柑橘体细胞杂种有性后代叶形态遗传变异研究

对柑橘体细胞杂种有性后代叶形态遗传变异研究表明,有性后代群体叶长、叶宽、叶面积平均值低于双亲,叶厚与双亲接近,而气孔长、宽与密度平均值介于双亲之间;不同有性后代植株叶长、叶宽、叶面积、叶厚及气孔长、宽与密度变化范围与杂交双亲对应的参数呈交叉现象,二倍体与三倍体群体间没有明显分组。有性后代除叶厚变异范围较小外,其它参数变异范围都较大。经次数资料的适合性测验即χ2测验,叶形、叶尖缺刻的有无及翼叶形状分离符合1∶1的分离规律,二倍体组群与三倍体组群的叶长差异极显著、叶宽差异显著、叶厚没有差异,气孔长与密度差异极显著,而气孔宽差异显著。     

荔枝花粉母细胞减数分裂观察

【目的】从细胞水平探明荔枝花粉母细胞减数分裂行为。【方法】通过改良涂片法对荔枝品种‘妃子笑’花粉母细胞减数分裂过程中染色体行为进行系统观察。【结果】花粉母细胞减数分裂过程中存在多核仁、单价体、落后染色体、分裂不同步、不均等分裂、多分体等异常情况,为观察细胞总数的8.5%。异常情况多集中于前期Ⅰ、中期Ⅰ、前期Ⅱ和四分体时期,分别为各时期观察细胞总数的71.56%、33.33%、15.85%和31.25%,并对其形成的机制进行了讨论。【结论】分裂过程中发现的落后染色体、染色体片段、不同步以及不均等分裂等异常现象主要来源于终变期出现的较高频率的单价体,与细线期发现的多核仁现象没有直接关系,异常现象是导致多分体形成的主要原因,可导致花粉败育。异常行为的发生可能与品种、个体或气候因素有关。     

龙眼花粉母细胞减数分裂观察

以龙眼石硖品种为材料,采用改良涂片法对花粉母细胞减数分裂过程进行了系统观察。结果表明,（1）龙眼减数分裂进程与花蕾大小,花药颜色有密切关系,在同一花蕾甚至同一花药中表现不同步性。（2）龙眼减数分裂染色体行为存在染色体片段、落后染色体、染色体桥、分裂不同步、微核及多分体等异常现象,从细胞遗传学水平上分析了龙眼花粉母细胞减...     

沙田柚（2x）× 柑橘异源体细胞杂种NS（4x）的三倍体后代遗传分析

 用两对SSR 引物TAA1 和TAA3 对以二倍体沙田柚为母本,体细胞杂种NS（Nova 橘柚 + Succari 甜橙）为父本,通过有性杂交和胚挽救获得的79 株三倍体后代群体的带型和分离情况进行了分析。结果发现TAA1 引物和TAA3 引物在后代群体中分别扩增出5 种带型和4 种带型,子代带型分别符合4︰1︰1︰5︰1 和2︰2︰1︰1 的分离比例,与根据孟德尔遗传规律推导的双二倍体的分离比例相吻合,初步表明柑橘异源四倍体体细胞杂种减数分裂行为类似于双二倍体。     

柑橘种间体细胞杂种植株遗传变异研究

对6年生哈姆体甜橙 粗柠檬和4年生伏令夏橙 宜昌橙种间体细胞杂种遗传变异进行了研究。体细胞杂种气孔较大,密度较小,染色体数为四倍体（2n=4x=36)。POX、PPO、GOT和SOD4种同工酶图谱上,体细胞杂种为双亲酶带之和,RAPD分析显示,体细胞杂种含有双亲的谱带,同一融合组合不同单株在叶形指数、气孔特征、染色体数目,同工酶和RAPD图谱上表现一致。     

柑橘种间六倍体体细胞杂种开花及其花粉育性

 二倍体锦橙+种间四倍体体细胞杂种HR (哈姆林甜橙+ 粗柠檬) 的种间六倍体体细胞杂种植株移入温室7年后(即2004年) , 有1株六倍体首次开花, 花粉染色活力40.8% , 花粉萌发率3.7%;2006年该植株再次开花, 花粉染色活力为20.3%。由于自然界中没有柑橘六倍体, 本研究是人工的方法创造出可育的柑橘六倍体体细胞杂种植株的首例报道。     

