快速粗提取致病疫霉菌菌丝DNA的方法

为满足规模分析病菌群体、认识病菌的群体遗传变异特征,以致病疫霉菌(Phytoph-thorainfestans)为材料,建立快速、简便的用于PCR扩增的病菌基因组DNA。分别大量和微量提取基因组DNA,比较2种方法所提取的DNA用于SSR标记的PCR扩增效果。结果表明:以微量粗提法所得的病菌基因组DNA质量足以用于PCR扩增,与大量提取所得的DNA的PCR扩增非常一致,并且粗提的DNA与大提的DNA一样都可以在-20℃条件下保存。基于PCR扩增的遗传标记广泛用于病菌群体的分析,该研究建立的基于玻璃珠振荡法提取疫霉菌菌丝基因组DNA的微量提取方法需材少、简便且快速有效,为规模分析疫霉菌群体奠定了基础。     

中国特有种虎榛SSR反应体系的初步研究

为了探讨适于中国特有种虎榛DNA提取的方法和建立虎榛的SSR反应体系,该试验以虎榛幼嫩叶片为材料,通过对CTAB法的改良,摸索出了适于虎榛DNA的提取方法,并以核酸产量、纯度、片断分布情况等指标进行了评价,同时应用16对欧榛SSR引物对虎榛进行了跨属转移,获得了清晰稳定的扩增图谱;上述结果表明获得的基因组质量较高,同时也表明反映体系对虎榛的SSR分析是可行的;并对影响虎榛基因组DNA的制备及扩增反应因素进行了简要的分析讨论。     

辣椒叶片基因组DNA提取方法的研究

本项研究采用SDS法、CTAB1法、CTAB2法及CTAB3法对辣椒叶片基因组DNA进行提取,通过琼脂糖凝胶电泳法与紫外吸收检测法对DNA的纯度进行检测。试验证明几种提取方法均能提取出辣椒叶片的基因组DNA,其中CTAB3法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条迁移率很低的整齐清晰的DNA条带,所提取DNA的质量和纯...     

适于SSR分析的树莓基因组DNA的快速提取

通过改良CTAB法对不同品种的树莓幼嫩叶片进行DNA提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和SSR分析.结果表明:该方法所提DNA的纯度和产率都较高,OD260/OD280比值均介于1.7～1.9之间,OD260/OD230比值介于2.0～2.5之间,无降解现象,RNA去除干净,产率均在50～130μg/mL之间.经SSR-PCR分析条带清晰,多态性好,说明此方法提取的树莓基因组DNA完全适于SSR分析.     

高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

针对柑橘老熟组织中富含多糖、多酚、色素和其它次生代谢产物的特点,以柑橘老叶老皮为试材,在传统CTAB提取法的基础上通过添加增效剂并优化配方,建立了一种快速、简便的提取植物老熟组织及其内部病原总核酸的CTAB-Triton提取法。新的提取液对细胞的裂解能力更强,且解决了传统CTAB溶液因低温析出而致DNA得率损失的弊端。比较了该法和微量葡聚糖柱纯化法制备模板时韧皮部杆菌的检出率,并用该法制备模板,分析了韧皮部杆菌在柚子叶片中的分布情况,及对其它几种柑橘病原菌进行PCR/RT-PCR检测。结果表明,CTAB-Triton方法能有效提取柑橘老熟叶片的DNA,所得DNA质量高,产量比商品化试剂盒大,提高了韧皮部杆菌的检出率,且可用于柑橘其他病原真菌、细菌,以及DNA或RNA病毒病害的PCR/RT-PCR检测,也可用于定量PCR检测和病原种群多态性分析。     

