抗大肠埃希氏菌K99粘着素单克隆抗体及其特性测定

利用淋巴细胞杂交瘤技术已获得10株能稳定分泌抗大肠埃希氏菌K99粘着素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为EK409、EKA7—3、EKA7—5、EKC6、EKD4—12、EKD4—19、EKA2、EKDS—12、EKD3和EKB8。除EKD4—12单抗的亚类为IgG_3以及EKA_2为IgG_2a外,其余单抗均是IgG_1。上述前3株单抗均具有直接凝集(DA),免疫荧光(IF)和ELISA3种免疫学反应,而其余单抗都只有IF和ELISA两种反应特性。无DA反应性。在这3种反应中,反应强度和效价最高的是EK409和EKA7—3,二者小鼠腹水的DA滴度可达1:2048,IF和ELISA的效价均为10~(-6)。这两株单抗能与所试的各株K99+菌呈阳性反应,是型特异单抗。余下的8株单抗中,EKA7—5只对K12:K99+和含有O101抗原的K99+的两类菌株呈阳性反应,其余7株单抗仅对O抗原为101的K99+菌发生反应.所有的K99单抗对所试的K88+或987P+或F41+的大肠秆菌均以夏其他种肠道杆菌均无交叉反应。EK409和EKA7—3单抗还具有抑制MRHA反应的特性。     

抗大肠埃希氏菌987P粘着素单克隆抗体的产生及其特性测定

用饱和硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶柱层析法从987P~+大肠杆菌培养物中分离和提纯987P抗原。以此抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O—Ag14融合,获得两株能分泌抗987P特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为EP-22和EP-G1。经多次克隆化后,他们在体外培养中能稳定分泌高效价的特异单克隆抗体,于液氮中冻存三多个月。复苏后其分泌抗体能力仍不变。EP—22和EP-G1的腹水单抗,免疫荧光滴度高达10~5-10~6,直接凝集滴度均为2—4×10~2。EP-22培养上清的单抗免疫荧光滴度可迭10~2-10~3,直接凝集滴度为16—32。在间接免疫荧光和琼扩试验中,这两株单抗对所试的987P~+标准菌株和野毒菌株均具有高度的特异性,对不含987P而含其它粘着素(K88或K99或F41)的菌株以及肠菌科之其他细菌都不发生交叉反应。他们对pH2-9.8及4-56℃有较强抵抗力。用EP-22株小鼠腹水单抗直接标记的单克隆荧光抗体效果好,特异性高。EP-22和EP-G1单抗的免疫球蛋白亚类均属IgG1。     

抗大肠埃希氏菌K_(99)和987P粘着素单克隆抗体研究进展

引起初生幼畜腹泻的重要病原之一是肠毒素性大肠杆菌(ETEC),它们都具备两类致病因子即粘着素和肠毒素,在ETEC中,迄今已发现的粘着素有K88、K99、987P和F41四种。鉴于ETEC的血清型较复杂,加之粘着素种类的多样性和抗原性的彼比不同,采用淋巴细胞杂交瘤技术,研制纯净、匀质、高效价的抗大肠杆菌粘着素单克隆抗体,并形成诊断试剂盒,已成为大肠杆菌病的快速诊断及流行病学研究的重要手段。继成功地研制出抗大肠杆菌K88单抗之后,最近,我们又用提纯的K99和987P抗原分别免疫BALB/C小鼠,以免疫小鼠     

应用MCA-ELISA检测腹泻仔猪粪样中的大肠埃希氏菌K_(88)粘着素抗原

将抗大肠埃希氏菌K_(88)粘着素抗原的单克隆抗体(MCA)标记辣根过氧化物酶,建立了一种MCA-ELISA,其对K_(88)阳性菌株的检测限为1×10~4个菌。本法对113株大肠杆菌分离培养物的检查结果与直接凝集试验结果完全符合,两种方法都检出K_(88)阳性菌株     

抗大肠埃希氏菌粘附素单克隆抗体诊断试剂的研制及其现场初步应用

抗大肠埃希氏菌粘附素单克隆抗体诊断试剂的研制及其现场初步应用高崧，刘秀梵（江苏农学院畜牧兽医系）／／畜牧兽医学报，１９９３，２４（３）：２４８～２５３采用抗产肠毒素性大肠埃希氏菌（ＥＴＥＣ）粘附素Ｋ＿（８８），Ｋ＿（９９），９８７Ｐ和Ｆ＿（４１）单克...     