柑橘体细胞杂种超低温保存后的植株再生

 对9年生印度酸橘(Citrus reticaulata)和飞龙枳(Poncirus trifoliata)的体细胞杂种的茎段进行离体培养得到再生植株，用改良的玻璃化法对再生植株茎尖进行超低温保存后获得92％的再生率。这是柑橘体细胞杂种茎尖超低温保存的首例报道。     

柑橘种间体细胞杂种的核质遗传研究

为了解柑橘体细胞杂种的核质遗传组成,采用流式细胞仪(FCM)、简单序列重复(SSR)、相关序列扩增多态性(SRAP)以及酶切扩增多态性序列(CAPS)对此前通过对称融合获得的2株种间体细胞杂种进行了分析。结果表明,在丹西红橘+红江橙种间组合中,分析的2株植株中1株为二倍体非对称体细胞杂种,其核DNA具有双亲的部分DNA,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙(叶肉亲本);而另1株则是异源四倍体体细胞杂种,其核DNA来源于双亲,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙。     

酸枣和赞皇大枣花粉母细胞减数分裂的观察

 以酸枣和赞皇大枣为试材, 对其花粉母细胞的减数分裂过程进行了系统观察, 并将减数分裂的各个时期加以描述和分析。结果表明, 酸枣减数分裂符合二倍体的分裂规则; 赞皇大枣分裂不规则, 终变期出现单价体、二价体和三价体, 且减数分裂后期Ⅰ和后期Ⅱ出现落后染色体, 最终产生三分体、四分体、五分体、六分体, 形成不等孢子。     

电场诱导原生质体融合获得柑橘属间四倍体体细胞杂种

 采用电融合方法诱导澳洲指橘(Microcitrus papuana Swingle) 悬浮系原生质体与柑(Citrusreticulata Blanco) 叶肉原生质体融合, 得到了再生植株。染色体检查表明再生植株为四倍体( 2n= 4x= 36) , 6 个10-mer 碱基随机引物PCR 扩增结果表明, 尽管再生植株带型表现多样, 但仍然可以证明为体细胞杂种。对再生植株田间生长异常的现象进行了讨论。     

四倍体甜瓜花粉母细胞减数分裂的观察

以同源四倍体甜瓜为材料,采用常规压片法研究花粉母细胞减数分裂行为。结果表明:同源四倍体甜瓜花粉母细胞减数分裂过程与二倍体类似,但有其特殊性。主要表现在:粗线期观察到有6.7%的细胞出现双核;终变期的四倍体染色体构型较复杂,有二价体、多价体、三价体和单价体;中期I和中期II有赤道板外染色体;后期I和后期II出现染色体桥和落后染色体;四分体时期出现二分体、三分体和多分体。花粉母细胞减数分裂的异常是同源四倍体甜瓜育性低的细胞学原因。     

柑橘天然杂种秭归橘橙来源探究

秭归橘橙为天然柑橘杂种,果实无核、早熟,但其亲本来源未得到深入的分析和验证。为探明秭归橘橙的亲本,应用倍性检测、形态学标记和AFLP、cpSSR、nSSR等分子标记,对其进行遗传鉴定。倍性检测证实秭归橘橙为二倍体,叶形指数、气孔密度和大小、花粉育性和花粉形态分析表明秭归橘橙形态特征上偏向于甜橙,而其花粉染色活力介于甜橙与红橘之间。AFLP聚类分析表明秭归橘橙介于橙和橘之间。cpSSR、nSSR确认秭归橘橙的母本为甜橙(Citrus sinensis[L.]Osbeck),父本为橘类(C.reticulate Blanco)。     

扁桃杧(Mangifera persiciformis)体胚发生及再生体系建立

以扁桃杧(Mangifera persiciformis Wu&Ming)未成熟珠心组织为外植体,建立体胚发生及再生体系,同时对幼苗进行茎尖染色体计数和胚根组织形态学观察。结果表明,在改良的B5基本培养基+2,4-D1.0mg·L-1+Gln400mg·L-1+6%蔗糖上培养4～5周后可诱导胚性愈伤组织分化。继代培养基与成熟培养基交替培养能有效降低胚性愈伤组织的褐化并保持旺盛的分化能力。培养3～4个月后,大部分体胚均能发育成熟,26.03%的体胚畸形。体胚在改良B5培养基+Gln400mg·L-1+4%蔗糖上的萌发率较低,仅为8.39%。次级体胚以直接体胚发生方式于萌发体胚的下胚轴产生。幼苗的生根不理想,生长极为缓慢;其茎尖染色体数目为2n=2x=40;胚根形态学上端内部维管组织解体,愈伤化,结构松散。     

