进口秘鲁鱼粉检出肠炎和山顿堡沙门氏菌

进口秘鲁鱼粉检出肠炎和山顿堡沙门氏菌吴育新（黄埔动植物检疫局广州５１０７００）１９９４年６月，从黄埔港入境的４１００吨“ＰＲＯＤＲＯＭＯＳＶＯＹ．ＮＯ．２”轮秘鲁鱼粉，经抽样，实验室检验，检出肠炎沙门氏菌（Ｓ，Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）和山顿堡沙门氏菌...     

减毒沙门氏菌活疫苗研究现状及其在家禽业的应用

沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａ）是一类肠道杆菌，包括两千多个血清型。其中的一部分可以导致人和动物的感染，造成局部和系统性疾病，统称为沙氏菌感染或沙门氏菌病（ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｒＳａｌｍｏｎｅｌｌｏｓｉｓ）。沙门氏菌经口感染，粪－口途径传播，可被感染家禽、家畜、及啮齿类动物携带、排泄，污染环境、水源、饲料、食品，造成流行和传播。近几十年来，因沙门氏菌感染对人类和禽、畜饲养业造成的危害而受到广泛重视。家禽的沙门氏菌感染一直是饲养业和公共卫生的主要问题。西方国家目…     

沙门氏菌的研究进展

作者就沙门氏菌的毒力岛、质粒、致病机制和流行病学方面的研究作了简明扼要的概述,对沙门氏菌的防治研究具有重要的参考价值。     

山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及毒力基因分析

本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料,利用四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）进行沙门氏菌选择增菌,并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定,利用沙门氏菌属及血清型特异性引物对分离菌进行PCR扩增鉴定,并利用PCR方法检测分离菌中33种毒力基因分布。结果显示,分离菌在LB固体培养基和麦康凯培养基上呈无色半透明、光滑且边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌。生化试验、培养基菌落形态鉴定、沙门氏菌属及血清型特异性引物PCR扩增结果显示,共分离到25株鸡源沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌9株,鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌各8株。毒力基因检测结果显示,33种毒力基因在25株分离菌中均有检出,其中20种毒力岛基因（invJ、virK、sopA、mogA、hilA、hisJ、ssaB、ssaQ、ssiD、misL、mgtC、orf319、siiE、siiD、bcfA、pipC、sopB、araB、spoB和avrA基因）、肠毒素基因（stn基因）及菌毛毒力基因（fimA基因）检出率均为100%;2种毒力岛基因（sipA和sodC基因）及4种毒力质粒基因（spvA、spvC、spvD和spvR基因）检出率均为96%,spoE基因检出率为68%,fliC基因检出率为36%,gipA与spvB基因检出率均为32%,sseL基因检出率为4%;25株鸡源沙门氏菌中,分别携带31种（8株）、30种（1株）、29种（15株）和24种（1株）毒力基因;毒力基因gipA和spvB只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,且在鼠伤寒沙门氏菌中检出率为100%。本研究结果表明,山东地区鸡源沙门氏菌主要为肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,分离菌皆携带多种毒力基因,其中gipA和spvB毒力基因只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,可作为鼠伤寒沙门氏菌鉴定的备选基因之一。     

猪霍乱沙门氏菌─大肠杆菌K88ac、LT（A~－B~＋）二联基因工程菌对仔猪的

猪霍乱沙门氏菌─大肠杆菌Ｋ８８ａｃ、ＬＴ（Ａ~－Ｂ~＋）二联基因工程菌对仔猪的免疫保护试验陈陆平（长春市农业科学院长春１３０１１１）韩文瑜，梁焕春（农牧大学基础部）将表达大肠杆菌Ｋ８８ａｃ、ＬＴ（Ａ－Ｂ＋）的双表达质粒，导入猪霍乱沙门氏菌弱毒疫苗株构建...     

