性丹顶鹤粪便中的孕酮平均浓度为（9．65±7。15）rig／m1,非繁殖期为（2．76±0．97）ng／ml,差异显著,繁殖期雌鹤粪便中的孕酮激素水平与其卧巢行为呈显著性相关（R=0．8848,P〈0．05）;繁殖期雌性丹顶鹤粪便中雌二醇平均浓度为（30．50±61．77）pg／ml,非繁殖期为（8．17±3．72）pg／ml,二者差异显著,繁殖期雌鸟雌二醇变化水平与其繁殖行为的相关性不显著（P〉0．05）;雌性丹顶鹤粪样中雌二醇激素的变化水平与其产卵时间有着较为密切的关系。     

牛奶巾6种磺胺类药物残留的HPLC分析方法研究

本文对反相高效液相色讲仪（HPLC）分析牛奶中6种磺胺类药物（SAs）残留的样品前处理方法和色谱条件进行优化。结果表明：采用乙腈提取SAs残留，用正己烷液-液分配（除去脂溶性物质）和碱性氧化铝SPE柱净化，UV270nm检测，在0．01-8．0μg／mL浓度范围内，各药物峰面积与药物浓度之间呈良好的线性关系假（R^2=0．999）；平均添加回收率均在80％以上，变异系数在6％以下。SD、SM2、SMD、SMZ、SDM和SQX的检测限分别为2．30、3．16、3．60、5．42、11．76ng／mL和15．66ng／mL。     

猪尿中6种β-受体激动剂残留的超高效液相色谱-串联质谱法同时测定

建立了猪尿中苯乙醇胺A、莱克多巴胺、克仑特罗、西马特罗、特布他林、沙丁胺醇等6种β-受体激动剂在多反应监测模式下超高效液相色谱．串联质谱同时检测的方法。尿样经酶解,调至酸性,经固相萃取技术（SPE）净化富集。6种受体激动剂在0．2-5ng／mL的浓度范围内线性关系良好。方法的检出限和定量限分别为0．2ng／mL和0．5ng／mL。考察了0．5ng／mL、1ng／mL和2ng／mL三个添加浓度的回收率。6种化合物的加标回收率为87．2％-106．6％：RSD为1．2％-13．8％。该方法精密度好,灵敏度高,重现性好,能简便、快速、准确地测定猪尿中六种β-受体激动剂。     

我国市售液态纯牛奶黄曲霉毒素M1含量调查分析

本研究采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测了采集自我国29个省、市、自治区以当地所产原料奶为原料生产的不同品牌市售超高温灭菌液态全脂纯牛奶（UHT奶）及巴氏灭菌液态全脂纯牛奶（巴氏奶）共计112种样本的黄曲霉毒素M１含量。结果表明：（1）112种牛奶样本的黄曲霉毒素M,含量介于0～130．32ng／kg之间,均低于GB2761—2005规定的≤500ng／kg的最高限量和NY／T657—2007、NY5140—2005中规定的≤200ng／kg的最高限量,说明我IN市售液态纯牛奶黄曲霉毒素M1含量安全;（2）我国液态纯牛奶黄曲霉毒素M1含量呈明显的地域性分布,南方明显高于北方。     

阿维菌素微囊在家兔体内的药动学研究

为了考察阿维菌素微囊在家免体内的药动学行为,将10只家兔随机分为2组,皮下注射阿维菌素微囊注射液（1．0mg／kg）和普通阿维菌素注射液（0．2mg／kg）,用高效液湘色谱法测定家兔血浆中阿维菌素的浓度,3P87药动学软件处理血浆药物浓度-时间数据。研究结果表明,阿维菌素微囊注射液和普通阿维菌素注射液药-时数据都符合一级吸收二室开放模型,阿维菌素微囊注射液的主要动力学参数分别是t1/2kα=21．72h;t1/2α=56．65h;t1／2β=239．43h;tmax=63．05h;Cmax=34．30ng／mL;AUC=11573．88ng／mL·h。普通阿维菌素注射液的主要动力学参数分别是t1/2kα=7．38h;t1/2α=14．59h;t1／2β=32．84h;tmax=19．78h;Cmax=20．88ng／mL;AUC=1482．04ng／mL·h。说明阿维菌素微囊化后。与普通阿维菌素注射泣相比,吸收慢,消除慢,作用时间长．生物利用度显著提高。     