不同保存方法对石榴成熟叶片基因组DNA提取效果的影响

以石榴(Punica granatum L.)成熟叶片为试材,设置6种保存方法,采用改良的CTAB法提取石榴基因组DNA,研究了不同保存方法对石榴叶片基因组DNA提取效果的影响。结果表明:采用改良的CTAB法,新鲜叶片、-70℃保存6个月、4℃保存5d的样品均能得到浓度较高的DNA;-20℃保存7d和14d的样品均能得到完整DNA,但浓度略低;硅胶干燥常温保存5个月的样品用同样的方法未能提取到DNA,在对提取方法进行优化后,可提取纯度较高的基因组DNA,但其浓度仅约为鲜叶的50%。上述方法保存的样品提取的基因组DNA均能得到清晰、稳定的SRAP-PCR扩增图谱。     

‘惠水金橘’的叶绿体基因组特征分析

【目的】分析贵州地方柑橘品种‘惠水金橘’的叶绿体基因组特征及分子标记,为研究该品种的系统进化关系、丰富柑橘类果树叶绿体分子标记奠定基础。【方法】提取‘惠水金橘’成熟叶片总DNA,构建小片段插入文库并测序,以甜橙叶绿体基因组为参考,筛选叶绿体基因组相关序列组装,开展SSR(simple sequence repeat,简单重复序列)预测、SNP(single nucleotide polymorphisms,单核苷酸多态性)/InDel(insertion-deletion,插入缺失)分析以及聚类分析。【结果】组装后获得叶绿体基因组全长为160 698 bp,GC含量为38.42%,共有117种基因被注释;检测到92个SSR位点,大部分的SSR位点都偏向于A/T组成;检测到417个SNPs位点、149个InDels位点、InDel的标记密度约为每kb 0.927个。进化树显示该品种与其他宽皮柑橘聚为一大类。【结论】利用高通量测序技术挖掘柑橘叶绿体基因组DNA分子标记是可行的。     

不夜城芦荟基因组DNA提取方法的比较研究

以不夜城芦荟的幼嫩叶片为试材,分别采用SDS法和CTAB法以及简化的CTAB法对基因组DNA进行提取,并利用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳法检测其DNA的浓度、纯度及质量,以期筛选不夜城芦荟基因组DNA提取的最合适方法.结果表明:对比不夜城芦荟基因组DNA提取的3种方法,无论从提取浓度还是纯度上来看,SDS法均明显优于其它方法.     

一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

猕猴桃基因组DNA提取方法的研究进展

对猕猴桃基因组DNA提取的各个环节的进展进行综述。经分析得出,干叶片是一种较为理想的材料,容易保存,获得的基因组DNA质量也较高。提取方法主要有SDS和CTAB法,SDS法可以较好的将DNA与蛋白质分开,而CTAB法则可以较好的将基因组DNA与糖等杂质分离开;此外还有一些改良的提取基因组DNA的方法,都是比较实用的。可以根据不同的条件选取不同的方法。     

4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究

为研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法,根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量.结果 表明,改良CTA...     

贡水白柚基因组DNA提取方法研究

以"贡水白柚"为试材,采用盐乙醚处理法、苯酚氯仿处理法、基本CTAB处理法3种DNA提取方法来处理"贡水白柚"基因组DNA,研究不同提取方法对DNA样品的产率、外观、酶切电泳等方面的影响。结果表明:用盐乙醚法所提DNA外观呈纯白色,冷冻沉淀为纤维状,效果最好;用苯酚氯仿法处理幼穗期柚叶片基因组提取DNA产率最高,DNA浓度达118ng/μL;EcoRⅠ酶切图谱用CTAB处理法和盐乙醚处理法效果均较好,苯酚氯仿处理法则拖尾严重,效果差;RAPD引物PCR扩增效果图表明,3种方法均能扩增出清晰条带,均适合于有关"贡水白柚"基因组的相关研究。     

不同方法提取野生荔枝基因组DNA效果的比较

以广东、广西地区的3个野生龙眼的幼嫩叶片为试材,采用SDS法、常规CTAB法和改良2× CTAB法提取荔枝叶片基因组DNA,比较研究从富含多酚、多糖和色素等次生代谢物质的野生荔枝叶片中获得高质量DNA的提取方法.结果表明:采用改良的2×CTAB法提取的荔枝叶片基因组DNA纯度最高、质量最佳,可直接用于荔枝叶绿体DNA trnL-F基因的PCR扩增分析,且扩增后条带清晰.表明改良的2×CTAB方法获得的DNA纯度和产率较高,符合进行野生分子标记的实验要求.     

