沙门氏菌快速检测技术研究进展

沙门氏菌是食品中最常见的致病菌,是导致食物中毒的重要病原菌之一,严重危害人类的健康安全和食品安全。由于其血清型繁多,传统方法检测起来耗时耗力。近年来,随着生物学的发展,新的检测技术层出不穷,尤其是分子生物学检测技术和免疫学检测技术。该文介绍了近年来检测食品中沙门氏菌技术的研究进展以及其应用前景。     

应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｃｎ，ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素Ｉ相抗原基因，设计了一对各长２０个碱基的引物，扩增２６９ｂｐ的片段。并用８个标准标沙门氏菌株和３个阴性菌株检查引物特异性，结果完全相符。采用５０μＬ体积，ＮＴＰｓ２００μｍｏｌ，引物各１μｍｏｌ，ｍｇ＋＋３ｍｍｏｌ，Ｔａｑ酶２Ｕ。循环温度为９７℃７ｍｉｎ予变性后；９４℃１ｍｉｎ，６０℃１ｍｉｎ，３５个循环后再延伸７２℃７ｍｉｎ。经电泳分析，灵敏度可达每毫升检出１０４个细胞，经二次扩增后，灵敏度还可提高。实验共检查了３０个可疑样品，检出率明显高于生化检查和免疫学方法检查。     

沙门氏菌PCR快速检测技术研究

通过改良热裂解法提取沙门氏菌基因组DNA,设计特异性引物进行PCR扩增,并对热裂解的时间进行了比较试验,对PCR检测的敏感性和所用引物的特异性进行了试验.结果表明,煮沸时间为2 min即可获得满足PCR要求的基因组DNA;设计的引物特异性好,能专一性扩增出约500 bp条带;该引物灵敏度高,能进行有效检测的核酸最低起始量为129 pg.采用热裂解法提取沙门氏菌基因组DNA进行PCR快速检测技术大大缩短了沙门氏菌检测时间.     

畜产品中沙门氏菌的快速检测

以热裂解法快速提取DNA模板,应用PCR技术检测沙门氏菌,22种沙门氏菌的基因均获得特异性扩增(496bp),5种非沙门氏菌检测结果为阴性。试验结果表明,PCR是一种快速、敏感和高度特异性的沙门氏菌检测方法,值得在畜产品沙门氏菌的检测中推广应用。     

沙门氏菌快速检测试剂盒的研制及其应用

在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。     

沙门氏菌常见H抗原特异相的PCR快速检测

运用PCR技术检测沙门氏菌常见的H抗原特异相,甲型副伤寒、猪霍乱、鼠伤寒等常见危害人和动物的沙门氏菌因H抗原差异而分别获得特异性扩增。此技术具有快速简便、敏感性高和特异性强等优点,值得在对常见危害人和动物的沙门氏菌的快速检测中推广应用。     

鸡蛋中沙门氏菌的快速检测

选择江苏省不同地区来源的鸡蛋296枚,分别取蛋黄蛋清混合液以沙门氏菌增菌液快速增菌.取增菌培养物100 μl,离心去上清后,重新悬浮于100 μl超纯水中;以煮沸法制备可能存在的细菌DNA模板.通过对沙门氏菌毒力岛SPI-3的mgtC基因的PCR快速检测,确定其中18.24%的鸡蛋为沙门氏菌阳性.通过与细菌分离检测结果对比,揭示该方法明显提高了沙门氏菌的检出率,表明PCR是一种快速、敏感和高度特异性的沙门氏菌检测方法,值得在畜产品沙门氏菌的检测中推广应用.     

等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的评价与应用

食源性致病菌的快速检测一直是保障食品安全的关键。沙门氏菌(Salmonella)是重要的食源性致病菌之一。本研究以沙门氏菌人工污染的3种样品为对象,对一种基于环介导等温荧光扩增技术的沙门氏菌快速诊断试剂盒进行了灵敏度和准确性评估;再以该试剂盒对市售食品样品和临床腹泻样品适用性进行验证。结果表明,该等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的检测限为10~3 CFU/mL,准确性96.7%以上。所有不同样品的结果显示:阴性样本的假阳性率分别为0.0%、3.3%和3.3%;阳性样本检出率分别为97.9%、100.0%和65.7%(含低浓度细菌污染样品)。该试剂盒具有检测周期短、操作简便、适用性广等特点。     

3类食品中沙门氏菌PCR快速检测方法的建立

建立了3类食品中沙门氏菌快速、敏感、特异的PCR快速检测方法。选取invA基因作为靶序列设计1对引物,在沙门氏菌中能扩增出198 bp的预期片段,而大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌的扩增结果均为阴性,表现出极好的沙门氏菌种特异性。通过对沙门氏菌标准菌种纯培养液PCR方法灵敏性的检测,发现纯培养的检测极限为72个细菌。用该方法对3类共计56份食品样品进行检测,检测结果与传统分离鉴定方法完全相符,表明该方法适用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