鸡源致病性大肠埃希氏菌的耐药性

研究了分离江苏地区若干鸡场的２９株鸡源致病性大肠埃希氏菌的耐药性,结果表明,所有菌株对ＣＦＺ,ＴＯＢ敏感,耐药率为０,对ＮＥＯ,ＫＡＮ,ＧＥＮ,ＰＩＰ耐药率约为６．９％,ＣＴＮ,１３．７９％;ＣＭＰ,３４．４８％,对ＳＴＲ,ＣＯＳ,ＶＡＮ,ＥＲＹ耐药率较高,分别为６５．５２％,７２．４２％,８２．７６％,９３．１０％,待检菌株多药耐药现象严重,有２７株（９３．１０％）有２种或２种以上药物耐药,多药     

产蛋鸡类大肠埃希氏菌病的诊断

<正> 天津市西郊区某养鸡专业户有400余只京白蛋鸡,210日龄,每天仅不足半数鸡产蛋,而且鸡因病死亡严重,平均每天死亡10余只。经我们诊断确诊为类大肠埃希氏菌引起的大肠杆菌病。现将本病案公布如下,供同行参考借鉴。一、流行病学调查及临床症状整个鸡群体精神萎靡,食欲锐减,鸡体消瘦,排泄白色夹绿粪便,基本无血。鸡冠黄白萎缩,个别发现气喘现象。鸡舍内臭味冲鼻,有明显的埃尘颗粒。二、剖检变化喉头有粘稠无色分泌物,实内无明显异     

西藏牦牛大肠埃希氏菌的分离鉴定与毒力测定

从自然病死的西藏牦牛的心、肝、脾、肾、淋巴结与血液病料中分离到128株疑似大肠杆菌,鉴定结果表明,有32株为大肠埃希氏菌,其中的10株菌有致病性;在这10株中3株毒力较强,为产毒性大肠埃希氏菌,致病率达90%以上,其余7株中等毒力,致病率达50%。首次鉴定出牦牛大肠杆菌血清型有18种:O142,O148,O158,O26,O43,O159,O39,O108,O91,O21,O14,O13,O36,O88,O24,O18,O68和O25。3株毒力较强菌株的血清型鉴定结果表明,1号菌株为O148,O142,O158混合型;2号菌株为O26,O148,O142,O158混合型;30号菌株为O26,O148混合型。     

鸡致病性大肠埃希氏菌的血清型鉴定

前言 鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌引起的传染病。在临床上表现为气囊炎、败血症、肠炎、关节炎、输卵管炎、肉芽肿等多种类型。致病性大肠埃希氏菌即可成为本病的原发性病原体,也可以在某种诱因条件下作为继发性病原体而起作用。特别是某些特定血清型大肠埃希氏菌与各种病型之间有着密切联系。国外研究者Edward和Ewing早在1954年就证实O_2血清型大肠埃希氏菌是鸡大肠杆菌性败血症的病原体,此后,Soika、Glantz等人     

江苏境内鸡源大肠埃希氏菌的某些生物学特性

从江苏九个蛋鸡场４７忌疑似大肠杆菌病的病，死鸡的肝，脾，心包液，腹水，输卵管，脑实质，眼球液中分离鉴定出２３株大肠埃希氏菌，分离率为４８．９４％。对其中１７株进行血清型鉴定，共有１１种血清型，其中Ｏ２０，Ｏ７８，及Ｏ８９较为多见，分别占待检菌株的１１．７７％，１７．６５％和１１．７７％，其余为Ｏ９，Ｏ１８，Ｏ２６，Ｏ３０，Ｏ３６，Ｏ８８，Ｏ１３１及Ｏ１４９，其中Ｏ９。Ｏ１９，Ｏ３０，Ｏ３６，Ｏ１３     

鸡大肠埃希氏菌致病性,菌毛表达及血凝特性

观察比较了鸡大肠埃工菌某些分离株腹腔接种,气管接种对１日龄鸡的致病性,研究了在体外不同培养条件下,菌株菌毛的表达情况,菌株的血凝谱及血凝特性。     

鸡源大肠埃希氏菌(ESCHERICHIA COLI)菌毛的电镜观察

为了摸清鸡源大肠埃希氏菌的菌毛与致病性的关系而进行了本课题的研究。我们从内蒙古自治区7个盟市9个具有代表性的养鸡场死胚和死雏鸡中分离到的203株大肠埃希氏菌中选择了13株有致病性和2株无致病性的菌株进行电子显微镜观察。通过观察发现,我们所分离到的鸡致病性大肠埃希氏菌菌株在适宜的条件下培养均能形成菌毛,而无致病性大肠埃希氏菌未能形成菌毛。     

