一种大批量快速提取白僵菌DNA的方法

[目的]优化大批量快速提取白僵菌DNA的方法。[方法]对DNA沸水抽提方法进行改进,通过PCR扩增仪对DNA提取液进行加热,迅速完成DNA的提取过程。[结果]通过大批量快速提取真菌基因组DNA方法提取的DNA质量可满足RAPD扩增分析的需要。22个试验菌株均扩增出清晰的条带,清晰条带数量为2～6条不等,条带大小主要集中在450～800 bp;该方法提取的DNA也完全可以满足SCAR扩增的需要,扩增出的用于标记F263菌株的特异性DNA条带十分清晰。[结论]该研究为大批量快速提取真菌基因组DNA提供了较为理想的方法。     

白僵菌填充剂对孢子活力的影响研究

利用7种填充剂,在室温和冰箱(5℃)内贮存,低温贮存25个月,白僵菌孢子萌发率为96.2％-98.2％;用黄土、活性炭、沙子、炉灰渣和草炭等填充剂的白僵菌室温贮存19个月,孢子萌发率为90.3％-95％。随着填充剂种类和贮存期的不同,孢子萌发率有差异。黄土填充剂有效贮存期最长达21个月;玉米轴粉、豆秸粉有效贮存期为9个月;对照有效贮存期为3个月。     

5种除草剂对白僵菌孢子萌发的影响

[目的]论证5种除草剂对2种寄生型白僵菌孢子萌发的影响。[方法]根据农药室内生物测定试验准则—抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法。[结果]精异丙甲草胺、硝磺草酮对2种寄生型白僵菌孢子萌发抑制最为明显,与其他几种除草剂比较,差异性显著;而激素性除草剂二氯吡啶酸、氯氟吡氧乙酸对寄生于玉米螟型白僵菌孢子萌发影响不大,莠去津对2种寄生型白僵菌孢子萌发都有影响,与空白对照比较,差异显著。[结论]白僵菌的储存、使用,应尽量避开除草剂,特别是要避开精异丙甲草胺、硝磺草酮等药剂。     

不同温、湿度和光照对白僵菌孢子活力的影响

不同温、湿度用载片悬滴法培养白僵菌24h结果表明,温度25～30℃、RH95%～100%孢子萌发率高速度快,是白僵菌孢子萌发率最佳温、湿度。在自然直射光照时间(6h)以内对白僵菌孢子萌发无影响,而在直射光时间10h后白僵菌孢子萌发率逐渐下降,但白僵菌孢子落入玉米喇叭口内有叶片遮挡,对孢子萌发率影响不大。     

烟田常用化学农药对白僵菌孢子和菌丝的影响

 测定了5种杀虫剂和5种杀菌剂对白僵菌孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明,杀虫剂对白僵菌的兼容性好于杀菌剂。杀虫剂辟蚜雾、功夫、氧化乐果对白僵菌孢子萌发和菌丝生长的影响小,混用时孢子萌发率超过80%,残效实验孢子萌发率分别为90.67%,90.67%,72.00%,因此可以与白僵菌同时使用或混用。百菌清、菌核净、多菌灵等杀菌剂抑制了白僵菌孢子的萌发和菌丝生长（萌发率不超过13%）,不应与白僵菌同时使用或混用。在化学农药与白僵菌混用时必须先进行严格的试验。     

链格孢属小孢子种总DNA提取方法的比较

本研究采用液氮研磨法和石英砂研磨法对链格孢属小孢子种总DNA进行提取,并通过超微量分光光度计检测DNA的纯度和浓度及通过琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA的质量,以期筛选出适合链格孢属小孢子种总DNA提取的方法。结果表明,两种方法均可得到链格孢属小孢子种的DNA,并且两种方法提取基因组DNA的效果无明显的区别。其中,液氮研磨法需要较多的菌丝体、所需时间长、成本高、获取液氮不易,而石英砂研磨法简单快速、时间短、成本低、研磨充分,损失少、可以避免使用液氮等优点。因此,石英砂研磨法是链格孢属小孢子种用于病原种类研究所需总DNA提取的较为理想的方法。     

