链格孢属小孢子种总DNA提取方法的比较

本研究采用液氮研磨法和石英砂研磨法对链格孢属小孢子种总DNA进行提取,并通过超微量分光光度计检测DNA的纯度和浓度及通过琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA的质量,以期筛选出适合链格孢属小孢子种总DNA提取的方法。结果表明,两种方法均可得到链格孢属小孢子种的DNA,并且两种方法提取基因组DNA的效果无明显的区别。其中,液氮研磨法需要较多的菌丝体、所需时间长、成本高、获取液氮不易,而石英砂研磨法简单快速、时间短、成本低、研磨充分,损失少、可以避免使用液氮等优点。因此,石英砂研磨法是链格孢属小孢子种用于病原种类研究所需总DNA提取的较为理想的方法。     

鸡血藤DNA提取方法的研究

[目的]筛选一种适合鸡血藤DNA的提取方法。[方法]以鸡血藤嫩叶为材料,分别采用液氮-CTAB法、石英砂-CTAB法以及石英砂-SDS法提取基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取的DNA样品,对提取方法进行比较筛选。[结果]电泳检测中,石英砂-CTAB法所提DNA条带亮度最高,质量较好。紫外检测中,石英砂-CTAB法提取的DNA A260/A280值大于1.8,比其他两种方法提取的DNA蛋白质污染小,其提取的DNA纯度和得率均最高,液氮-CTAB法提取DNA得率居中,石英砂-SDS法提取DNA得率较低。[结论]该研究结果表明石英砂比液氮更能简便快速地将叶片研碎,CTAB提取缓冲液比SDS提取缓冲液可更有效地去除杂质,使细胞裂解、DNA析出。因此,石英砂-CTAB法更适合鸡血藤DNA的提取。     

黄粉虫虫粉对白僵菌生长的影响

[目的]研究黄粉虫虫粉对白僵菌生长的影响。[方法]利用黄粉虫幼虫作为添加物,添加到PDA培养基中,制成4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 g/100 ml 7个浓度,以不加虫体的培养基为对照,对白僵菌菌株的生长速度、孢子萌发率、菌丝直径、产孢时间、产孢量和POD酶活性等指标进行测定。[结果]PDA培养基中添加黄粉虫幼虫能提高白僵菌的生长速度、孢子萌发率、产孢时间、产孢量和POD酶活性,但是对孢子大小及菌丝直径影响较小。通过综合评价筛选,黄粉虫添加量为4 g的培养基上白僵菌生长最优,各项指标都有明显的优势。[结论]该研究可为应用黄粉虫培养白僵菌的研究提供理论依据。     

不同保存方法对武汉单极虫DNA提取和PCR扩增的影响

为探讨不同保存方法对武汉单极虫Thelohanellus wuhanensis DNA提取和PCR扩增的影响,将从患武汉单极虫病的异育银鲫Carassius auratus gibelio鱼苗上分离出含有孢子的孢囊,分别置于100%乙醇、70%乙醇、2.5%戊二醛、10%福尔马林、Bouin's液、Carnoy's液和Müller's液中保存50 d,经计数调整孢子等量后分别进行DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增。结果表明:100%乙醇和70%乙醇保存方法对武汉单极虫孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均无任何影响,等同于新鲜孢子,可作为孢子的保存方法;2.5%戊二醛和Bouin's液保存方法只对孢子DNA提取有影响,但均能在常规PCR和巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,可作为用于常规PCR和巢式PCR扩增的孢子保存方法;10%福尔马林和Müller's液保存方法对孢子DNA提取和常规PCR扩增均有影响,但均能在巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,故只能作为用于巢式PCR扩增的孢子保存方法;Carnoy's液保存方法无论在孢子DNA提取还是进行常规PCR和巢式PCR扩增均无阳性结果,故不能用作孢子核酸分子生物学研究的保存方法。研究表明,除100%乙醇和70%乙醇保存方法外,其他保存方法对孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均有不同程度的影响。     

球孢白僵菌液体制剂研究

通过液体发酵试验 ,研究了不同营养基质、不同发酵条件对球孢白僵菌液生分生孢子、芽孢子、干物质积累的影响 ,结果显示 :在 5种培养基中 ,除“糖蜜 5 %、玉米浸提液 1%、K2 HPO4 0 1%”(代号D)外 ,其它均不产生芽孢子 ,以D配方生物量最高 ,孢子较大 ,为本试验选出的液体制剂的理想载体 ,最佳发酵条件为温度 2 5～ 30℃ ,pH6 0～7 0 ,通气量以瓶装培养液量为指标不超过 1/ 6瓶装量 ,发酵时间以 96小时为佳。白僵菌液体制剂的理想载体与最佳发酵条件的组合可使白僵菌液生分生孢子达 2 5× 10 10 左右 ,超过了目前四川固体发酵的生产水平     