3种柑橘实生砧木及其2种体细胞杂种根系解剖结构的比较

采用石蜡切片法和组织离析法分别对3种柑橘实生砧木和2种体细胞杂种的根系木质部和导管分子的解剖构造进行了比较。结果表明：（1）粗柠檬、红橘和枳3种实生砧木根系的木质部和韧皮部呈同心圆环状排列,而‘红橘+枳’和‘红橘+粗柠檬’两种体细胞杂种木质部和韧皮部呈“海星状”排列,结构异常。（2）导管所占的面积和密度,均以生长势较强的粗柠檬为大,以生长势较弱的枳为小;体细胞杂种没有明显规律。（3）柑橘导管分子属于孔纹导管,穿孔板均为单穿孔,大多分布于端壁上;导管分子两端具尾、倾斜、侧壁穿孔等性状的有无及其比例,反映出生长势的差异及其输导能力的强弱。（4）粗柠檬具有较好输导能力的导管分子结构,而枳较差;体细胞杂种根系的导管分子长度和直径都大于其亲本,在导管分子性状上,向不利于输导能力的较原始性状偏移。     

Production of mandarin + pummelo somatic hybrid citrus rootstocks with potential for improved tolerance/resistance to sting nematode

Sting nematode (Belonolaimus longicaudatus Rau) has become a primary factor limiting citrus production in localized regions of the central Florida sandridge citrus production area, making the development of resistant rootstocks a new breeding objective. In efforts to develop a replacement rootstock for the widely adapted sour orange, our focus has been on somatic hybridization of selected mandarin + pummelo combinations [Grosser, J.W., Gmitter, Jr., F.G., 1990. Protoplast fusion and citrus improvement. Plant Breed. Rev. 8, 339–374; Ananthakrishnan, G., Calovic, M., Serrano, P., Grosser, J.W., 2006. Production of additional allotetraploid somatic hybrids combining mandarins and sweet oranges with pre-selected pummelos as potential candidates to replace sour orange rootstock. In Vitro Cell. Dev.: Plant 42, 367–371], since sour orange is probably an introgression hybrid of mandarin and pummelo as suggested by molecular marker analyses [Nicolosi, E., Deng, Z.N., Gentile, A., La Malfa, S., Tribulato, E., 2000. Citrus phylogeny and genetic origin of important species as investigated by molecular markers. Theor. Appl. Genet. 100, 1155–1166; Gulsen, O., Roose, M.L., 2001. Lemons: diversity and relationships with selected Citrus genotypes as measured with nuclear genome markers. J. Am. Soc. Hort. Sci. 126, 309–317]. Somatic hybrid plants were produced from four new mandarin (C. reticulata Blanco) + pummelo (C. grandis L. Osbeck) parental combinations by fusing embryogenic suspension culture-derived protoplasts isolated from selected mandarins with leaf protoplasts of pummelo seedlings previously selected for tolerance/resistance to the sting nematode (B. longicaudatus Rau) as follows: Amblycarpa mandarin + ‘Liang Ping Yau’ (seedling) pummelo seedling SN7; Amblycarpa mandarin + ‘Hirado Buntan Pink’ (HBP) pummelo seedling SN3; Murcott tangor + pummelo seedling SN3; and Shekwasha mandarin + pummelo seedling SN3. Somatic hybridization was verified by ploidy analysis (via flow cytometry) and RAPD analyses. Mandarin parents were selected for wide soil-adaptation and ability to produce friable embryogenic callus lines. Pummelo seedlings used as leaf parents were identified from a previous screen of large seed populations (200 each) from four pummelos for resistance to sting nematode as follows: ‘Hirado Buntan Pink‘; ‘Red Shaddock‘; ‘Large Pink Pummelo’ and a seedling pummelo of ‘Liang Ping Yau‘. Ten resistant/tolerant pummelo seedlings were selected from the 800 pummelo seeds planted in the screen for further study. The four new somatic hybrids have been propagated to evaluate their horticultural performance and resistance to the sting nematode. These potential somatic hybrid rootstocks should also have potential to control tree size due to polyploidy.