连梅止痢中药制剂对大肠埃希菌K88感染仔猪的疗效

探讨连梅止痢中药制剂对大肠埃希菌K88感染的仔猪腹泻的疗效。72头21日龄初始体质量平均为(4.41 ±0.01) kg的仔猪被分为6组:空白对照组、发病组、低剂量(0.5 mL·kg^-1 BW)、中剂量(1.0 mL·kg^-1 BW)、高剂量组(1.5 mL·kg^-1 BW)及抗生素组(0.2%恩诺沙星2 mL·头^-1)。给断奶仔猪灌服一定数量的大肠埃希菌K88建立腹泻模型,利用乌梅、黄连、诃子以及秦皮原料制备的连梅止痢中药制剂(含生药1 g·mL^-1)对发病猪进行治疗,观察该中药制剂对腹泻病的疗效。结果表明,该中药制剂对仔猪大肠埃希菌腹泻的治愈率为80%。实时定量PCR检测结果表明,在用药的整个阶段中剂量组仔猪粪便中的大肠埃希菌K88平均数量与发病组相比显著减少 (P<0.05),其他剂量组与发病组相比差异不显著(P>0.05)。从仔猪肠道形态上观察,抗生素组和中剂量组仔猪肠道组织结构基本完整。经过生存分析发现,中剂量中药制剂与发病组相比能显著提高仔猪生存率(P<0.05)。发病组生存曲线相比其他组的陡峭,而中剂量组的曲线最平缓,中药制剂能降低仔猪的死亡率。     

蓝狐脑型大肠埃希氏菌的分离鉴定

从有神经症状的病死蓝狐脑组织中分离出两株大肠埃希氏菌，两株菌对小白鼠致病性强，对痢特灵、氨苄青霉素等敏感。     

鸡致病性大肠埃希氏菌的菌毛血清型检测

使用透射电镜对3株鸡致病性大肠埃希氏菌(E.coii)的菌型进行了形态观察,发现其中2株菌具有纤细、中空、挺直的菌毛,另外1株未见菌毛。有菌毛的2株菌与K88、K99、987P和F41单因子兔高免血清的玻片凝集反应阴性,而与2株兔源的具菌毛的E.coli菌的兔高免血清呈强阳性。未见菌毛的那株菌与上述所有血清的玻片凝集反应均呈阴性。     

MUG单管定量检测法对大肠埃希氏菌的检测

采用MUG单管定量检测法对实验室制备的菌悬液、天然海水、水产品进行定量检测,并与大肠埃希氏菌多管发酵法的检测结果进行比对分析.结果表明：MUG单管定量检测法与大肠埃希氏菌多管发酵法对菌悬液、天然海水、水产品的检测结果没有统计学差异;MUG单管定量检测法检测数据的精确性高于大肠埃希氏菌多管发酵法,而且更为快速、经济.因此,该法适用于海水和水产品中大肠埃希氏菌的定量检测.     

大肠埃希氏菌在熟肉制品中生长预测模型的建立

【目的】建立大肠埃希氏菌在熟肉制品中的生长预测模型。【方法】分别将大肠埃希氏菌接种到熟猪肉的不同部位(猪肌肉组织和脂肪组织),以及接种到经不同盐质量分数加工过的熟肉中,测定大肠埃希氏菌菌落数,用Origin 8.0统计软件对数据进行模型拟合。【结果】两个温度下大肠埃希氏菌在熟猪瘦肉和脂肪上的生长用Gompertz方程拟合要比线性方程拟合的好,而Logistic方程则能较好的描述不同盐质量分数时大肠埃希氏菌在熟肉上的生长。模型拟合的标准差和相关系数相对较好,表明建立的Gompertz方程、线性方程和Logistic方程的模型均有效。【结论】Gompertz方程和Logistic方程能够很好预测大肠埃希氏菌在不同熟肉制品中的生长。     

抗沙门氏菌O_4、O_(12)抗原特异单克隆抗体的产生及其特性鉴定

用鼠伤寒沙门氏菌的热灭活全菌和热酚—水抽提脂多糖抗原免疫BALB/c小鼠,取脾脏淋巴细胞与SP_2/O细胞融合,获得稳定分泌抗沙门氏菌O_4和O_(12)抗原的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系7个,分别命名为AG24-1、AG90-5、BG1-8、BG17-12、BG66-10、BG78-15、EG19-11。小鼠腹水中的单抗直接凝集滴度为10~2-10~4,间接免疫荧光滴度为10~3-10~6。与沙门氏菌和肠杆菌科中其他细菌的反应性试验表明,BG78-15是O_(12)因子特异单抗,其他6种为对O_4因子的特异单抗。