从不同材料中提取马DNA方法的比较研究

[目的]通过对5种从不同材料中提取马DNA的方法进行比较研究,寻找最适的提取方法。[方法]采用酚仿抽提法、蛋白酶K直接消化法、酸碱裂解法分别从血液、毛发材料中提取马DNA,并通过PCR扩增对提取产物进行检测。[结果]通过蛋白酶K直接消化法、酸碱裂解法可从微量血液和毛发中提取到马DNA,均可达到采用酚仿抽提法从血液中提取马DNA的效果,并能满足后续分子生物学试验的要求。[结论]通过比较分析,该研究中以酸碱裂解法最佳。     

微波辅助乙醇提取大豆异黄酮的工艺研究

[目的]研究大豆异黄酮的微波辅助乙醇提取工艺。[方法]以乙醇作为提取剂,微波辅助从大豆中提取大豆异黄酮。在单因素试验的基础上,通过正交试验,考察了乙醇浓度、料液比、微波时间、提取温度、提取时间5个因素对大豆异黄酮提取量的影响。[结果]微波辅助乙醇提取大豆异黄酮的最佳工艺条件为：乙醇浓度（体积分数）80%,料液比1∶16 g/ml,微波时间4 min,提取温度70℃,提取时间2 h。在该条件下,大豆异黄酮的提取量为25.37 mg（20 g脱脂大豆粉）。[结论]用该工艺提取方法简单可行,不仅节省时间,而且提取量高。     

5种除草剂对白僵菌孢子萌发的影响

[目的]论证5种除草剂对2种寄生型白僵菌孢子萌发的影响。[方法]根据农药室内生物测定试验准则—抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法。[结果]精异丙甲草胺、硝磺草酮对2种寄生型白僵菌孢子萌发抑制最为明显,与其他几种除草剂比较,差异性显著;而激素性除草剂二氯吡啶酸、氯氟吡氧乙酸对寄生于玉米螟型白僵菌孢子萌发影响不大,莠去津对2种寄生型白僵菌孢子萌发都有影响,与空白对照比较,差异显著。[结论]白僵菌的储存、使用,应尽量避开除草剂,特别是要避开精异丙甲草胺、硝磺草酮等药剂。     

超声波协同酶法提取茶多酚工艺的研究

[目的]探讨不同因素对超声波协同酶法提取茶多酚效果的影响,优化茶多酚提取工艺.[方法]为研究超声波-酶法在茶叶中提取茶多酚的应用效果,采用单因素试验和正交试验,考察水浴温度、水浴超声时间、加酶量、茶多酚与纤维素酶的料液比和乙醇浓度对超声波-酶法提取茶多酚的影响,从而优化提取条件与工艺方法.[结果]试验得出,提取时间对茶多酚的提取影响最显著,优化得出最佳工艺条件为:水浴时间40 min,加酶量10 ml,水浴温度60℃,料液比为5∶50 g/ml,pH为5时,茶多酚提取率最高.[结论]超声波-酶法应用于茶叶中茶多酚的提取具有省时、节能、高效等优点.     

利用Mycoharvester Version 5收集球孢白僵菌分生孢子粉的初步研究

研究对球孢白僵菌生产菌株Bb202进行固体发酵生产,并使用英国Imperial College设计生产的Mycoharvester Version 5收集发酵白僵菌孢子。通过对其收孢效率进行评价,发现在4.5min时,白僵菌孢子的分离效果已达到50%左右。Mycoharvester Version 5收获的白僵菌分子孢子粉细粉含孢量为1 200亿/g,含水量为4.54%。该仪器收孢效率明显高于其他常用的孢子收集设备。     

一种大批量快速提取白僵菌DNA的方法

[目的]优化大批量快速提取白僵菌DNA的方法。[方法]对DNA沸水抽提方法进行改进,通过PCR扩增仪对DNA提取液进行加热,迅速完成DNA的提取过程。[结果]通过大批量快速提取真菌基因组DNA方法提取的DNA质量可满足RAPD扩增分析的需要。22个试验菌株均扩增出清晰的条带,清晰条带数量为2～6条不等,条带大小主要集中在450～800 bp;该方法提取的DNA也完全可以满足SCAR扩增的需要,扩增出的用于标记F263菌株的特异性DNA条带十分清晰。[结论]该研究为大批量快速提取真菌基因组DNA提供了较为理想的方法。     

广西林用白僵菌生物农药对家蚕的致病性试验

为探讨广西森林防虫使用的白僵菌农药对家蚕的致病性,以南宁市林用白僵菌农药及环江爱山林场试验站生产的白僵菌农药对家蚕进行致病性试验。结果表明,以南宁市林用白僵菌农药感染二龄起家蚕时,家蚕白僵菌病发病率随白僵菌孢子悬浮液浓度的增加而逐渐升高,当白僵菌孢子悬浮液浓度为3.00×108个孢子/mL时,发病率达100.00%,其LC50为6.00×106个孢子/mL;以2.40×107个孢子/mL的环江爱山林场试验站生产的白僵菌农药感染二龄起家蚕,发病率亦高达100.00%;而在五龄第5 d蚕体表撒白僵菌农药,家蚕虽能正常摄食、熟蚕、上蔟结茧,但上蔟7 d后全部僵死在茧中,未能化蛹。可见,广西林用白僵菌生物农药对家蚕具有很强的致病性。     