紫外线诱变传代对致病性沙门氏菌的影响

本研究通过对致病性沙门氏菌SW1和SW4紫外线诱变传代,观察其血清型、致病力及质粒图谱的变化.选择紫外线诱变沙门氏菌SW1和SW4菌株6min后培养,每个菌株随机挑取9个单菌落连续传60代后做其质粒图谱分析、毒力以及血清型检测.结果表明经紫外线诱变连续传60代后,沙门氏菌SW1的部分单菌落血清型发生明显变化,质粒图谱及毒力无明显变化;而沙门氏菌SW4的血清型和质粒图谱无变化,但单菌落SW4-60-6变为无毒力菌株,这表明病原菌的血清型和致病力在外界条件的作用下会发生一定的改变.     

蜜蜂病毒病（二）

蜜蜂病毒病（二）［加拿大］斯科特—杜普雷，Ｃ．等急性蜜蜂麻痹病毒急性蜜蜂麻痹病毒（ＡｃｕｔｅＢｅｅＰａｒａｌｙｓｉｓＶｉｒｕｓ；ＡＢＰＶ）于１９６３年首次被发现。尽管其性质与ＣＰＶ十分相似，但它们是两种极其不同的病毒。ＡＢＰＶ的毒力较强，作为一种隐性...     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达

将含有传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ（从ＡＴＧ到Ｓ前体蛋白裂解位点）的片段克隆到具有多角体启动子（ＰＸＩＶ）和人工合成启动子（Ｐｓｙｎ）的杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸ－ＩＶＶＩ＋Ｘ３中，构建了重组转基因载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３－Ｓ１．Ｄ４１。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ｏｃｃ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，筛选并纯化出既能表达Ｓ１基因又能形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＩＢＶＳ１－ｏｃｃ＋（ｏｃｃ＋，ｇａｌ－）。通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等方法在感染了重组病毒的Ｓｆ９细胞中成功地检测到分子量约６２０００的Ｓ１基因表达产物。虽然该重组Ｓ１糖蛋白可能由于Ｎ－糖基化不完全而分子量小于天然蛋白，但它可以像正常病毒粒子一样，被鸡抗ＩＢＶＤ４１株血清特异识别。     

肉鸡生产链沙门氏菌污染情况调查与分析

为了解肉鸡生产链各环节沙门氏菌污染情况，试验从江苏某产业链型农牧食品企业的养殖场、屠宰场、运输车辆、专营店采集样品540份，进行沙门氏菌分离鉴定、血清型及毒力基因检测。结果显示：该肉鸡生产链沙门氏菌检出率为7.22%(39/540)，生产链各环节沙门氏菌污染程度依次为：养殖环节>屠宰环节>销售环节>运输环节；共检出6种血清型，其中印第安纳沙门氏菌和肠炎沙门氏菌为优势血清型，屠宰环节沙门氏菌血清型最丰富；沙门氏菌8个毒力基因在39个分离株均有检出，毒力岛基因mogA(SPI-1)、sopB(SPI-2)、araA(SPI-5)的携带率高于肠毒素基因stn、毒力质粒基因spvD、spvR、spvA及菌毛基因agfA。结果表明该肉鸡生产链各环节均存在沙门氏菌污染，其中养殖环节污染最严重，提示养殖场应重视对肉鸡和饲料中沙门氏菌的监测，屠宰环节和销售环节应加强对环境的消毒，以避免交叉污染。     

西宁农贸市场猪胴体沙门氏菌污染调查

西宁农贸市场猪胴体沙门氏菌污染调查刘永成，王晓玲，李承钰（执笔）韩玉兰，赵旺兴（青海省西宁市兽医检疫站，８１００００）编者按１９９３年底在曼谷召开的第十一届世界兽医食品卫生学会上，该会前主席Ｇｒｏｓｓｋｌａｕｓ作了主题发言，指出德国近８年来沙门氏菌食...     