不同幼虫虫龄和林间白僵菌孢子量对松毛虫发生白僵病的影响

通过对马尾松林释放含孢量为82亿/g的白僵菌[Beauueria bassiana(Bals.)Vuill]粉的试验结果表明:放菌量在22.5kg/hm2时,林间孢子量在500倍显微镜下观察,每视野达28～38个,使第2代松毛虫(Dendrolimus punctatus Walker)幼虫带菌越冬,或抓住4龄前幼虫抗性弱这一薄弱环节释放白僵菌,可提高白僵菌感染机率,致使越冬代幼虫感病死亡率达98%以上。     

白僵菌生产中防霉剂的应用研究

为了解决白僵菌固体培养时易遭受霉菌污染问题,以玉米螟白僵菌ABUV–3和松毛虫白僵菌DBUV–7为供试菌株,对40%克菌灵等5种防霉剂进行了系列研究。结果表明:5种防霉剂对毛霉菌、木霉菌、根霉菌、绿霉菌和黄曲霉菌的孢子和菌体均有抑制作用,其中以70%菌绝杀可溶性和绿霉霸粉剂的抑制效果最好;虽然5种防霉剂直接作用时会对白僵菌的孢子萌发产生抑制作用,但在固体培养生产孢子时添加一定量的防霉剂,对孢子产量及其萌发并没有抑制作用。因此,建议在白僵菌生产过程中,在固体培养基中添加70%菌决杀和绿霉霸粉剂500倍液(折合剂量为2 mg/m L),用以抑制霉菌的污染。     

不同温度对白僵菌孢子萌发的影响

本实验将白僵菌分生孢子置于不同温度条件下,测定其萌发率。测定结果表明:白僵菌分生孢子的最适萌发温度在25~30℃。     

农作物总DNA提取的基本原理和主要方法概述

概述了农作物DNA提取的基本原理,总结了DNA提取各步骤的操作经验,并介绍了几种常用的DNA提取方法。     

球孢白僵菌菌株Bb-2孢子侵染力和代谢产物毒力

利用球孢白僵菌菌株Bb-2(Beauveria bassiana Bb-2)活体孢子和代谢产物对2龄小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫和桃蚜(Myzus persicae)进行毒力测定.结果表明,菌株Bb-2在1.1×107、1.1×108、1.1×109个孢子/mL 3个浓度下,对2龄小菜蛾幼虫和桃蚜均表现出较高的侵染力.在高浓度(1.1×109个孢子/mL)条件下,2龄小菜蛾幼虫的4d累计死亡率为75.0％,桃蚜的4d累计死亡率为92.5％.在低浓度(1.1×107个孢子/mL)条件下,2龄小菜蛾幼虫的4d累计死亡率为36.7％,桃蚜的4d累计死亡率为47.7％.菌株Bb-2发酵液对2龄小菜蛾幼虫和桃蚜均有一定的活性,且对桃蚜的活性明显高于对小菜蛾的活性.     

白僵菌的研究概况

对近年来白僵菌在农业生防领域中的研究进展进行了综述,包括白僵菌的生物学性状、致病性、侵染途径和致病机制、白僵菌毒素以及生防领域的应用。     

提取玫瑰基因组DNA几种方法的比较

为了找到一种方便、快捷且经济高效的玫瑰叶片基因组DNA提取方法,为玫瑰后期的分子生物学研究奠定良好基础,以不同品种的玫瑰幼嫩叶片为材料,分别利用CTAB法、SDS法、改良CTAB法、试剂盒法4种方法提取玫瑰基因组DNA,经过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法对所提DNA的质量和产量进行检测比较。结果表明：4种方法均可从玫瑰叶片中提取到DNA,改良CTAB法作为对常规方法的改进,在保证经济实用的前提下提取到的DNA质量最好,浓度最高;而试剂盒法作为一种快速提取植物基因组DNA的新兴方法,虽然产量略低,费用略高,但操作步骤简单,耗时短,毒害小,高效快捷。各实验室可根据实际情况选择适宜的方法。     