一种简易有效的提取真菌DNA化学改良方法

[目的]探索适合真菌基因组DNA提取的有效方法。[方法]以酵母茵（Hansenula sp.HS07A）和青霉菌（Penicillium sp.HS07）为供试菌株,分别采用煮沸裂解法、石英砂研磨法、研磨和反复研磨冻融法和化学改良法提取其基因组DNA,比较这4种方法的提取效果。[结果]化学改良法提取基因组DNA,除去了机械破壁过程,减少了机械力对DNA造成的破坏,运用阴离子去污剂SIB提取DNA安全、价廉,能有效、完整地提取高质量的基因组DNA,凝胶电泳条带清晰、无弥散,以此基因组DNA作为目的片段的PCR扩增模板,扩增效果优于改良前的方法,并且这种方法也适合多种真菌和细菌基因组DNA的提取。[结论]化学改良法是提取真菌基因组DNA的有效方法。     

磁珠分离法快速提取大肠杆菌质粒DNA

以单分散羧基功能化纳米磁性粒子为固相载体,PEG/NaCl为结合液,对大肠杆菌(Escherichia coli)裂解液中的质粒DNA进行了纯化研究.结果表明:PEG8000质量分数7.5％,NaCl浓度1.25 mol/L,磁珠用量0.9 mg时,在室温下,从1.5 mL大肠杆菌菌液中提取到的质粒DNA量为8.3μg...     

防治玉米螟高效球孢白僵菌新菌株筛选

从吉林省田间采集玉米螟僵虫,进行菌株的分离、纯化,通过对产孢力、孢子发芽力和玉米螟幼虫毒力进行评价,选育出7株(D1虫-5、D1虫-9、L2虫-8、L1-1-1、D6虫-2、D10虫-2、S9虫-X-1)产孢力强、气生孢子发芽率高和毒力强的白僵菌新菌株。实验表明:7个菌株固体麦麸发酵产孢量分布在160亿～335亿个孢子/g的固体发酵物;气生孢子培养16 h萌发率为48%～93%,22 h萌发率均达到100%;孢子浓度106亿个/mL,接种8 d时,玉米螟幼虫僵死率在93%～100%;菌株毒力强弱与产孢能力和孢子萌发率无明显相关性,但与孢子浓度和作用时间呈正相关性。     

陈山红心杉基因组DNA提取方法的比较与分析

采用尿素法、柠檬酸钠法、改良的CTAB法和SDS法4种方法提取陈山红心杉基因组DNA,并对提取效果进行比较和分析。结果表明,改良的CTAB法较适合陈山红心杉基因组DNA提取,其提取的DNA纯度高、质量好,具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,A₂₆₀/A₂₈₀比值在1.8左右,且凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解。而尿素法和柠檬酸钠法难以提取基因组DNA,SDS法因提取的DNA有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用陈山红心杉基因组DNA提取。酶切分析也证明,改良的CTAB法提取的DNA适用于进行后续分子生物学分析。采用改良的CTAB法能够提取得到陈山红心杉幼叶、老叶、嫩芽和幼茎的基因组DNA产率不同,分别为158.4μg/g、129.6μg/g、177.6μg/g和98.40μg/g。考虑到幼叶样品的采集要比嫩芽方便,因此,可以直接采用幼叶进行陈山红心杉基因组DNA提取。     

一种有效的沙棘总RNA提取方法

高质量RNA的提取是分子生物学和基因工程研究的必要前提.以盐胁迫过的沙棘叶片为实验材料,建立了一种有效的沙棘总RNA提取方法.该方法提取的沙棘总RNA得率较高,平均为213.94 μg/g(鲜叶),RNA的完整性好,纯度较好,利用丙酮和KAc有效的消除了多糖、多酚和黄酮的干扰.反转录实验证明,所提取的沙棘总RNA具有较强的反转录活性,能够运用到后续的分子生物学研究中.研钵等实验用品采用酒精燃烧的方式去除外源RNase,并且药品都是常规试剂,大大的节省了实验时间和降低了实验成本.     

红酵母RT-1核酸提取方法的比较及基因crtYB和crtE扩增

对蜗牛酶法、石英砂法、氯化苄法、SDS-CTAB法、反复冻融法、溶壁酶法等6种酵母DNA提取方法进行比较,确定了反复冻融法最适合红酵母RT-1的提取,所提取的DNA质量较高,以它为模板成功克隆到crtYB内部序列,证明其完全可用于酶切、测序等后续试验。同时,比较了热酸性酚法、酵母总RNA提取试剂盒RNAsimple Total RNA Kit、硅藻土-苯酚法等3种酵母RNA提取方法,比较结果表明:硅藻土-苯酚法所提RNA完整性高,用其进行RT-PCR克隆得到crtEcDNA内部序列,表明提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究。