ABC─Dot─ELISA快速检测食品中沙门氏菌

本试验采用生物素—亲和素酶复合物—斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ—Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ）检测食品中沙门氏菌。该法可检出ＩＳＣ液中接种的沙门氏菌。其敏感性可达１０４—１０５千个／Ｌ，比常规免疫酶法和免疫荧光法提高１０—１００倍。特异性检测表明，其与大肠杆菌、变形杆菌、产气杆菌未发生交叉反应。该法在２４ｈ内可报告结果，比常规法至少快３—４ｄ。对２００份食品检样进行检测，检出１９份，检出率９．５％，与常规法检测结果平行比较，漏检率仅为０．５％，结果相差不显著（Ｐ＞０．０５）。进行３次重复性试验，结果完全相同。试验结果表明，该法操作简便、敏感、快速，具有较高的特异性，适于对大批样品进行快速检测。     

应用解旋恒温基因扩增技术检测沙门氏杆菌

为寻求快速简便的检测沙门氏杆菌及其他病原生物新方法,以沙门氏杆菌invA基因为目的片段,设计特异性引物,通过条件优化,建立了检测沙门氏杆菌的HDA法,用4株沙门氏杆菌和6种其他病原菌(大肠埃希菌、志贺氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、链球菌)考核特异性,用稀释法测定灵敏度.结果表明,本研究建立的HDA法可在恒温水浴锅中进行,扩增时程75 min;阳性检测率为100%,无假阳性;用HAD法检测12份饲料样品,结果检出沙门氏杆菌呈阳性的3份,阳性率为25%.HDA法极适合基层实验室使用.     

沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

 【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果（阳性检出率为1/30）准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。     

LAMP检测沙门氏菌方法的建立

环介导等温扩增(LAMP)是利用设计的4条特殊引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术。研究选取沙门氏菌编码DNA解旋酶B亚单位的gyrB基因设计了1套引物,总反应体系25μL,63℃恒温1 h,用LAMP对9株沙门氏菌属扩增的结果均为阳性,而大肠杆菌O216等7株致病菌株扩增的结果均为阴性;LAMP的灵敏度为6.8×101cfu/mL。LAMP检测方法更快速、灵敏,有着较为广泛的发展前景。     

利用PBR322质粒监控MSAP甲基化检测过程

[目的]监控MSAP甲基化检测过程,以控制MSAP每一反应步骤。[方法]利用PBR322质粒作为阳性对照,全程监控MSAP分析中酶切、连接、预扩与选扩体系。[结果]PBR322质粒作为阳性对照电泳时条带有限,可以根据条带有无和位置对MSAP甲基化检测过程进行全程监控,有助于发现问题的具有所在。[结论]该研究可以为MSAP技术提供可靠保障。     

转基因马铃薯检测用质粒标准分子研制

依据全球转基因作物商业化的强势发展态势,转基因马铃薯的普遍商业化已呈大势所趋。马铃薯是世界第四大食用作物,仅次于水稻、小麦和玉米。目前,全球获批商业化种植的转基因马铃薯45种,主要涉及抗虫、抗病毒及品质改良等性状。转基因技术在给人们带来巨大经济效益的同时,也引起了人们的担忧,主要包括食品安全及环境安全问题等,由此转基因生物产品成分的检测及监管的重要性凸显。在转基因检测领域,标准质粒以容易获得、纯度高、成本低与稳定性好等优点逐渐被广泛应用。在调研了所有商业化的转基因马铃薯的重要信息的基础上,针对这些转基因马铃薯的主要外源基因类型,构建含有抗马铃薯甲虫cry3A基因、胭脂碱合成酶启动子P-nos基因、抗马铃薯Y病毒pvycp基因及内标准基因尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶PATA基因的多靶标质粒pB JGMM003。该质粒可用于大部分已批准转化体及部分在研转基因马铃薯的鉴定、检测与监管工作,解决了转基因马铃薯的阳性标准品匮乏等问题,保障了转基因马铃薯相关工作的顺利进行。     

食品微生物快速检测技术研究进展

近年来,微生物及其产生的各类毒素引发的食品污染备受重视,微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的问题。准确、省时的快速检验方法,对预防肠道传染病和食物中毒具有重要意义。随着生物学技术和微电子技术的发展,食品微生物快速检验技术有了较大进展。综述了食品微生物快速检验技术的研究进展。     

食品动物源沙门菌oqxAB基因的检测及水平传播机制研究

为了调查食品动物源沙门菌Salmonella oqxAB耐药基因的流行情况和水平传播机制,采用二倍琼脂稀释法测定临床分离的31株沙门菌对常用抗菌药物的敏感性,PCR方法特异扩增耐药基因oqxAB,并对扩增产物克隆测序.通过接合转移试验验证oqxAB基因的水平传播.试验结果表明,31株沙门菌对氨苄霉素的耐药率最高,达64...     

禽A类传染病毒力检测软件的开发

运用生物信息学软件对GenBank中收录的30株禽流感病毒（AIV）和30株新城疫病毒（NDV）全基因组序列间的差异,以及对应的HA基因片段和F基因片段上的差异进行了分析,发现2条片段上均存在保守序列,该保守序列可作为区分禽流感病毒和新城疫病毒的指纹序列;设计2对扩增简并引物,建立RT-PCR-Sequence技术,并获取目的基因片段序列。在此基础上,开发出禽A类传染病毒力检测软件,通过对该指纹序列的分析,不仅可以区分AIV和NDV,还能同步测定这些病毒的毒力情况。该技术对AIV和NDV标准株的测定结果与已知信息完全吻合,并能准确判定测序错误的基因序列。