光照和漂白粉对白僵菌孢子萌发及致病力的影响

研究人工紫外光和自然光照射以及消毒剂漂白粉对白僵菌(Beauveria bassiana)孢子萌发和致病力的影响.结果表明,人工紫外光照射对裸露的白僵菌孢子有明显的杀伤作用,使孢子萌发率和对家蚕(BombyxmoriL.)的致病力明显下降,但对白僵菌原粉中的孢子杀伤力相对较弱,照射24 h后白僵菌原粉对家蚕的致死率仍达93.33％.在自然光下,喷洒到桑叶上的白僵菌孢子悬浮液随光照时间的增加对家蚕的致病力下降,自然光照射3、6、12、24、36 h后,对家蚕的致死率分别为100.00％、70.00％、79.66％、10.00％和25.00％;用白僵菌原粉喷桑树,经自然光照射0～36 h后,对家蚕的致死率为88.33％～96.67％,48h后对家蚕的致死率大幅度下降,照射48、54、78 h对家蚕的致死率分别为53.33％、31.67％和23.33％;直接置于自然光下照射的白僵菌原粉,随光照时间增加,对家蚕的致病力下降,30 h后致病力明显下降,致死率只有38.33％.有效氯浓度为1.00％和2.00％的漂白粉溶液对白僵菌孢子萌发有很强的抑制作用,72h孢子萌发率分别为1.000％和0;用有效氯浓度为2.00％的漂白粉液进行叶片和蚕体消毒处理对白僵菌孢子均有杀灭效果,使白僵菌孢子液和原粉对家蚕的致病力明显下降,但对叶片消毒比对蚕体消毒效果好.     

正交试验法优化芍药基因组DNA CTAB法提取工艺

[目的]为芍药的杂交育种提供试验依据。[方法]通过正交试验,对利用芍药基因组DNA的CATB法提取工艺进行优化。[结果]CTAB法提取DNA的OD260/OD280为1.8~1.9,不同处理间差异较明显。除泳道c7电泳结果较差外,其他泳道DNA的完整性都相对较好。除c1c、2泳道RNA拖尾现象较严重外,c3、c4、c5c、6泳道脱尾现象均较轻微,而c8和c9电泳条带较为整齐。CTAB法提取芍药基因组DNA的最佳配方为:CTAB 0.75 g、NaCl 3 g、EDTA 2.5 mlT、ris-HCl 5 ml,pH值8.0。[结论]利用该CATB方法,可获得高纯度芍药DNA。     

枸杞DNA的提取方法研究

[目的]寻求高质量枸杞DNA的有效提取方法,为开展我国枸杞种质资源准确的分子鉴定评价提供试验基础。[方法]针对枸杞组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和改良CTAB法的处理效果。[结果]常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质,溶液极黏稠,致使移液枪吸取困难,取量不准;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,OD260nm／OD280nm比值在1．80左右,表明DNA纯度高,污染少。通过基因组DNA—AFLP指纹图谱分析,改良CTAB法完全满足试验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了分析讨论。[结论]为枸杞DNA的有效提取提供了方法依据。     

球孢白僵菌草酸钙结晶体的提取及其与毒力的关系

在人工培养基上提取分离球孢白僵菌结晶体,用傅里叶红外光谱仪定性分析确定为草酸钙结晶体,研究结果还表明：球孢白僵菌草酸钙结晶体的产量与该菌对马尾松毛虫的毒力具一定的相关性。     

利用捕食螨搭载白僵茵控制柑橘木虱的研究

进行捕食螨搭载白僵菌控制柑橘木虱的研究,结果表明：捕食螨对木虱卵、若虫有一定的捕食作用;白僵菌I2菌株对柑桔木虱卵、若虫、成虫均有很强的致病作用,第3d后死亡率达100％,对低龄若虫致病率达100％。用捕食螨搭载白僵菌孢子粉对柑桔木虱卵和成虫3d后的死亡率和致病率分别达98．4％和98．8％,对低龄若虫感染率达100％...