节瓜基因组DNA提取方法比较研究

以节瓜的成熟干种子、子叶和不同发育阶段的真叶为材料,选用尿素提取法、高盐低pH值法、SDS法和CTAB法等4种DNA提取方法进行比较。结果表明:不同节瓜材料均可以提取到基因组DNA,其中子叶和第1片真叶的提取效果最好;尿素提取法提取种子DNA最为简便快捷,CTAB法提取叶片能得到纯度较高的基因组DNA。经PCR检验,干种子和子叶提取的基因组DNA都可用于PCR扩增。     

一种高质量枇杷基因组DNA提取方法

针对枇杷叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法,通过对抽提液、沉淀液和解离缓冲液进行逐步筛选,对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行电泳检测、含量测定和ISSR分析。结果表明:该方法从‘大五星’枇杷幼叶、成熟叶片、花药、组培苗,与幼果中的胚珠,以及栎叶枇杷的幼叶与成熟叶片7种材料提取的基因组总DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280值均在1.8~2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其ISSR分析条带清晰,多态性好,表明此方法提取的枇杷基因组总DNA质量较高。     

适于AFLP分析的非洲紫罗兰DNA提取方法研究

以非洲紫罗兰同一植株的叶片和茎段为试材,采用新鲜组织提取、烘干组织提取、冷冻干燥组织提取的3种不同预处理方法,并采用DNAKit、CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ3种提取方法,比较分析了DNA片断大小及不同方法提取DNA的纯度与得率,以期确定适用于多酚、多糖、水分含量高的非洲紫罗兰的DNA提取方法.结果表明:采用冷冻干燥组织提取法,经改良的CTABN法,即在2次抽提步骤中,加入一步利用CTAB沉淀液沉淀DNA的方法最适合非洲紫罗兰DNA提取.这样得到的基因组DNA可作为后续分子水平研究的优良PCR模板.     

早食李基因组DNA提取方法的改进

以改进的CTAB法对三华李品种群中的早食李叶片基因组DNA的提取进行了试验.结果表明,改进的CTAB法适于高质量三华李品种群基因组DNA的提取,提取的早食李基因组DNA完整性较好,无降解,OD260/OD280的比值在1.9～2.0之间,多糖类杂质去除较为干净.经SRAP检验,条带清晰,多态性良好,说明改良CTAB法提取的基因组DNA质量较好,适于三华李高质量基因组DNA的提取.不同时期的不同成熟度的叶片都可以提取到基因组DNA,但以各期的嫩叶(梢)产量最高,效率最好.     

越橘基因组DNA的快速提取及分析

为了从富含多酚、多糖及色素的越橘叶片中提取适用于分子生物学研究的高质量基因组DNA。以越橘幼叶为实验材料,比较了CTAB、SDS、高盐低pH值3种提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、RAPD-PCR、酶切等方法对获得的DNA进行了分析,结果表明,快速CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD、PCR等分子生物学实验的要求。     

四种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA比较研究

以大叶朴成熟叶片为试材,采用4种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA,并比较其提取效果。结果表明:用这4种方法均可获得没有发生褐变、完整性好的DNA。其中方法2(用了低浓度乙醇和高盐去多糖)和方法4(用了低浓度乙醇去多糖)去多糖的效果更好一些,但获得的DNA浓度较低;ISSR扩增结果表明,4种方法提取的DNA均可用于ISSR扩增,但方法2和3扩增的效果稍好一些。     

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。