消毒药对肠炎沙门氏菌效果评价

消毒药对肠炎沙门氏菌效果评价Ｓ．Ｄａｖｉｓｏｎ彭新宇摘译（广东省农科院兽医研究所广州５１０６４０）人们认为，蛋鸡群感染肠炎沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）的主要来源是环境污染。通常可以从鸡舍彻底清除，但某些鸡舍环境虽经多次清洁与...     

球虫感染无菌鸡后甘露糖对沙门氏菌附着的影响

为了研究鸡感染柔嫩艾美球虫（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）后，盲肠上沙门氏菌的增加情况，我们调查了盲肠粘膜上甘露糖残留的数量变化。检验含２％糖类（Ｄ─甘露糖、Ｄ─半乳糖、Ｌ─岩藻糖、α─甲基糖苷）的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳＳ）对鼠伤寒沙门氏菌在无菌鸡盲肠粘膜上附着的抑制作用。结果发现，在感染及未感染的鸡群中，Ｄ─甘露糖均能抑制鼠伤寒沙门氏菌的附着，却明显利于（Ｐ＞０．０５）类杆菌的附着，但对魏氏梭菌及嗜热巴氏杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）的附着无任何影响．镜检发现，在所采用的８种植物凝集素中，只有刀豆球蛋白Ａ（Ｃｏｎ　Ａ）和味精凝集素（ｌｅｎｓ　ｃｕｌｉｎａｒｉｓ　ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）能在盲肠粘膜表面呈现凝集反应为阳性的着色斑或点，从而表明盲肠粘膜表面有甘露糖残留存在。在Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ感染的鸡群中．损伤细胞的粗糙表面及隐窝底部，凝集反应明显呈阳性。结果表明，球虫感染可导致肠表面甘露糖残留增加，从而有利于更多沙门氏菌在肠道附着。     

人肿瘤坏死因子α逆转录病毒表达载体的构建

应用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒构建了含人肿瘤坏死因子－α　ｃＤＮＡ的过渡性载体ｐＢＴ１和ｐＢＴ２。用限制性内切酶ＢａｍＨＩ与ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＴ１ＤＮＡ，分离出了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ基因片段，并在其平末端加入了ＢａｍＨＩ接头。进而将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＴＮＦ－αｃＤＮＡ克隆到了逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１５′－端长末端重复序列（ＬＴＲ）下游的ＢａｍＨＩ切点上，构建了重组质粒ｐＺＩＰＴＮＦ。该重组质粒经琼脂糖凝胶电泳，限制性内切酶消化和核酸杂交鉴定分析，证明ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１中插入了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ，并且方向正确。本研究为应用重组逆转录病毒介导ＴＮＦ－α基因转移与治疗奠定了基础。     

禽呼肠孤病毒S1基因的扩增克隆与鉴定

利用反转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,扩增出禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）Ｓ１１３３、１７３３长为５４０ｂｐ的Ｓ１基因片段。将扩增到的２个毒株的Ｓ１基因通过粘端连接分别克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫＳ＋质粒中,用ＰＣＲ和限制性内切酶分析鉴定,表明获得２种重组质粒ＡＲＶ Ｓ１１３３ Ｓ１－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ＡＰＶ １７３３ Ｓ１－ｐＢｌｕｅｓｃｒｐｔ。     

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建…

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩＸ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ，ＰｓｔＩ酶切法，ＰＣＲ和核酸探针法进行     

ES抗原(TspⅡ)表达质粒的构建

利用限制性内切酶从 ＴｓｐⅡｐｕｃ１９质粒上切取含 Ｅ Ｓ抗原的基因片段 ＴｓｐⅡ,插入到含有 Ｓ Ｐ６ 启动子和 Ｓ Ｖ４０启动子的表达载体 Ｐ Ｓ ＶｓｐｏｒｔⅠ中,从而构建了 Ｅ Ｓ抗原（ ＴｓｐⅡ）的表达质粒。     