SPF雏鸡血清中IgG含量的研究

为了研究不同日龄SPF雏鸡血清中IgG的含量,利用兔抗鸡IgG作为第一抗体（Ab1）包被,辣根过氧化物酶——兔抗鸡IgG为第二抗体（Ab2）,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法定量测定SPF雏鸡血清中IgG的含量。试验结果显示,所应用的双抗体夹心法灵敏度为100ng／mL,测得SPF雏鸡血清中IgG为4．827-1．822μg／mL。该法特异性强、敏感性高,可检测最低含量为100ng／mL的含量。     

量子点荧光免疫分析法检测鸡肉药物残留

近期，由中国与澳大利亚科研工作者合作发展出一种快速非竞争性量子点荧光免疫分析方法（cFLISA）可用来检测鸡肉中恩诺沙星残留。这种荧光检测系统终端使用羊抗鼠二抗量子点，可量化检测1-100ng／mL范围内的恩诺沙星，最小检测值为2．5ng／mL。     

一次性电流型酶免疫传感技术快速检测禽流感病毒抗原

为研究快速检测禽流感病毒（AIV）抗原的电化学免疫传感新技术,将HRP标记AIV抗体（HRP-anti-AIV）掺于壳聚糖中,并修饰于丝网印刷碳电极表面,制备一次性快速检测禽流感病毒抗原（AIV-Ag）电化学免疫传感器。采用一步法检测AIV-Ag和循环伏安法监测酶促反应,利用还原电流的降低率来测定样品中的AIV-Ag。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下,免疫电极线性检测范围为3．75～125ng／mL,检出限为0．56ng／mL（S／N=3）。该免疫传感技术具有较好的特异性、重现性（RSD〈7．10％）、稳定性（2周后电流响应为初始值的91．46％）和准确性（与ELISA符合率为91．18％）。另外,将四通道丝网印刷碳电极用于禽流感免疫传感器的制备,结果表明免疫电极的一致性有较好的改进。因此,该免疫传感技术有望用于AIV—Ag的快速检测。     

FSH对仔猪睾丸支持细胞增殖和GDNF表达的调节

以原代培养的仔猪睾丸支持细胞（SC）为试验模型，研究了FSH对SC胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达及其增殖的影响。结果显示，外源性添加FSH可促进GDNF蛋白表达，而且这种促进作用具有浓度和时间依赖关系，GDNF蛋白水平随着FSH浓度的增加而升高，FSH浓度为50ng／mL时，GDNF水平达到最高，然后逐渐降低；FSH（50ng／mL）作用30min，可显著促进GDNF蛋白的表达（P〈0．05），当FSH作用1h时，GDNF蛋白水平达到最高，随后逐渐降低。FSH可以时间-剂量依赖性促进SC增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，FSH（50ng／mL）作用30min时，PCNA的表达显著增加（P〈0．05），作用1h达极显著水平（P〈0．01），至2h时，PCNA蛋白的表达水平达到最高，随后逐渐降低。提示，FSH可在体外条件下通过刺激SC表达GDNF进而促进其增殖。     

气相色谱-质谱法同时测定猪肝中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残留

猪肝用乙酸乙酯、盐酸溶液提取后，经SCX固相萃取柱净化、BSTFA衍生化，定容后用气相色谱-质谱（GC／MS）外标法测定。测定结果表明：采用该方法，猪肝中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的检出限分别为0．3、1．0ng／g。盐酸克伦特罗在3．0～300ng／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为85．6％；莱克多巴胺在10～1000ng／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为76．6％。该方法简便可靠、干扰小、灵敏度高，可用作猪肝中克伦特罗和莱克多巴胺残留的同时测定。