不同来源沙门氏菌的毒力基因检测与耐药性分析

[目的]了解不同畜禽中沙门氏菌的携带状况及其毒力和耐药性,为动物源沙门氏菌的流行病学分析和防控提供数据和依据。[方法]从山东、吉林、江西、新疆和云南等地区采集样本,用国标法分离鉴定沙门氏菌,用沙门氏菌血清型试剂盒检测血清型,用PCR方法检测毒力基因,最后用微量肉汤稀释法(MIC)对分离菌株进行耐药性分析。[结果]健康畜禽和发病畜禽样本中的沙门氏菌分离率分别为20.67%(141/682)、6.13%(45/734)。发现4种沙门氏菌优势血清型,分别为德尔卑(42.6%)、印第安纳(26.2%)、肠炎(17.7%)和汤普森(17%)。对分离菌株进行毒力基因分析,检测SPI-1~SPI-5上的5个核心蛋白基因和spv A、B、C、D和R毒力质粒基因,其中健康畜禽样本中沙门氏菌毒力岛上的基因携带率与发病畜禽样本中的携带率基本一致,但发病畜禽中的菌株毒力质粒基因携带率明显高于健康畜禽。耐药性检测结果表明,除多西环素和庆大霉素外,发病动物中的沙门氏菌对抗生素的耐药率均比健康动物中的高。猪源与鸡源沙门氏菌对庆大霉素、头孢噻呋、氧氟沙星、粘杆菌素的耐药率差异显著,对其他抗菌药物略有差异,但不显著。健康畜禽中的多数沙门氏菌株耐药1~2种,占分离菌株总数的55.32%;发病畜禽中耐药10种以上的沙门氏菌占分离株总数的44.44%。[结论]发病畜禽中的沙门氏菌分离率比健康畜禽中的低,但其毒力质粒基因的携带率较健康畜禽中的高,且耐药情况较严重,多重耐药率高。该分析结果可为沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。     

狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达

将狂犬病病毒糖蛋白（ＲＶｇｐ）基因ＢｇｌⅡ片段（１６７５ｂｐ）分别正向插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－１７ｂ和ｐＥＴ－１７ｂ２（用ＳａｃⅠ－ＮｄｅⅠ缺失掉ｐＥＴ－１７ｂ６０ｂｐ含起始密码子ＡＴＧ小片段）的ＢａｍＨⅠ切点，构建重组质粒ｐＥＴ－１７ｂＲＶｇｐ和ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ。将其分别转化表达受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）和Ｅ，ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ．ＩＰＴＧ诱导表达，菌体经超声波裂解处理后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ，染色，在分子量约６００００处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带，以抗ＲＶｇｐＭｃＡｂ进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，表明该表达蛋白为ＲＶｇｐ。通过扫描显示，表达的ＲＶｇｐ占菌体总蛋白的１０％～１４％，其中ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ在Ｅ。ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中的表达量最高。     

新城疫病毒分子生物学毒力水平研究进展

新城疫病毒分子生物学毒力水平研究进展肖肖郑增忍王树双综述吴时友审校（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）新城疫病毒（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＮＤＶ）属副粘病毒科副粘病毒属成员,由囊膜、核衣壳和核酸三部分组成,其基因组为１５Ｋｂ的单股...     

高致死率的猪霍乱沙门氏菌感染症

饲养２０头母猪的繁殖场，４７头（４０～６０日龄）仔猪出现灰绿色至黑色水样泥状下痢，其中３３头（７０．２％）在发病后３周内死亡，经２头猪病性鉴定检出了猪霍乱沙门氏菌而诊断为猪沙门氏菌病，剩存的１４头发病猪，经有交药物（恩诺沙星）治疗和猪舍环境消毒，约２个月后疾病终息。分离菌株通过药敏试验全部表现多种药物耐性，多保有５０ｋｂ质粒和１８０ｋｂ传递性Ｒ质粒。